VK3安全性評價ppt課件

1、維生素維生素K3的安全性評價的安全性評價化學(xué)藥物刺激性、過敏性和溶血性概述化學(xué)藥物刺激性、過敏性和溶血性概述 化學(xué)藥物制劑經(jīng)眼、耳、鼻、口腔、呼吸道、關(guān)節(jié)腔、皮膚、化學(xué)藥物制劑經(jīng)眼、耳、鼻、口腔、呼吸道、關(guān)節(jié)腔、皮膚、直腸、陰道、靜脈、動脈、肌肉、皮下、靜脈旁和鞘內(nèi)等非口直腸、陰道、靜脈、動脈、肌肉、皮下、靜脈旁和鞘內(nèi)等非口服途徑給藥，對用藥局部產(chǎn)生的毒性如刺激性和過敏性等服途徑給藥，對用藥局部產(chǎn)生的毒性如刺激性和過敏性等和和/或?qū)θ懋a(chǎn)生的毒性如過敏性和溶血性等）。它是臨床前或?qū)θ懋a(chǎn)生的毒性如過敏性和溶血性等）。它是臨床前安全性評價的組成部分。安全性評價的組成部分。 藥物的活性成分及其代謝

2、物、輔料、有關(guān)物質(zhì)及理化性質(zhì)藥物的活性成分及其代謝物、輔料、有關(guān)物質(zhì)及理化性質(zhì)如如pH值、滲透壓等均有可能引起刺激性和值、滲透壓等均有可能引起刺激性和/或過敏性和或過敏性和/或或溶血性的發(fā)生，而嚴(yán)重的毒性可以影響用藥的安全有效性，因溶血性的發(fā)生，而嚴(yán)重的毒性可以影響用藥的安全有效性，因此藥物在臨床應(yīng)用前應(yīng)研究其制劑在給藥部位使用后引起的局此藥物在臨床應(yīng)用前應(yīng)研究其制劑在給藥部位使用后引起的局部和部和/或全身毒性，以提示臨床應(yīng)用時可能出現(xiàn)的毒性反應(yīng)、毒或全身毒性，以提示臨床應(yīng)用時可能出現(xiàn)的毒性反應(yīng)、毒性靶器官、安全范圍、臨床研究監(jiān)測指標(biāo)并為臨床解毒或解救性靶器官、安全范圍、臨床研究監(jiān)測指標(biāo)并為臨

3、床解毒或解救措施提供參考，保障臨床用藥的安全有效。措施提供參考，保障臨床用藥的安全有效。實驗項目實驗項目1.刺激性皮膚刺激性試驗；眼刺激性試驗；注射給藥部位刺刺激性皮膚刺激性試驗；眼刺激性試驗；注射給藥部位刺激性試驗：血管刺激性實驗、肌肉刺激性實驗。）激性試驗：血管刺激性實驗、肌肉刺激性實驗。）2.過敏性過敏性3.溶血性實驗溶血性實驗試驗設(shè)計應(yīng)遵循隨機、對照、重復(fù)的原則。試驗設(shè)計應(yīng)遵循隨機、對照、重復(fù)的原則。試驗用藥物應(yīng)與用于人體的制劑一致試驗用藥物應(yīng)與用于人體的制劑一致觀察部位應(yīng)選擇給藥部位，同時觀察部位應(yīng)選擇給藥部位，同時考慮選擇周圍組織或可能暴露于考慮選擇周圍組織或可能暴露于受試藥物的部

4、位。受試藥物的部位。刺激性試驗刺激性試驗刺激性是指非口服藥物制劑給藥后對給藥部位產(chǎn)生的可逆性炎刺激性是指非口服藥物制劑給藥后對給藥部位產(chǎn)生的可逆性炎癥改變，若給藥部位產(chǎn)生了不可逆性的組織損傷則稱為腐蝕性。癥改變，若給藥部位產(chǎn)生了不可逆性的組織損傷則稱為腐蝕性。【實驗?zāi)康摹?觀察動物局部接觸受試物后所產(chǎn)生的刺激反應(yīng)，提示藥物臨床應(yīng)用后給藥部位可能出現(xiàn)的炎癥反應(yīng)、組織的變性和壞死等不良反應(yīng)。刺激性試驗設(shè)計中應(yīng)考慮的問題刺激性試驗設(shè)計中應(yīng)考慮的問題實驗動物的選擇實驗動物的選擇 依據(jù)觀察指標(biāo)和擬采用試驗?zāi)Ｐ瓦x擇試驗依據(jù)觀察指標(biāo)和擬采用試驗?zāi)Ｐ瓦x擇試驗動物，一般每個試驗選擇一種動物進(jìn)行評價。動物，一般每

5、個試驗選擇一種動物進(jìn)行評價。給藥的頻率與期限給藥的頻率與期限 給藥頻率和期限應(yīng)依據(jù)擬定臨床應(yīng)用的給藥頻率和期限應(yīng)依據(jù)擬定臨床應(yīng)用的情況來決定。重復(fù)給藥試驗，一般每天給藥一次，給藥期情況來決定。重復(fù)給藥試驗，一般每天給藥一次，給藥期限最長不超過限最長不超過4周。偶爾給藥的受試物可用單次給藥的方周。偶爾給藥的受試物可用單次給藥的方法進(jìn)行試驗。法進(jìn)行試驗?？赡嫘杂^察可逆性觀察 為明確毒性反應(yīng)的恢復(fù)情況，建議進(jìn)行停藥后為明確毒性反應(yīng)的恢復(fù)情況，建議進(jìn)行停藥后恢復(fù)期的觀察。局部毒性反應(yīng)的可逆性評價應(yīng)包括局部及恢復(fù)期的觀察。局部毒性反應(yīng)的可逆性評價應(yīng)包括局部及相關(guān)部位的反應(yīng)。相關(guān)部位的反應(yīng)。刺激性試驗設(shè)計

6、中應(yīng)考慮的問題刺激性試驗設(shè)計中應(yīng)考慮的問題受試物受試物 受試物應(yīng)與用于人體的制劑一致。受試物應(yīng)與用于人體的制劑一致。 對照組對照組 以溶媒和以溶媒和/或賦形劑作為陰性對照。必要時采用陽性或賦形劑作為陰性對照。必要時采用陽性對照或已上市制劑。對照或已上市制劑。 劑量劑量 劑量設(shè)計主要應(yīng)該考慮受試物濃度和總劑量。一般采劑量設(shè)計主要應(yīng)該考慮受試物濃度和總劑量。一般采用與臨床制劑相同濃度，設(shè)一個劑量組，可以通過改變給用與臨床制劑相同濃度，設(shè)一個劑量組，可以通過改變給藥頻率進(jìn)行劑量的調(diào)整，但皮膚給藥刺激性研究通過增加藥頻率進(jìn)行劑量的調(diào)整，但皮膚給藥刺激性研究通過增加涂敷厚度或加大涂布面積來提高給藥劑量是

7、不合適的。必涂敷厚度或加大涂布面積來提高給藥劑量是不合適的。必要時應(yīng)該進(jìn)行不同濃度的刺激性試驗。要時應(yīng)該進(jìn)行不同濃度的刺激性試驗。刺激性試驗設(shè)計中應(yīng)考慮的問題刺激性試驗設(shè)計中應(yīng)考慮的問題給藥方式給藥方式 7.1給藥方案應(yīng)盡量與臨床用藥方案一致。給藥方案應(yīng)盡量與臨床用藥方案一致。 7.2給藥途徑和給藥部位應(yīng)與臨床用藥一致。給藥途徑和給藥部位應(yīng)與臨床用藥一致。 7.3設(shè)計給藥容積，給藥速率和給藥頻率時，應(yīng)考慮所選用動設(shè)計給藥容積，給藥速率和給藥頻率時，應(yīng)考慮所選用動物模型給藥部位的解剖和生理特點。物模型給藥部位的解剖和生理特點。只要相互之間不影響且全身耐受性許可，則可在同一動物只要相互之間不影響且

8、全身耐受性許可，則可在同一動物身上進(jìn)行不同給藥途徑的刺激性試驗研究，并可在對側(cè)進(jìn)身上進(jìn)行不同給藥途徑的刺激性試驗研究，并可在對側(cè)進(jìn)行對照試驗。行對照試驗。刺激性試驗刺激性試驗皮膚刺激性試驗皮膚刺激性試驗 皮膚刺激性是指動物經(jīng)皮膚給予受試物后在皮膚上產(chǎn)皮膚刺激性是指動物經(jīng)皮膚給予受試物后在皮膚上產(chǎn)生的可逆性炎癥改變，若產(chǎn)生了不可逆性的組織損傷生的可逆性炎癥改變，若產(chǎn)生了不可逆性的組織損傷則為皮膚腐蝕性。則為皮膚腐蝕性。 目的目的 觀察動物皮膚接觸受試物后所產(chǎn)生的刺激反應(yīng)，觀察動物皮膚接觸受試物后所產(chǎn)生的刺激反應(yīng)，提示藥物臨床應(yīng)用后皮膚可能出現(xiàn)的炎癥、組織變性提示藥物臨床應(yīng)用后皮膚可能出現(xiàn)的炎癥、

9、組織變性和壞死等不良反應(yīng)。和壞死等不良反應(yīng)。 皮膚刺激性試驗皮膚刺激性試驗試驗方法試驗方法 試驗動物：首選家兔，動物數(shù)試驗動物：首選家兔，動物數(shù)48只，雌、雄各半。應(yīng)設(shè)賦形只，雌、雄各半。應(yīng)設(shè)賦形劑對照，采用同體左右側(cè)自身對比法。試驗前劑對照，采用同體左右側(cè)自身對比法。試驗前24小時對給藥區(qū)小時對給藥區(qū)通常在背部進(jìn)行脫毛處理可剪、剃或用適宜的脫毛劑）。通常在背部進(jìn)行脫毛處理可剪、剃或用適宜的脫毛劑）。去毛范圍左、右各去毛范圍左、右各3cm3cm。給藥前應(yīng)檢查去毛皮膚是否因去。給藥前應(yīng)檢查去毛皮膚是否因去毛而受損傷，有損傷的皮膚不宜進(jìn)行試驗。但若需考察破損皮毛而受損傷，有損傷的皮膚不宜進(jìn)行試驗。

10、但若需考察破損皮膚的刺激性，則可在用藥部位用砂紙磨或劃膚的刺激性，則可在用藥部位用砂紙磨或劃“井字并以滲血井字并以滲血為度。為度。 皮膚刺激性試驗皮膚刺激性試驗試驗方法試驗方法 受試物的給予：取受試物受試物的給予：取受試物0.5 ml直接涂布于一側(cè)已去毛的皮膚上，直接涂布于一側(cè)已去毛的皮膚上，然后用二層紗布然后用二層紗布2.5 cm2.5cm和一層玻璃紙或類似物覆蓋，和一層玻璃紙或類似物覆蓋，再用無刺激性膠布和繃帶加以固定；另一側(cè)涂布賦型劑做對照。再用無刺激性膠布和繃帶加以固定；另一側(cè)涂布賦型劑做對照。貼敷時間至少貼敷時間至少4小時。貼敷結(jié)束后，除去受試物并用溫水或無刺小時。貼敷結(jié)束后，除去受

11、試物并用溫水或無刺激性溶劑清潔給藥部位。多次給藥皮膚刺激性試驗應(yīng)連續(xù)在同激性溶劑清潔給藥部位。多次給藥皮膚刺激性試驗應(yīng)連續(xù)在同一部位給藥，每次給藥時間相同，貼敷期限一般不超過一部位給藥，每次給藥時間相同，貼敷期限一般不超過4周。周。 皮膚刺激性試驗皮膚刺激性試驗試驗方法試驗方法 動物觀察：在自然光線或全光譜燈光下觀察皮膚反應(yīng)。單次給動物觀察：在自然光線或全光譜燈光下觀察皮膚反應(yīng)。單次給藥皮膚刺激性試驗，在去除藥物后藥皮膚刺激性試驗，在去除藥物后30-60分鐘，分鐘，24、48和和72小時小時肉眼觀察并記錄涂敷部位有無紅斑和水腫等情況。對出現(xiàn)中度肉眼觀察并記錄涂敷部位有無紅斑和水腫等情況。對出現(xiàn)

12、中度及以上皮膚刺激性的動物應(yīng)在觀察期結(jié)束時對給藥局部進(jìn)行病及以上皮膚刺激性的動物應(yīng)在觀察期結(jié)束時對給藥局部進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。理組織學(xué)檢查。 刺激性試驗刺激性試驗眼刺激性試驗眼刺激性試驗眼刺激性是指動物經(jīng)眼給予受試物后在眼前部表面產(chǎn)眼刺激性是指動物經(jīng)眼給予受試物后在眼前部表面產(chǎn)生的可逆性組織改變，若產(chǎn)生了不可逆性的組織損傷生的可逆性組織改變，若產(chǎn)生了不可逆性的組織損傷則為腐蝕性。則為腐蝕性。 。 目的目的 觀察動物經(jīng)眼給予受試物后所產(chǎn)生的刺激性反應(yīng)，觀察動物經(jīng)眼給予受試物后所產(chǎn)生的刺激性反應(yīng)，提示藥物臨床應(yīng)用后眼可能出現(xiàn)的炎癥、組織變性和提示藥物臨床應(yīng)用后眼可能出現(xiàn)的炎癥、組織變性和壞死等不良

13、反應(yīng)。壞死等不良反應(yīng)。 眼刺激性試驗眼刺激性試驗試驗方法試驗方法試驗動物：首選家兔，動物數(shù)每組不少于試驗動物：首選家兔，動物數(shù)每組不少于3只。應(yīng)設(shè)置只。應(yīng)設(shè)置生理鹽水對照組，可采用同體左右側(cè)自身對比法。試生理鹽水對照組，可采用同體左右側(cè)自身對比法。試驗前驗前24小時內(nèi)對每只動物的雙眼進(jìn)行檢查包括使用小時內(nèi)對每只動物的雙眼進(jìn)行檢查包括使用熒光素鈉檢查）。有眼睛刺激癥狀、角膜缺陷和結(jié)膜熒光素鈉檢查）。有眼睛刺激癥狀、角膜缺陷和結(jié)膜損傷的動物不能用于試驗。損傷的動物不能用于試驗。 眼刺激性試驗眼刺激性試驗給藥方法：每只眼睛滴入給藥方法：每只眼睛滴入0.1ml或涂敷或涂敷0.1g受試物，然后輕合眼受試

14、物，然后輕合眼瞼約瞼約10s。一般不需沖洗眼睛。用藥周期應(yīng)根據(jù)藥物擬用于臨床。一般不需沖洗眼睛。用藥周期應(yīng)根據(jù)藥物擬用于臨床的情況來決定，多次給藥一般不超過的情況來決定，多次給藥一般不超過4周。周。 眼刺激性試驗眼刺激性試驗眼部觀察：單次給藥眼刺激試驗，在給藥后眼部觀察：單次給藥眼刺激試驗，在給藥后1、24、48和和72小時小時對眼部進(jìn)行檢查；多次給藥眼刺激試驗，每天給藥前以及最后對眼部進(jìn)行檢查；多次給藥眼刺激試驗，每天給藥前以及最后一次給藥后一次給藥后1、24、48和和72小時對眼部進(jìn)行檢查。如果在小時對眼部進(jìn)行檢查。如果在72小時小時未見任何刺激癥狀，試驗則可結(jié)束。如存在持久性損傷，有必未

15、見任何刺激癥狀，試驗則可結(jié)束。如存在持久性損傷，有必要延長觀察期限。但一般不超過要延長觀察期限。但一般不超過21天。天。 溶血性試驗溶血性試驗溶血性是指藥物制劑引起的血管外或血管內(nèi)溶血和紅細(xì)胞凝聚溶血性是指藥物制劑引起的血管外或血管內(nèi)溶血和紅細(xì)胞凝聚等反應(yīng)。溶血性反應(yīng)包括免疫性溶血與非免疫性溶血。免疫性等反應(yīng)。溶血性反應(yīng)包括免疫性溶血與非免疫性溶血。免疫性溶血是藥物通過免疫反應(yīng)產(chǎn)生抗體而引起的溶血，為溶血是藥物通過免疫反應(yīng)產(chǎn)生抗體而引起的溶血，為型和型和型過敏反應(yīng)；非免疫性溶血包括藥物為誘發(fā)因素導(dǎo)致的氧化性型過敏反應(yīng)；非免疫性溶血包括藥物為誘發(fā)因素導(dǎo)致的氧化性溶血和藥物制劑引起血液穩(wěn)態(tài)的改變而

16、出現(xiàn)的溶血和紅細(xì)胞凝溶血和藥物制劑引起血液穩(wěn)態(tài)的改變而出現(xiàn)的溶血和紅細(xì)胞凝聚等。聚等。 注射給藥部位刺激性試驗注射給藥部位刺激性試驗 注射給藥部位刺激性是指動物經(jīng)注射給予受試物后在注射部位產(chǎn)生的可逆性組織改變，若產(chǎn)生了不可逆性的組織損傷則為腐蝕性。目的 觀察動物注射受試物后所產(chǎn)生的刺激性反應(yīng)，提示藥物臨床應(yīng)用后注射部位可能出現(xiàn)的炎癥、組織變性和壞死等不良反應(yīng)。 注射給藥部位刺激性試驗注射給藥部位刺激性試驗試驗方法試驗方法 1.試驗動物：首選家兔，動物數(shù)每組不少于試驗動物：首選家兔，動物數(shù)每組不少于3只。應(yīng)設(shè)只。應(yīng)設(shè)生理鹽水對照，可采用同體左右側(cè)自身對比法。用藥生理鹽水對照，可采用同體左右側(cè)自身

17、對比法。用藥部位根據(jù)藥物的給藥途徑確定，可選用耳緣靜脈，耳部位根據(jù)藥物的給藥途徑確定，可選用耳緣靜脈，耳中心動脈其它動物可選用前、后肢靜脈及股動脈中心動脈其它動物可選用前、后肢靜脈及股動脈等），股和背部肌肉，側(cè)胸壁皮下組織，靜脈旁組織等），股和背部肌肉，側(cè)胸壁皮下組織，靜脈旁組織等。等。 2.給藥方法：按臨床使用情況給予受試物，給藥容積給藥方法：按臨床使用情況給予受試物，給藥容積和速率應(yīng)根據(jù)動物情況進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。給藥期限應(yīng)和速率應(yīng)根據(jù)動物情況進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。給藥期限應(yīng)根據(jù)藥物擬用于臨床的情況來決定，多次給藥一般不根據(jù)藥物擬用于臨床的情況來決定，多次給藥一般不超過超過7天。天。 注射給藥部位刺

18、激性試驗注射給藥部位刺激性試驗試驗方法試驗方法3.動物觀察：單次給藥刺激性試驗，在給藥后動物觀察：單次給藥刺激性試驗，在給藥后48-96小小時對動物和注射部位進(jìn)行肉眼觀察；多次給藥刺激性時對動物和注射部位進(jìn)行肉眼觀察；多次給藥刺激性試驗，每天給藥前以及最后一次給藥后試驗，每天給藥前以及最后一次給藥后48-96小時對動小時對動物和注射部位進(jìn)行肉眼觀察。觀察期結(jié)束時應(yīng)對部分物和注射部位進(jìn)行肉眼觀察。觀察期結(jié)束時應(yīng)對部分動物進(jìn)行給藥部位組織病理學(xué)檢查。留下的動物根據(jù)動物進(jìn)行給藥部位組織病理學(xué)檢查。留下的動物根據(jù)受試物的特點和刺激性反應(yīng)情況，繼續(xù)觀察受試物的特點和刺激性反應(yīng)情況，繼續(xù)觀察1421天天再

19、進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，以了解刺激性反應(yīng)的可逆程再進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，以了解刺激性反應(yīng)的可逆程度。度。4.結(jié)果評價：根據(jù)肉眼觀察和病理檢查的結(jié)果，對受結(jié)果評價：根據(jù)肉眼觀察和病理檢查的結(jié)果，對受試物使用的安全性進(jìn)行評價。試物使用的安全性進(jìn)行評價。 實驗材料實驗材料器材：注射器器材：注射器 1ml 5支。支。藥品：維生素藥品：維生素K3注射液、生理鹽水。注射液、生理鹽水。動物：動物：2.02.2 kg家兔家兔4只，雌雄各半。只，雌雄各半。 家兔股四頭肌法家兔股四頭肌法 方法與步驟方法與步驟取家兔取家兔4只只,每只家兔一側(cè)股四頭肌內(nèi)注射維生素每只家兔一側(cè)股四頭肌內(nèi)注射維生素K3注射液注射液1 ml，另

20、一側(cè)注射同體積生理鹽水。注射后觀察注射部位肌肉，另一側(cè)注射同體積生理鹽水。注射后觀察注射部位肌肉有無充血、水腫等反應(yīng)有無充血、水腫等反應(yīng), 注射后注射后48 h后用空氣栓塞法處死動物，后用空氣栓塞法處死動物，解剖取出股四頭肌，縱向切開，觀察注射部位肌肉的刺激反應(yīng)，解剖取出股四頭肌，縱向切開，觀察注射部位肌肉的刺激反應(yīng)，按肌肉刺激反應(yīng)分級標(biāo)準(zhǔn)計算相應(yīng)的反應(yīng)級，并進(jìn)行局部組織按肌肉刺激反應(yīng)分級標(biāo)準(zhǔn)計算相應(yīng)的反應(yīng)級，并進(jìn)行局部組織病理學(xué)檢查，提供病理照片。病理學(xué)檢查，提供病理照片。實驗結(jié)果與討論實驗結(jié)果與討論實驗結(jié)果與討論實驗結(jié)果與討論【結(jié)果與討論】【結(jié)果與討論】根據(jù)肉眼觀察和組織病理學(xué)檢查的結(jié)果進(jìn)

21、行綜合判斷。根據(jù)肉眼觀察和組織病理學(xué)檢查的結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。實驗材料實驗材料器材：注射器器材：注射器 1ml 5支。支。藥品：維生素藥品：維生素K3注射液、生理鹽水。注射液、生理鹽水。動物：動物：2.02.2 kg家兔家兔4只，雌雄各半。只，雌雄各半。 家兔耳殼法家兔耳殼法 是注射劑刺激性初試的一種方法。因家兔耳殼較薄，將藥物注是注射劑刺激性初試的一種方法。因家兔耳殼較薄，將藥物注射于耳殼皮下后，其刺激性反應(yīng)易于在透光檢查中發(fā)現(xiàn)，而不射于耳殼皮下后，其刺激性反應(yīng)易于在透光檢查中發(fā)現(xiàn)，而不需處死動物，試驗成本相對較低。需處死動物，試驗成本相對較低。方法與步驟方法與步驟取家兔取家兔4只，每只家兔一

22、側(cè)耳緣靜脈內(nèi)注射維生素只，每只家兔一側(cè)耳緣靜脈內(nèi)注射維生素K3注射液注射液1ml，另一側(cè)注射同體積生理鹽水。注射另一側(cè)注射同體積生理鹽水。注射48 96 h后觀察注射部位肌后觀察注射部位肌肉有無充血、水腫等反應(yīng)肉有無充血、水腫等反應(yīng), 觀察結(jié)束后用空氣栓塞法處死動物，觀察結(jié)束后用空氣栓塞法處死動物，進(jìn)行給藥部位組織病理學(xué)檢查，并提供病理照片。進(jìn)行給藥部位組織病理學(xué)檢查，并提供病理照片。【結(jié)果與討論】【結(jié)果與討論】根據(jù)肉眼觀察和組織病理學(xué)檢查的結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。根據(jù)肉眼觀察和組織病理學(xué)檢查的結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。溶血性試驗溶血性試驗?zāi)康哪康?考察藥物是否能夠引起血管外或血管內(nèi)溶血和紅細(xì)胞凝考察藥物是

23、否能夠引起血管外或血管內(nèi)溶血和紅細(xì)胞凝聚等反應(yīng)。聚等反應(yīng)。 凡是注射劑和可能引起免疫性溶血或非免疫性溶血反應(yīng)的凡是注射劑和可能引起免疫性溶血或非免疫性溶血反應(yīng)的其他藥物制劑均應(yīng)進(jìn)行溶血性試驗。其他藥物制劑均應(yīng)進(jìn)行溶血性試驗。 溶血性試驗溶血性試驗溶血性試驗方法溶血性試驗方法 1、常規(guī)的體外試管法、常規(guī)的體外試管法(肉眼觀察法肉眼觀察法) 1.1 血細(xì)胞懸液的配制血細(xì)胞懸液的配制取兔血取兔血(或羊血或羊血)數(shù)毫升數(shù)毫升,放入含玻璃珠的三角燒瓶中振搖放入含玻璃珠的三角燒瓶中振搖 10 分鐘分鐘,或用玻璃棒攪動血液或用玻璃棒攪動血液,除去纖維蛋白原除去纖維蛋白原,使成脫纖血液使成脫纖血液.參與參與

24、0.9%氯化鈉溶液約氯化鈉溶液約10 倍量倍量,搖勻搖勻,1000-1500r/min 離心離心 15 分鐘分鐘,除去上除去上清液清液,沉淀的紅細(xì)胞再用沉淀的紅細(xì)胞再用0.9%氯化鈉溶液按上述方法洗滌氯化鈉溶液按上述方法洗滌 2-3 次次,至上清液不顯紅色為止至上清液不顯紅色為止.將所得紅細(xì)胞用將所得紅細(xì)胞用0.9%氯化鈉溶液配成氯化鈉溶液配成 2%的混懸液的混懸液,供試驗用供試驗用. 溶血性試驗溶血性試驗溶血性試驗方法溶血性試驗方法 1、常規(guī)的體外試管法、常規(guī)的體外試管法(肉眼觀察法肉眼觀察法) 1.2 受試物的制備受試物的制備除另有規(guī)定外除另有規(guī)定外,臨床用于非血管內(nèi)途徑給藥的注射劑臨床用

25、于非血管內(nèi)途徑給藥的注射劑,以各藥品使以各藥品使用說明書規(guī)定的臨床使用濃度用說明書規(guī)定的臨床使用濃度,用用0.9%氯化鈉溶液氯化鈉溶液 1 3 稀釋后稀釋后作為供試品溶液作為供試品溶液;用于血管內(nèi)給藥的注射劑以使用說明書規(guī)定的用于血管內(nèi)給藥的注射劑以使用說明書規(guī)定的臨床使用濃度作為供試品溶液。臨床使用濃度作為供試品溶液。溶血性試驗溶血性試驗溶血性試驗方法溶血性試驗方法 1、常規(guī)的體外試管法、常規(guī)的體外試管法(肉眼觀察法肉眼觀察法) 1.3 試驗方法試驗方法取潔凈試管取潔凈試管 7 只只,進(jìn)行編號進(jìn)行編號,1-5 號管為供試品管號管為供試品管,6 號管為陰性對號管為陰性對照管照管,7 號管為陽性

26、對照管號管為陽性對照管.按下表所示依次加入按下表所示依次加入 2%紅細(xì)胞懸液、紅細(xì)胞懸液、0.9%氯化鈉溶液或蒸餾水氯化鈉溶液或蒸餾水,混勻后混勻后,立即置立即置 370.5的恒溫箱的恒溫箱中進(jìn)行溫育中進(jìn)行溫育,開始每隔開始每隔 15 分鐘觀察分鐘觀察 1 次次,1 小時后小時后,每隔每隔 1 小時觀小時觀察察 1 次次,一般觀察一般觀察 3 小時小時. 按下列順序加入各種溶液按下列順序加入各種溶液溶血性試驗溶血性試驗結(jié)果觀察結(jié)果觀察 若試驗中的溶液呈澄明紅色若試驗中的溶液呈澄明紅色,管底無細(xì)胞殘留或有少量紅細(xì)管底無細(xì)胞殘留或有少量紅細(xì)胞殘留胞殘留,表明有溶血發(fā)生表明有溶血發(fā)生;如紅細(xì)胞全部下沉如紅細(xì)胞全部下沉,上清液體無色澄明上清液體無色澄明,表明無溶血發(fā)生表明無溶血發(fā)生.若溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀若溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀,振搖后不振搖后不分散分散,表明有紅細(xì)胞凝聚發(fā)生表明有紅細(xì)胞凝聚發(fā)生.如有紅細(xì)胞凝聚的現(xiàn)象如有紅細(xì)胞凝聚的現(xiàn)象,可按下法可按下法進(jìn)一步判定是真凝聚還是假凝聚進(jìn)一步判定是真凝聚還是假凝聚.若凝聚物在試管振蕩后又能均若凝聚物在試管振蕩后又能均勻分散勻分散,或?qū)⒛畚锓旁谳d玻片上或?qū)⒛畚锓旁谳d玻片