吸光光度法新改

1、1四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學15.5 吸光度測量條件的選擇吸光度測量條件的選擇15.4 顯色反應和顯色條件的選擇顯色反應和顯色條件的選擇15.3 分光光度計分光光度計 15.2 光吸收定律光吸收定律15.1 吸光光度法概述吸光光度法概述15.6 吸光光度光法的應用吸光光度光法的應用2四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學15.1 吸光光度法概述吸光光度法概述 利用溶液顏色的深淺來測定溶液中有色物質利用溶液顏色的深淺來測定溶液中有色物質的濃度，這種測定方法稱為的濃度，這種測定方法稱為比色分析法比色分析法。 用分光光度計進行比色分析的方法稱為用分光光度計進行比色分析的方法稱為分分光光度法光光度法。15.1.1 光

2、的基本性質光的基本性質 光具有波粒二象性，即光具有波粒二象性，即波動性、粒子性波動性、粒子性3四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學根據(jù)波長的不同，可分為：根據(jù)波長的不同，可分為： 紫外光區(qū)紫外光區(qū)：200nm 380nm 可見光區(qū)可見光區(qū)：380nm 760nm 紅外光區(qū)：紅外光區(qū)：760nm 300m 描述其波動性的主要參數(shù)是：描述其波動性的主要參數(shù)是：波長波長，頻率頻率 ，光速光速c。三者間關系為：三者間關系為： c4四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學具有同一波長的光稱為具有同一波長的光稱為單色光單色光。光的光的粒子性粒子性：如：如光電效應光電效應，光的吸收和發(fā)射光的吸收和發(fā)射等等 即把光看成是帶有能量的微粒流

3、，這種即把光看成是帶有能量的微粒流，這種微粒叫做微粒叫做光子光子或者或者光量子光量子。光的能量。光的能量(E)決定決定于光的頻率和波長：于光的頻率和波長： cEhh 不同波長組成的光稱為不同波長組成的光稱為復合光復合光。(動畫動畫)白光白光(如日光如日光)是復合光，由是復合光，由380nm760nm 混合而成?；旌隙?。5四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學15.1.2 物質對光的選擇性吸收物質對光的選擇性吸收溶液為什么有顏色，其實質是什么？實溶液為什么有顏色，其實質是什么？實驗證明，溶液的顏色是驗證明，溶液的顏色是由于均勻分布在溶液由于均勻分布在溶液中的中的有色化合物有色化合物的質點的質點選擇性的吸收選

4、擇性的吸收了某種了某種顏色的光所造成的顏色的光所造成的。 兩種顏色的光若按適當比例混合，可兩種顏色的光若按適當比例混合，可以形成白光，這兩種光稱為以形成白光，這兩種光稱為互補色光互補色光。光的互補光的互補6四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學白光白光青藍青藍青青綠綠黃黃橙橙紅紅紫紫藍藍動畫 如如KMnO4吸收吸收綠色光綠色光，因此，因此KMnO4溶溶液呈現(xiàn)液呈現(xiàn)紫色紫色。7四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學15.1.3 吸收曲線吸收曲線 一束平行單色光照射溶液時，光的一一束平行單色光照射溶液時，光的一部分部分被吸收被吸收，一部分，一部分透過溶液透過溶液，一部分被器，一部分被器皿的表面皿的表面反射反射。IrItIaI

5、oIo = Ia + It + Ir8四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學分光光度法中：分光光度法中： Io = Ia + It 在吸光光度法中，測定時都是采用在吸光光度法中，測定時都是采用同同樣質量的比色皿樣質量的比色皿，反射光的強度反射光的強度基本上是基本上是不變的，其影響可以不變的，其影響可以相互抵消相互抵消。 空白調零空白調零 透過光強度透過光強度It與入射光強度與入射光強度Io之比稱為之比稱為透透光度光度或或透光率透光率。用。用 T 表示：表示：9四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學otIIT 或或%100%otIIT從上式可以看出：從上式可以看出：溶液的溶液的透光度愈大透光度愈大， 說明溶液對光的吸收愈小

6、，說明溶液對光的吸收愈小，濃度低濃度低；相反，相反，透光度愈小透光度愈小， 說明溶液對光的吸收愈大，說明溶液對光的吸收愈大，濃度高濃度高。 10四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學吸光度吸光度A：TIIAto1lglg若光全部透過溶液，若光全部透過溶液，Io= It ， A = 0 。若光幾乎全被吸收，若光幾乎全被吸收，It 0， A = 。 吸光度吸光度A也可以用來衡量溶液中吸光物也可以用來衡量溶液中吸光物質對波長為質對波長為的單色光的吸收程度，的單色光的吸收程度，值越大值越大，其吸收程度越大，其吸收程度越大，透光率越小透光率越小；反之亦然；反之亦然11四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學 將將不同波長的光不同波長

7、的光透過透過某一固定的溶液某一固定的溶液，測量，測量不同波長不同波長下溶液對光的下溶液對光的吸光度吸光度，作圖，作圖，圖圖15-2400480560640720 nm0.40.81.21.6AKMnO4 溶液的吸收曲線溶液的吸收曲線DCBA A、B、C、D代表不代表不同濃度下的吸收曲線。同濃度下的吸收曲線。12四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學(1)同一種物質對不同波長光的吸光度不同。同一種物質對不同波長光的吸光度不同。吸光度最大處對應的波長稱為吸光度最大處對應的波長稱為最大吸收波長最大吸收波長max。(KMnO4的的 最大最大 = 525 nm) (2)不同濃度的同一種物質，其吸收曲線形不同濃度的同一

8、種物質，其吸收曲線形狀相似狀相似max不變。而對于不同物質，它們的不變。而對于不同物質，它們的吸收曲線吸收曲線形狀形狀和和max則不同。則不同?？勺鳛槲镔|定可作為物質定性分析的依據(jù)之一。性分析的依據(jù)之一。吸收曲線的討論吸收曲線的討論13四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學(3)不同濃度的同一種物質，在某一定波長不同濃度的同一種物質，在某一定波長下吸光度下吸光度 A 有差異，有差異，A 隨濃度的增大而增隨濃度的增大而增大大 。此特性可作為物質。此特性可作為物質定量分析定量分析的依據(jù)。的依據(jù)。(4)在在max處處吸光度隨濃度變化的幅度最吸光度隨濃度變化的幅度最大大，所以，所以測定最靈敏測定最靈敏。吸收曲線是定

9、量分析。吸收曲線是定量分析中選擇中選擇入射光波長的重要依據(jù)。入射光波長的重要依據(jù)。14四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學15.1.4 吸光光度法的特點：吸光光度法的特點：1、靈敏度高，下限為、靈敏度高，下限為10-510-6 molL-1。適。適于微量分析。于微量分析。2、準確度較高，相對誤差為、準確度較高，相對誤差為2% 5%。3、操作快速簡便，易于掌握。、操作快速簡便，易于掌握。4、應用廣泛。、應用廣泛。15四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學15.2 溶液對光的吸收定律溶液對光的吸收定律 實驗證明：若保持入射光的波長不變，實驗證明：若保持入射光的波長不變，溶液對光吸收的程度與溶液對光吸收的程度與溶液的濃度、液

10、層厚溶液的濃度、液層厚度度有關。有關。15.2.1 溶液對光的吸收定律溶液對光的吸收定律一、朗伯定律一、朗伯定律：當：當 、c、T 一定時，溶液一定時，溶液的的吸光度吸光度與液層的與液層的厚度厚度成正比。成正比。動畫動畫16四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學數(shù)學表達式：數(shù)學表達式：bKA1K1：比例常數(shù)，：比例常數(shù)，與與 、c、T有關。有關。b：溶液厚度：溶液厚度二、比爾定律二、比爾定律比爾定律比爾定律：當當 、b 和和 T一定時，溶液的一定時，溶液的吸吸光度光度與溶液的與溶液的濃度濃度成正比。成正比。動畫動畫數(shù)學表達式：數(shù)學表達式： A = K2 c17四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學三、朗伯三、朗伯比爾定律

11、比爾定律(同時考慮溶液濃度和同時考慮溶液濃度和液層厚度的影響液層厚度的影響)一束平行單色光通過溶一束平行單色光通過溶液，當液，當 和和T一定時，其一定時，其吸光度吸光度與與溶液的溶液的濃度濃度和和液層厚度液層厚度成正比。成正比。數(shù)學表達式數(shù)學表達式： A = K b c適應范圍廣。適應范圍廣。18四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學 當當c用用gL-1表示，表示，b用用cm表示時，表示時，K用用a表表示，稱為示，稱為吸光系數(shù)吸光系數(shù)，其單位為，其單位為 L(g.cm)-1 ，則：則：四、比例系數(shù)四、比例系數(shù)K1、吸光系數(shù)、吸光系數(shù)aA = a b c a是吸光物質在一定的條件下的特性常是吸光物質在一定的條

12、件下的特性常數(shù)，數(shù)，與本性有關，與吸光物質的濃度和液與本性有關，與吸光物質的濃度和液層厚度無關層厚度無關。19四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學 c用用molL-1表示，表示，b用用cm表示時，表示時，K用用表表示，稱為摩爾吸光系數(shù)，其單位為示，稱為摩爾吸光系數(shù)，其單位為L(mol.cm)-1。則：。則：2、摩爾吸光系數(shù)、摩爾吸光系數(shù)A =b c摩爾吸光系數(shù)的討論(1) 是吸收物質在一定波長和溶劑條件下的是吸收物質在一定波長和溶劑條件下的特征常數(shù)，不隨濃度特征常數(shù)，不隨濃度c和液層厚度和液層厚度b的改變而的改變而改變改變，僅與吸收物質本身的性質有關；，僅與吸收物質本身的性質有關；20四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)

13、大學(2)同一吸光物質在不同波長下的同一吸光物質在不同波長下的值是不同值是不同的。的。在最大吸收波長在最大吸收波長max處的摩爾吸光系數(shù)處的摩爾吸光系數(shù)，常以，常以max表示，表明該表示，表明該吸收物質最大限度吸收物質最大限度的吸光能力的吸光能力，也反映了光度法測定該物質可，也反映了光度法測定該物質可能達到的最大靈敏度。能達到的最大靈敏度。 (3)max越大表明該物質的吸光能力越強，用越大表明該物質的吸光能力越強，用光度法測定該物質的靈敏度越高。光度法測定該物質的靈敏度越高。21四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學(4)在數(shù)值上等于濃度為在數(shù)值上等于濃度為1molL-1、液層厚度、液層厚度為為1cm時該溶

14、液在某一波長下的吸光度。時該溶液在某一波長下的吸光度。 104反應靈敏度反應靈敏度低低104 5104反應靈敏度反應靈敏度中中5104 105反應靈敏度反應靈敏度超高超高當當 c = 1molL-1，b = 1cm 時時, A =22四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學【例】【例】：有一濃度為：有一濃度為1.0 g/ml Fe2+的溶液，以的溶液，以鄰二氮菲鄰二氮菲顯色后顯色后，在比色皿厚度為在比色皿厚度為 2cm、波長、波長510nm處測得吸光度為處測得吸光度為0.380，計算，計算( 1 )透光度透光度T；(2)吸光系數(shù)吸光系數(shù)a；(3)摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù) 。解解(1)T10-A10-0.380

15、0.417 (2)(3)1123109 . 1100 . 10 . 2380. 0 cmgLbcAa1143101 . 185.55100 . 10 . 2380. 0 cmmolLbcA 23四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學NN3Fe2+NNFeNNNN+2+24四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學注意：注意：因為因為cbIITAto lg1lg 在吸光光度在吸光光度法中，法中，b是一定的，是一定的， A與與c成正比，但成正比，但T 不與不與 c成正比。成正比。25四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學五、吸光度的加合性五、吸光度的加合性A總總 = Ai =1b1c1 + 2b2c2 + nbncn 總的吸光度等于各個吸光物

16、質的吸光總的吸光度等于各個吸光物質的吸光度之和。度之和。或或溶液的吸光度應等于溶液中各溶液的吸光度應等于溶液中各組分的吸光度之和。組分的吸光度之和。(組分間沒有干擾組分間沒有干擾)A4 A3 A2 A126四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學溶液中多組分測定溶液中多組分測定)()()()()()()()(222111ybcyxbcxAybcyxbcxA 27四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學 一、一、 1、單色光不純，導致負偏差。、單色光不純，導致負偏差。cA標準工作曲線圖標準工作曲線圖正誤差正誤差負誤差負誤差2、散射光的影響，膠、散射光的影響，膠體、乳濁液或懸濁液由體、乳濁液或懸濁液由于散射的作用使吸光度于散射的

17、作用使吸光度增大，或入射光不是垂增大，或入射光不是垂直通過比色皿產(chǎn)生正偏直通過比色皿產(chǎn)生正偏差。差。28四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學1、吸光質點的相互作用，濃度較大時，產(chǎn)、吸光質點的相互作用，濃度較大時，產(chǎn)生負偏差，生負偏差， (c 12 Fe(OH)3棕橙色棕橙色 沉淀沉淀黃色黃色紫紅色紫紅色，既要防止被測離子生成沉淀，既要防止被測離子生成沉淀，又需防止有色配合物離解。又需防止有色配合物離解。有效的方法有效的方法是加入緩沖溶液是加入緩沖溶液(考慮干擾考慮干擾)磺基水楊酸37四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學，有機溶劑會降低有色物的離解度，有機溶劑會降低有色物的離解度，從而提高從而提高 顯色反應的靈敏度。顯

18、色反應的靈敏度。 ，使干擾離子不顯色。，使干擾離子不顯色。，通過實驗找出適宜的溫度范圍。，通過實驗找出適宜的溫度范圍。，在顏色穩(wěn)定的時間范圍內進行比，在顏色穩(wěn)定的時間范圍內進行比色測定。色測定。38四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學 ，測，測Ni2+時，時，F(xiàn)e2+ 有有干擾，加入氧化劑，干擾，加入氧化劑， Fe2+ Fe3+ . ，用萃取、沉淀、電解、離，用萃取、沉淀、電解、離子交換等方法。子交換等方法。還可選擇還可選擇和和等方法來消除共存離子的干擾。等方法來消除共存離子的干擾。 ，如用，如用SCN-測定測定Co2+時，時，F(xiàn)e3+有干擾，加入有干擾，加入 F- ，F(xiàn)e3+ + 6F- = FeF63

19、- ， Fe3+ 被掩蔽。被掩蔽。 39四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學 離子交換法用于離子交換法用于Fe3+、Al3+分離時先分離時先用用HCl溶液處理試液，使鐵、鋁分別以溶液處理試液，使鐵、鋁分別以FeCl63-、Al3+形態(tài)存在。然后經(jīng)過形態(tài)存在。然后經(jīng)過陽離子樹陽離子樹脂脂交換柱，此時交換柱，此時Al3+留在柱上，而留在柱上，而FeCl63-流流出柱子，從而達到分離的目的。出柱子，從而達到分離的目的。40四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學 色譜分離法，若在充填硅膠、活性氧色譜分離法，若在充填硅膠、活性氧化鋁、纖維素等載體的柱子上進行，則稱化鋁、纖維素等載體的柱子上進行，則稱為為柱上色譜分離法柱上色譜分離

20、法；若用濾紙作載體，則；若用濾紙作載體，則稱為稱為紙上色譜分離法紙上色譜分離法。 溶劑化合物溶劑化合物萃取體系，例如萃取體系，例如磷酸三丁酯磷酸三丁酯萃取萃取FeCl3。 某些無機化合物某些無機化合物萃取體系，例如萃取體系，例如CCl4萃萃取取I2。41四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學 鉬酸銨法鉬酸銨法(測測 P、 Si、W)， 過氧化氫法過氧化氫法(測測V5、Ti4)(主要使用主要使用) 鉻天菁鉻天菁S(CAS)、苯基熒光酮、苯基熒光酮( PF )偶氮胂偶氮胂III等等42四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學：鄰二氮雜菲鄰二氮雜菲(測測Fe)等等4、帶含硫基團的螯合劑：、帶含硫基團的螯合劑：雙硫腙雙硫腙(測測C

21、u、Pb、Zn、Cd、Hg等等)43四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學15.5.1、選擇合適波長的入射光、選擇合適波長的入射光 例測例測KMnO4，選選 最大最大 = 525 nm。但。但在有在有K2Cr2O7存在時，則應存在時，則應選選 = 545nm。44四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學原則：使溶液的吸光度能真正反映待測物原則：使溶液的吸光度能真正反映待測物的濃度。的濃度。 在吸光度測量中，作為比較的溶液或溶在吸光度測量中，作為比較的溶液或溶劑稱為劑稱為參比溶液參比溶液或或空白溶液空白溶液。15.5.2選擇適當?shù)膮⒈热芤?。選擇適當?shù)膮⒈热芤骸?5四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學(1) 試樣、試劑、顯色劑試樣、試劑、

22、顯色劑都無色都無色時，用時，用。 (2) 試樣無色試樣無色，試劑、顯色劑有色試劑、顯色劑有色，采用，采用。(3)試樣有吸收試樣有吸收，而，而顯色劑等無色顯色劑等無色，可采用，可采用不加顯色劑的試樣為參比。不加顯色劑的試樣為參比。(4)均有色均有色，有吸收，對試樣加入掩蔽劑，有吸收，對試樣加入掩蔽劑，褪色后再加顯色劑等作為參比。褪色后再加顯色劑等作為參比。46四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學15.5.3 吸光度讀數(shù)范圍的選擇吸光度讀數(shù)范圍的選擇 透光率讀數(shù)的準確度是儀器精度的主透光率讀數(shù)的準確度是儀器精度的主要指標。測定結果的精度常用濃度的相對要指標。測定結果的精度常用濃度的相對誤差誤差dc/c表示。表

23、示。bcTA lgbdcdTT.Tlnd.Tlgd 434043400.434lgdcddATTTAc47四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學若透光率刻度的讀數(shù)的若透光率刻度的讀數(shù)的絕對誤差絕對誤差為為T=1%，用不同的用不同的T代入上式，可得相應濃度測量代入上式，可得相應濃度測量的相對誤差的相對誤差c/c，作圖，作圖，0.434lgccTTT由圖可見：由圖可見：48四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學1、T 在在15%65%(A= 0.80.2)范圍，相對范圍，相對誤差較小。誤差較小。2、T = 36.8%(A =0.434)，相對誤差最小。，相對誤差最小。(%)cc 0.20.40.60.81.00246810T

24、0.36849四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學控制吸光度在適宜的范圍內控制吸光度在適宜的范圍內 (1) 控制試樣的量或溶液的稀釋程度來控制試樣的量或溶液的稀釋程度來控控制溶液濃度制溶液濃度。 (2) 選擇選擇不同厚度不同厚度的比色皿。的比色皿。50四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學【例【例】某一有色溶液在某一有色溶液在2.0cm的吸收皿中，的吸收皿中，測得透光率測得透光率T1，若儀器透光度的絕對誤，若儀器透光度的絕對誤差差T0.5，計算，計算(1)測定的濃度的相對誤差測定的濃度的相對誤差c/c(2)為使測得吸光度在最適讀數(shù)范圍內，溶為使測得吸光度在最適讀數(shù)范圍內，溶液應稀釋或濃縮多少倍？液應稀釋或濃縮多少倍？(

25、3)若濃度不變，而改變比色皿厚度若濃度不變，而改變比色皿厚度(0.5cm， 1.0cm，2.0cm，3.0cm)，則應選擇那種厚度，則應選擇那種厚度的吸收皿最合適，此時的吸收皿最合適，此時c/c為多少？為多少？51四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學解解 (1)%.lg.%.TlgTT.cc110100105043404340 (2)A=-lgT=-lg1%=2設有色溶液原始濃度為設有色溶液原始濃度為c，當，當b一定時，一定時，AbcK c，要使，要使A0.20.8，則，則80.20.8 221020ccccc即稀釋即稀釋2.510倍倍52四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學 (3)當當c一定時即一定時即c，AbcK

26、 b，要使，要使A0.20.8，則，則80.20.8 221020bbbbbb=2cm 0.20.8 bb=0.5cm%.lg.%.TlgTT.cc41316031605043404340 -0.50.520.5 100.3162.0AT53四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學1、目視比色法：、目視比色法：用眼睛比較溶液顏色深淺用眼睛比較溶液顏色深淺以確定物質含量。以確定物質含量。(也叫也叫標準色階法標準色階法)1 2 3 4 5 標準系列溶液標準系列溶液待測溶液待測溶液54四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學目視比色法的原理是根據(jù)朗伯目視比色法的原理是根據(jù)朗伯比耳定律比耳定律 222111cbcb 相同條件下顯色且

27、是同一種有色物質相同條件下顯色且是同一種有色物質，所以：，所以：21因為液層厚度相等：因為液層厚度相等：b1=b2，所以濃度相等：所以濃度相等：c1=c2 55四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學目視比色法的目視比色法的是：是：1、儀器簡單，操作簡便，適宜于大批試樣、儀器簡單，操作簡便，適宜于大批試樣分析。分析。2、測定的靈敏度較高，適宜于稀溶液中微、測定的靈敏度較高，適宜于稀溶液中微量元素的測定。量元素的測定。3、復合光、復合光 白光下進行測定，因此有白光下進行測定，因此有些顯色反應不符合朗伯些顯色反應不符合朗伯比耳定律時比耳定律時，仍可用目視法測定。，仍可用目視法測定。56四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學目視

28、比色法的目視比色法的缺點缺點是：是：1、有色溶液一般不太穩(wěn)定，常常臨時配制、有色溶液一般不太穩(wěn)定，常常臨時配制一套標準色階，較麻煩費時。一套標準色階，較麻煩費時。2、依靠人的眼睛來觀察顏色深度，有主觀、依靠人的眼睛來觀察顏色深度，有主觀誤差，準確度不高，相對誤差約為誤差，準確度不高，相對誤差約為520%。 57四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學銨的比色測定銨的比色測定標準系列法：標準系列法：原理：銨的測定是利用原理：銨的測定是利用NH4+與奈氏試劑與奈氏試劑(K2HgI4)作用，生成棕黃色溶膠。作用，生成棕黃色溶膠。 HgNH4+ + 2HgI42- + 4OH- = O NH2I + 7I- +3H2

29、O Hg 溶液的顏色深淺與溶液的顏色深淺與NH4+濃度成正比。濃度成正比。碘化二汞基銨碘化二汞基銨(碘碘化氨基氧汞化氨基氧汞)58四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學用分光能力強的用分光能力強的或或進行分進行分光，得到的光更近似于單色光，光，得到的光更近似于單色光，59四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學 先配制先配制一系列一系列標準溶液標準溶液，在，在最大吸收波長最大吸收波長處，測出它們的吸光度，作圖，同條件測處，測出它們的吸光度，作圖，同條件測未未知液的吸光度知液的吸光度，從圖中查出未知液的濃度。，從圖中查出未知液的濃度。cA標準工作曲線圖標準工作曲線圖Axcxc1c2c3c4c5A1A2A3A4A560四川農(nóng)業(yè)

30、大學四川農(nóng)業(yè)大學cA標準工作曲線圖標準工作曲線圖同學們在制作標同學們在制作標準曲線時有如下準曲線時有如下幾種情況：幾種情況： cA標準工作曲線圖標準工作曲線圖cA標準工作曲線圖標準工作曲線圖61四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學 同條件下分別測定未知液與標準溶液同條件下分別測定未知液與標準溶液的吸光度的吸光度和和，根據(jù)朗伯，根據(jù)朗伯-比爾定律，應比爾定律，應有下式：有下式：xxcbA標標cbA標標ccAAxx/因為：因為：所以：所以：標標cAAcxx62四川農(nóng)業(yè)大學四川農(nóng)業(yè)大學例例：將：將1.000g鋼樣用鋼樣用HNO3溶解，鋼中的錳溶解，鋼中的錳用用KIO4氧化成高錳酸鉀，并稀釋到氧化成高錳酸鉀，并稀釋到100.0mL，用，用1.00