淀粉的國標(biāo)測定方法

1、淀粉的國標(biāo)測定方法測定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的測定方法酶-直接法一、酶水解法 1.原理樣品經(jīng)除去脂肪及可溶性糖類后,其中淀粉用淀粉酶水解成雙糖,再用鹽酸將雙糖水解成單糖,最后按 復(fù)原糖測定,并折算成淀粉.2 .適用范圍GB5009.9-85 ,適用于所有含淀粉的食物.3 .儀器1回流冷凝器2水浴鍋4.試齊I除特殊說明外,實(shí)驗(yàn)用水為蒸儲水,試劑為分析純.（1） 乙醛（2） 0.5 % 淀粉酶溶液：稱取淀粉酶Sigma公司,E.C3.2.1.1 0.5 g ,加100ml水溶解,參加數(shù) 滴甲苯或三氯甲烷,預(yù)防長霉,貯于冰箱中.注：配成溶液的淀粉酶破壞很快,最好鄰

2、用現(xiàn)配.3碘溶液：稱取3.6 g碘化鉀溶于20 ml水中,參加1.3 g碘,溶解后加水稀釋至 100 ml.（4） 85 % 乙醇.5其余試劑同?蔗糖測定方法?5 .操作方法5.1 樣品處理稱取25 g樣品,置于放有折疊濾紙的漏斗內(nèi),先用 50 ml乙醛分5次洗除脂肪注：如果脂肪含量 少,此步驟可免,再用約 100 ml85叱醇洗去可溶性糖類注：此步驟目的是去除可溶性糖,將殘 留物移入250 ml燒杯內(nèi),并用50ml水洗濾紙及漏斗,洗液并入燒杯內(nèi),將燒杯置沸水浴上加熱 15 min, 使淀粉糊化,放冷至 60 C以下,加20ml淀粉酶溶液,再5560 c保溫1h,并時時攪拌注：溫度過 高,淀粉

3、酶的活性破壞.然后取1滴此液加1滴碘溶液,應(yīng)不現(xiàn)蘭色,假設(shè)顯蘭色,再加熱糊化并加20ml 淀粉酶溶液,繼續(xù)保溫,直至加碘不顯蘭色為止.加熱至沸,冷后移入250ml容量瓶中,并加水至刻度,混勻,過濾.注：此時淀粉已水解成雙糖,過濾可去除殘?jiān)屠w維素棄去初濾液,取50 ml濾液,置于250ml錐形瓶中,加5 ml 6 mol/L 鹽酸,裝上回流冷凝器,在沸水浴中回流1h,冷后加2滴甲基紅指示劑,用5mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性,溶液轉(zhuǎn)入100 ml容量瓶中,洗滌錐形瓶,洗液并入100ml 容量瓶中,加水至刻度,混勻備用.淀粉在沸水浴條件下糊化是淀粉水解的第一步反響,然后在淀粉 酶的作用下,分解

4、成短鏈淀粉、糊精、麥芽糖等低聚合的糖,所以在淀粉酶解后需用酸進(jìn)一步水解得到 葡萄糖.5.2 測定按?復(fù)原糖的測定方法 操作.同時量取 50 ml水及與樣品處理時相同量的淀粉酶溶液,按同一方法做 試劑空白試驗(yàn).6 .計算(A1-A2)X1 =X0.9m1xV1 、,V3x V2100X100X1000(D式中：X1-樣品中淀粉的含量,%A1-測定用樣品中復(fù)原糖的含量.MgA2-試劑空白中復(fù)原糖的含量,mg0.9-復(fù)原糖(以葡萄糖計)換算成淀粉的換算系數(shù)；ml-稱取樣品質(zhì)量,g；V1-水解用樣品溶液體積,ml；V2-樣品定容總體積,ml;V3-測定用樣品處理液的體積,ml.二、酸水解法1 .原理樣

5、品經(jīng)除去脂肪及可溶性糖類后,其中淀粉用酸水解成具有復(fù)原性的單糖, 然 后按復(fù)原糖測定,折算成淀粉.2 .適用范圍本法適用于含淀粉的食物3 .儀器(1)水浴鍋.(2) 高速組織搗碎機(jī)：1200 rpm.(3)皂化裝置并附250 ml錐形瓶.4 .試齊1J除特殊說明外,實(shí)驗(yàn)用水為蒸儲水,試劑為分析純.(1)乙醴.(2) 85%乙醇溶液.(3) 6mol/L鹽酸溶液.(4) 10mol/L氫氧化鈉溶液.(5) 2.5mol/L氫氧化鈉溶液.(6)甲基紅指示液：0.2 %乙醇溶液(7)精密pH試紙.(8) 20 %乙酸鉛溶液,(9) 10 %硫酸鈉溶液.(10) 其余試劑同復(fù)原糖的測定.5 .操作方法

6、5.1 樣品處理5.1.1 糧食、豆類、糕點(diǎn)、餅干等較枯燥的樣品：稱取2.05.0 g磨碎過40目篩的樣品,置于放有慢速濾紙的漏斗中,用 30ml乙醴分三次洗去樣品中脂 肪,棄去乙醴.再用150 ml 85 %乙醇溶液分?jǐn)?shù)次洗滌殘?jiān)?除去可溶性糖類 物質(zhì).并濾干乙醇溶液,以100ml水洗滌漏斗中殘?jiān)⑥D(zhuǎn)移至250ml錐形瓶中, 參加30 ml 6 mol/L 鹽酸,接好冷凝管,置沸水浴中回流 2h.回流完畢后, 立即置流水中冷卻.待樣品水解冷卻后,參加2滴甲基紅指示劑,先以40 %氫氧化鈉溶液調(diào)至黃色,再以6mol/L鹽酸校正至水解液剛變紅色為宜.假設(shè)水 解液顏色較深,可用精密pH試紙測試,使

7、樣品水解液的pH約為7.然后加20 ml 20%乙酸鉛溶液,搖勻,放置10 min.再加20 ml 10 %硫酸鈉溶液,以除 去過量的鉛.搖勻后將全部溶液及殘?jiān)D(zhuǎn)入 500ml容量瓶中,用水洗滌錐形瓶, 洗液合并于容量瓶中,加水稀釋至刻度.過濾,棄去初濾液20 ml,濾液供測定用.5.1.2 蔬菜、水果、各種糧豆含水熟食制品：按 1: 1加水在組織搗碎機(jī)種搗 成勻漿(蔬菜、水果需先洗凈、涼干,取可食局部).稱取510g勻漿(液體樣品可直接量取),于250 ml錐形瓶中,加30 ml乙醴振搖提取(除去樣 品中脂肪),用濾液過濾去除乙醴,再用 30ml乙醴淋洗兩次,棄去乙醴.以 下按5.1.1自&

8、quot;再用150 ml 85%乙醇溶液"起依法操作.5.2 測定按復(fù)原糖的測定步驟操作.6 .計算(A3-A4)1001 )X0.9X2=mx 50 x x 1000250100式中：X2-樣品中淀粉的含量,%A3-測定用樣品中復(fù)原糖的含量.mg；A4-試劑空白中復(fù)原糖的含量,mgm2-稱取樣品質(zhì)量,g；V2-測定用樣品處理液的體積,ml.500-樣品液總體積,ml;0.9-復(fù)原糖(以葡萄糖計)換算成淀粉的換算系數(shù);(注：酸水解能分解局部半纖維素,形成具有復(fù)原力的單糖,如木糖、阿拉伯糖等,可影響分析結(jié)果. 為了比擬正確地測定食物中淀粉含量,建議采用淀粉酶糖化淀粉,除去不可溶性的殘

9、渣后,再用酸水解 使之成為葡萄糖,然后測定其含量,最后換算成淀粉.三、可消化淀粉和抗性淀粉的測定方法(酶-直接法)1 .原理樣品先在37c下經(jīng)a-淀粉酶水解,使可消化淀粉轉(zhuǎn)化成葡萄糖,用80%L醇提取,未水解的抗性淀粉局部經(jīng)沸水浴凝膠化后,在淀粉葡萄糖甘酶轉(zhuǎn)化成葡萄糖,用葡萄糖氧化酶法分別測定葡萄糖含量,再換算成可消化淀粉和抗性淀粉含量.2 .適用范圍參考Englyst和Champ的方法.適用于所有含淀粉食物的測定.3 .儀器(1)恒溫水浴箱(2)溫箱(3) 分光光度計4.試劑除特殊說明外,實(shí)驗(yàn)用水為蒸儲水,試劑為分析純.(1) 0.1mol/L 乙酸緩沖液(pH 5.0):稱取14.28 g

10、 乙酸鈉(CH3COONJ3H2O溶于水中,力口入2.7ml冰乙酸,并調(diào)節(jié) pH 5.0,用水定容至1 L.(2)酶溶液：分別稱取 4g “-淀粉酶溶液(a-amylase , Sigma公司)、1g淀粉葡萄糖普酶溶液 (amyloglucosidase ,Sigma 公司)和 0.3g 轉(zhuǎn)換酶(invertase , Sigma公司)溶液于研缽中,用 0.1mol/L 乙酸緩沖液研磨制成勻漿,并調(diào)節(jié)體積為100ml.3000rpm離心5min ,取上清液.(3)淀粉葡萄糖普酶溶液：稱取2 g淀粉葡萄糖普酶(amyloglucosidase, Sigma公司),加100 ml0.1mol/L乙

11、酸緩沖液研磨成勻漿.3000 rpm離心5 min ,取上清液.(4) 80%乙醇：800ml乙醇加水至1L.(5) 4mol/L氫氧化鉀溶液：稱取 224g氫氧化鉀,用水溶解并加至1L.(6) 2 mol/L 乙酸溶液：量取冰乙酸 118ml,加水至1L,混勻.(7)其它試劑同?葡萄糖測定方法?.5 .操作步驟5.1 樣品處理：測定 RS1時,直接稱取樣品0.2g1g；測定RS2時,選用生的樣品,先研磨打碎后再稱 取樣品0.2g1g,.測定RS3時,那么先將樣品加水煮沸至少15min,使之凝膠化,然后取出放入 4c冰箱冷藏過夜,再混勻后稱取樣品0.2g1g (需折合水分).參加 10 ml酶

12、溶液,輕輕混勻.37C溫箱或水浴中酶解16 ho參加40 ml無水乙醇,使乙醇含量終濃度為80%充分搖勻.靜置30min, 3000 rpm離心15min,上清液轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中.用80%L醇反復(fù)洗滌沉淀23次.合并上清液并用乙酸 緩沖液定容,供測定可消化淀粉用.5.2 水解抗性淀粉：將經(jīng)反復(fù)洗滌的沉淀置于100c枯燥,然后用15ml水將沉淀轉(zhuǎn)移至錐形瓶中,沸水浴中加熱30min.冷卻至室溫.參加 1倍體積的4 mol/L氫氧化鉀溶液,使氫氧化鉀終濃度為2mol/L ,室溫下混合30min.(注：在樣品凝膠化后,2mol/L氫氧化鉀的作用是進(jìn)一步破壞淀粉結(jié)構(gòu),如果氫氧 化鉀的濃度過高或

13、過低,不利于結(jié)構(gòu)破壞,操作中需注意.)參加約 30ml2 mol/L乙酸溶液,調(diào)節(jié)pH 為5.0 ,再參加淀粉葡萄糖普酶溶液5 ml , 65C70c水浴90min.冷卻后將水解液轉(zhuǎn)移至 100ml容量瓶中,用乙酸緩沖液定容至刻度.過濾.5.3 測定：吸取0.5ml上清液(5.1 )和抗性淀粉水解液(5.2),根據(jù)葡萄糖氧化酶法分別測定葡萄糖 含量(從測定步驟開始).同時做葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線.6 .計算根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線得出上清液中和抗性淀粉水解液中葡萄糖濃度,再根據(jù)稀釋定容體積和稱樣量分別計算出可消化淀粉和抗性淀粉含量.(As- Ab) X VX FX=0.5 Xm0 0.1 X 0.9式中：X

14、-樣品中可消化淀粉/抗性淀粉含量,g/100g;As-由標(biāo)準(zhǔn)回歸方程求出的樣品測定管中葡萄糖含量,mgAb-由標(biāo)準(zhǔn)回歸方程求出的樣品空白管中葡萄糖含量,mgV-樣品定容體積,ml ；F-稀釋倍數(shù)0.5-測定時吸取樣品提取液的體積,ml;m-樣品質(zhì)量,g； 0.1-將mg/g轉(zhuǎn)換成g/100g的系數(shù).7 .考前須知7.1 Eglyst根據(jù)抗性淀粉的分類,對樣品處理采用不同的處理方法.讀者可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇相應(yīng)的方 法.7.2 Eglyst測定抗性淀粉時,模擬胃腸道內(nèi)環(huán)境,根據(jù)“-淀粉酶水解時間長短,將 20min時已水解的淀粉稱為快消化淀粉,20min120min水解的淀粉稱為慢消化淀粉,120min后仍沒有水解的淀粉稱為抗 性淀粉.有的學(xué)者指出在體內(nèi)