實驗室經(jīng)常使用緩沖鹽配制

1、實驗室經(jīng)常使用緩沖液配置方案1)1 M Tris-HCl ,組份濃度:1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方式：1 .稱量12L1 g Tris置于1 L燒杯中°2 .加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。3 .按下表里加入濃鹽酸調(diào)劑所需要的pH值。PH值濃HC1約 70nd約 60ml約 42ml4 .將溶液定容至1 Lc5 .高溫高樂滅菌后，室溫保留。注意：應使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的轉(zhuǎn)變不同專門大，溫度每升高 溶液的pH值大約降低個單位。2)10XTE Buffer ,組份濃度：100 mM Tris-HCl, 10 mM ED

2、TA配制量：1 L配制方式：1.量取以下溶液，置于1 L燒杯中。IM Tris-HCl Buffer 3,)100ml500eM EDTA20ml2,向燒杯中加入約800 ml的去離子水，均勻混合。3 .將溶液定容至1 L后,高溫高樂滅菌。4 .室溫保留。3)1. 5 M Tris-HCl組份濃度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方式：1 .稱量18L7 g Tris置于1 L燒杯中°2 .加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。3 .用濃鹽酸調(diào)劑pH值至。4 .將溶液定容至1 L5 .高溫高壓滅菌后，室溫保留。注意：應使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因為Tris溶

3、液的pH值隨溫度的轉(zhuǎn)變不同專門大，溫度每升高1C，溶液的pH值大約降低個胞位。4)3 M醋酸鈉組份濃度：3M醋酸鈉配制量：100ml配制方式：1.稱量40.8g NaAc 3H20置于100-200ml燒杯中，加入月40ml的去離子水攪拌溶解2,加入冰醋酸調(diào)劑pH值至3.加去離子水將溶液定容至100ml4高溫高壓滅菌后，室溫保留。5)PBS Buffer組份濃度：137 mM NaCl, 2. 7 mM KC1, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2P01配制量：1 L配制方式：1.稱量以下試劑，置于1 L燒杯中。XaCl3gKC10.2gXa2HP011. 12gKH2P010.

4、27g2,向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解,3 .滴加濃鹽酸將pH值調(diào)劑至，然后加入去離子水將溶液定容至1 Lo4 .高溫廟樂滅菌后，室溫保留。注意:上述PBS Buffer中無二價陽離子,如需要，可在配方中補充1 mM CaC12和0.5 mM MgC12。6)10 M醋酸錢 組份濃度：10 M醋酸核配制殳：100 ml配制方式：1.稱量77.1 g醋酸核置于100200 ml燒杯中，加入約SO ml的去離子水攪拌溶解。2,加去離子水將溶液定容至100 mlo3 .利用0.22 mm濾膜過濾除菌。4 .密封瓶口于室溫保留。注意：醋酸鉞受熱易分解，因此不能府溫而樂滅菌。7)苯

5、酚/氯仿/異戊醇(25 ： 24 ： 1)配制方式：L說明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時常常利用苯酚/氯仿/異戊醉(25 : 24 : l)o規(guī)仿可使蛋白質(zhì)變性并 有助于液相與有機相的分離，而異戊醇那么有助于排除抽提進程中顯現(xiàn)的氣泡。2.配制方式：將Tris-HCl平穩(wěn)苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(24 ： 1)混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4C 保留。8)10% (W/V) SDS組份濃度:10% (W/V)SDS配制量:100ml配制方式：L稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水，68c加入溶解2.滴加濃鹽酸調(diào)劑pH值至3,將溶液定容至100ml后，室溫保留

6、。9) 2 N NaOH組份濃度：2 N NaOH配制量：100 ml配制方式：1 .量取SO ml去離子水置于100200 ml塑料燒杯中(NaOH溶解進程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。2 .稱取8 g NaOH警惕地慢慢加入到燒杯中，邊加邊攪拌。3,待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100 ml.4.將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后,室溫保留。10) N HC1組份濃度：N HC1配制殳：100 ml配制方式：1 .在ml的去離子水中加入ml的濃鹽酸(N),均勻混合。2 .室溫保留。11) 5 M NaCl組份濃度：5 M NaCl配制量：1 L配制方式：1 .稱取292.2

7、g NaCl置于1 L燒杯中，加入約800 ml的去離子水后攪拌溶解。2 .加去離子水將溶液定容至1 L后，適量分成小份。3 .高溫高壓滅菌后，4C保留。11) 20% (W/V) Glucose組份濃度：20% (W/V) Glucose配制量：100 ml配制方式：1.稱取20 g Glucose置于100200 ml燒杯中，加入約80 ml的去離子水后，攪拌溶解。2,加去離子水將溶液定容至100 mlo3.高溫高樂滅菌后，4C保留。12) Solution I物粒提取用)組份濃度：25 mM Tris-HCl (, 10 mM EDTA, 50 mM Glucose配制量：1 L配制方式

8、：1 .量取以下溶液，置于1 L燒杯中。IM Tris-HCl ()25ml0. 5M EDTA ()20ml20%Glucose(1. 11M)15mldH20910ml2 .高溫高樂滅菌后，4C保留。3,利用前每50 ml 的 Solution I 中加入2 ml 的 RNase A (20 mg/ml) c13)Solution H (質(zhì)粒提取用)組份濃度：200mM NaOH. 1%(W/V)SDS配制量：500ml配制方式：L型取以下溶液，置于500ml燒杯中10% SDS 50ml2N NaOH 50ml2,加滅菌水定容至500ml,充分混勻3,室溫保留，此溶液保留時刻最好不要超過

9、一個月注意：SDS易產(chǎn)動氣泡，不要猛烈攪拌14) Solution 111(質(zhì)粒提取用)組份濃度：3 M KOAc, 5 M CH3C00H配制量：500 ml配制方式：1 .稱量以下試劑，置于500 nli燒杯中。KOAc117gCH3C00H2 .加入300 ml去離子水后攪拌溶解。3 .加去離子水將溶液定容至500 mlo4 .高溫高樂滅菌后，4C保留。15) 0.5 M EDTA組份濃度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方式：稱取186.1 g Na2EDTA 2H20,置于1 L燒杯中、2,加入約800 ml的去離子水,充分攪拌,3,用NaOH倜劑pH值至（約20 g NaOH

10、）。注意：pH值至時，EDTA才能完全溶解。4,加去離子水將溶液定容至1 Lo5 .適量分成小份后，高溫高壓滅菌。6 .室溫保留。16）1 M DTT組份濃度：1 M DTT配制量：20 ml配制方式：1 .稱取3.09 g DTT,加入到60 ml限料離心管內(nèi).2 .加20 ml的0.01 M NaOAc （,溶解后利用0.22皿流器過濾除菌3,適量分成小份后，-20C保留。17） 10 mH ATP組份濃度：10 mM ATP配制量:20 ml配制方式：1 .稱取121 mg Na2ATP - 3H20,加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。2 .加20 ml 的25 mM Tris-HCl （,

11、攪拌溶解。3 .適量分成小份后，-20t保留。一,經(jīng)常使用貯液與溶液lmol/L亞精胺（Spermidine）：溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20C。lniol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精股于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。10mol/L乙酸胺（ammoniw acetate）：將77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用孔徑的漉膜過灌 除菌。lOmg/ml牛血清蛋白（BSA）加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學試劑級,無DNA酹）于水中（為減少變性， 須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好

12、蓋后，輕輕搖動，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦 旋混合°加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20C。lniol/L二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加水，分成小份貯存于-20C。或轉(zhuǎn)移100mg的二 硫蘇糖醇至微量離心管，加的水配制成lmol/L二硫蘇糖靜溶液,8moi/L乙酸鉀（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100mLImol/L氯化鉀（KC1）：溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。3moi/L乙酸鈉（sodium acetate）溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90nli水中,用冰乙酸調(diào)

13、溶液的pH至,再 加水定容到100mLLEDTA：配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（L）,混合后形成EDTA的三鈉鹽?；蚍Q取186. 1g的M2EDTA 2H20 和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1Llmol/L HEPES：將溶于約90ml的水中，用NaOH調(diào)pHO,然后用水定容至100mLImol/L HC1：加的濃鹽酸至的水中。25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT （異丙基硫代-B-D-半乳糖甘）于10ml水中，分成小份貯存于-20C。 lmol/LMgC12：溶解20.3g MgC12 6H20于足量的水中，定容到100ml。lOOmmol/L PMSF：溶

14、解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中,定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于-20C。20mg/ml蛋白筋K （proteinase K）：將200mg的蛋白酹L加入到水中,輕輕搖動，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20C。lOmg/mlRnase （無 DXase） （DNase -free RNase ）：溶解lOmg 的胰蛋白 RNA 前于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸鈉水 溶液中（pH ）o溶解后于水浴中煮沸15min,使aA醉失活。用lmol/L的Tris-HC1調(diào)pH至,于-20C貯 存。（配制

15、進程中要戴手套）5moi/L氯化鈉（XaCl）：溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。10、氫氧化鈉（MaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶 解后用水定容至1L。10%SDS （十二烷基硫酸鈉）：稱取lOOgSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完 全溶解c用水定容至1L。2mol/L山梨（糖】醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖】醇于足量水中使終體積為100mL100%三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋 液應在臨用前配制）

16、% X-gal （5-溟-4-氯-3FI噪一 B-半乳糖昔）：溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF），用鋁箔包爽裝液管，貯存于-20C。lOOXDenhardt 試劑（Denhardt's regent）成分及終濃度配制100 口 1溶液各成分的用量2%聚蔗他（Ficoll, 400型）2g2%聚乙烯毗咯烷酮（PVP-40）2g2%BSA （組分 V）2g水加水至總體枳為100ml依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于-20C貯存。10X標準DNA連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端連接）成分及終濃度

17、配制10ml溶液件成分的用量L Tris-HCl5ml lmol/L 貯液lOOmmol/L MgC121ml lmol/L 貯液lOOmmol/L DTT1ml lmol/L 貯液2amol/L ATP200ul 100 mmol/L 貯液5mol/L鹽酸亞精胺（可選）50ul 1 mmol/L 貯液ml BSA （組分V）（可選）10 mg/mL 貯液水將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20C o100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）能夠購買到100mmol/L純dNTPs貯液，-80匕可貯存至少6個月。lOmmol/L dXTP 混合液成分及終濃度配制20

18、ul溶液各成分的用房lOmmol/L dATP2ul 100 mol/L dATP 貯液10mmol/L dCTP2ul 100 cmol/L dCTP 貯液lOmmol/L dGTP2ul 100 mol/L dGTP 貯液lOmmol/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP 貯液水12ul20%PEG 8000/2. 5M NaCl成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量質(zhì)房濃度為20%聚乙二醉20gL氯化鈉50ml 5 mol/L氯化鈉或14.6g固體氯化鈉水補足100ml加聚乙二醇于含有疑化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。20XSSC成分及終濃度配

19、制1L溶液各成分的用量300mmol/L檸檬酸三納(二水)88. 2g3mol/L氯化鈉175. 3g水補足IL溶解檸檬酸三鈉(二水)和規(guī)化鈉于約0.9L水中，加幾滴10、XaOH溶液調(diào)pH為，用水補足體積至1L。DEPC (焦碳酸二乙酯)處理水加lOOuIDEPC于100ml水中，使DEPC的體積分數(shù)為。在37c溫浴至少12h,然后在15 Psi條件下面樂 滅菌20min,以使殘余的DEPC失活。DEPC會與胺起反映，不可用DEPC處置Tris緩沖液。甲酰胺(deionized formamide)直接購買或加Dowex XG8混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌lh,可去

20、除甲酰胺 中的離子。經(jīng)Whatman 1號濾紙過濾除去樹脂后分成小份，充赳氣于-80貯存(避免氧化 磷酸緩沖液(phosphate buffer)依照下表所給定的體積，混合lmol/L的磷酸二氫鈉(彳I堿)flHmol/L磷酸氫二鈉(雙堿)貯液，取得所 需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L的磷酸二氫鈉(NaH2P04 H20)貯液：溶解138g于足量水中，使終體 積為lL;lmol/L磷酸氫二鈉(Xa2HP01)貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。Imol/L璘酸二氮鈉(ml)Imol/L磷酸氫二鈉(ml)最終pH值8771238501508151857752257352656853

21、15625375565135510190150550390610330670280720TE （用于懸浮和貯存DXA）成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris-HC1lmiol/L EDTA水1ml lmol/L Tris-HCl 3 25*0200ul mol/L EDTA (pH )Tris 緩沖液（Tris-HCl buffer）將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再依照所要求的pH （25'C下）加必然量:的濃鹽酸（），用水調(diào)整終體積至1L。濃鹽酸的體枳（ml）pH14213816566676二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液電泳緩沖液50XT

22、ris-乙酸(TAE)緩沖液成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量2do1/L Tris 堿242glool/L乙酸ml的冰乙酸(mol/L)100 nrnol/L EDTA200ml 的 mol/L EDTA (pH )水補足IL5XTris-硼酸(TBE)緩沖液成分及終濃度配制IL溶液各成分的用量115 nmol/L Tris 破54g115 nmol/L硼酸鹽27. 5g硼酸10 nmol/L EDTA20 ml 的 mol/L EDTA (pH )水補足IL染料1%；臭酚藍(bromophenol blue)加1g水溶性鈉型溟酚藍于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。1%二甲苯育

23、 FF (xylene cyanoIe FF)溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100mL10mg/ml 的濱化乙錠(ethidium bromide)警惕稱取1g溟化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4c貯存。凝膠上樣液(gel loading solutions)6X堿性凝膠上樣液(室溫貯存)成分及終濃度OO 10ml溶液各成分用量N氫氧化鈉300ul 10N氫氧化鈉6 nimol/L EDTA120ul L EDTA ()18%聚蔗糖(400型)1.8g%澳甲酚綠15mg%二甲苯吉FF25mg水補足到10ml6X聚蔗糖凝膠上樣液（

24、室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量%澳酚藍1%澳酚藍%二甲苯青FF1%二甲苯吉FF5 mmol/L EDTA100ul L EDTA ()15%聚蔗糖（400型）1. 5g水補足到10ml6義嗅酚藍/二甲苯者/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用!£%漁酚藍1%澳酚藍%二甲苯吉FF1%二甲苯青FF15%聚蔗糖"00型）1. 5g水補足到10口16X甘油凝膠上樣液（4C貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量%澳酚藍1%澳酚藍%二甲苯吉FF1%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA100ul L EDTA ()50%甘油3ml水6

25、義蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量%澳酚藍1%漠酚藍%二甲苯青FF1%二甲苯吉FF5 mmol/L EDTA100ul L EDTA ()10%聚蔗糖1g水補足到10ml10 X十二烷基硫酸鈉/甘油凝咬上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量%澳酚藍20mg%二甲苯吉FF20mg200 nnnol/L EDTA1ml L EDTA%SDSlOOul 10% SDS50%甘油5ml水補足到10 口 1三.經(jīng)常使用培育基LB培育基將以下組分溶解在0.9L水中:蛋白陳10g酵母提取物5g氯化鈉10g若是需要用INNaOH (hnl)調(diào)整pH至，再補足水

26、至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/LSOB培育基將以下組分溶解在0.9L水中：蛋白陳20g酵母提取物5g氮化鈉0. 5g1 mol/L氯化鉀用水補足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培育基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加1ml滅 過菌的lmol/L氯化鎂。SOC培育基成份、方式同SOB培育基的配制，只是在培育基冷卻到室溫后，除在每100ml的小份中加1ml滅過菌的lmol/L 規(guī)化鎂外，再加2ml滅菌的lmol/L葡葡鋪(18g葡萄糖溶于足夠水中，再用水補足到100mL用的濾膜過濾 除菌TB培育基將以下組分溶解在0.9L水中:蛋白豚12g酵母提取物21g甘油4ml各組分溶解后高樂滅菌。冷卻到60C,再力11100ml滅菌的170mmol/L KH2P04/ tnol/L K2HP04的溶液(2.31g的KH2p04和溶在足量的水中，使終體積為lOOnil。高壓滅菌或用的滴膜過濾除菌)。2XYT培育基將以下組分溶解在0.9L水中：蛋白陳16g酵母提取物10g氯化鈉1ml若是需要用INNaOH (1ml)調(diào)整pH至，再補足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/LYPD培育基將以下組分溶解在0.9L水中：蛋白陳20g酵母提取物10g倒萄糖20g用水補足體積為1L后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前