石墨烯納米復(fù)合材料在電化學(xué)免疫傳感器中的應(yīng)用_袁征南pdf

1、首都師范大學(xué)學(xué)報(bào)( 自然科學(xué)版)第 36 卷第 6 期Journal of Capital Normal UniversityNo 62015 年 12月( Natural Science Edition)December，2015石墨烯納米復(fù)合材料在電化學(xué)免疫傳感器中的應(yīng)用袁征南馬占芳* 黃瀟楠*( 首都師范大學(xué)化學(xué)系，北京 100048)摘要石墨烯納米復(fù)合材料由于其優(yōu)異的電化學(xué)性質(zhì)和生物相容性被廣泛的應(yīng)用于制備超靈敏的電化學(xué)免疫傳感器 通過(guò)與其他納米材料復(fù)合，石墨烯的良好導(dǎo)電性等優(yōu)點(diǎn)被放大，而易聚集、堆疊、生物相容性較差等缺點(diǎn)被克服 因而，對(duì)石墨烯的改性工作成為當(dāng)下研究的熱點(diǎn) 本文綜述了石

2、墨烯納米復(fù)合材料在構(gòu)建電化學(xué)免疫傳感器中應(yīng)用，包括石墨烯與金屬、金屬氧化物、高分子聚合物等的納米復(fù)合材料，并對(duì)石墨烯納米復(fù)合材料在電化學(xué)免疫傳感領(lǐng)域的發(fā)展方向和前景做出了展望關(guān)鍵詞: 石墨烯，復(fù)合，納米材料，電化學(xué)，免疫傳感器中圖分類號(hào): TP212，TB383電化學(xué)免疫傳感器是將電化學(xué)傳感技術(shù)和免疫 技術(shù)相結(jié)合的一種新型免疫傳感器，其既具有電化 學(xué)傳感器的高靈敏度、低成本的特點(diǎn)，又具有免疫技 術(shù)的高選擇性、強(qiáng)專一性、和低檢出限等特點(diǎn)1，2因此，在當(dāng)下的臨床檢測(cè)、生命分析等領(lǐng)域都得到了 廣泛的應(yīng)用 電化學(xué)免疫傳感器由免疫識(shí)別元件、信號(hào)轉(zhuǎn)換元件以及信號(hào)檢測(cè)元件構(gòu)成，其基于抗原 抗體特異性結(jié)合前后

3、產(chǎn)生電化學(xué)信號(hào)的變化來(lái)實(shí)現(xiàn) 對(duì)癌癥標(biāo)記物的監(jiān)測(cè) 根據(jù)輸出電化學(xué)信號(hào)的不同， 電化學(xué)免疫傳感器可分為電流型、電導(dǎo)型、電容型及3-6，電位型傳感器 目前 電流型免疫傳感器的研究 工作進(jìn)展得最為深入當(dāng)下對(duì)電化學(xué)免疫傳感體系的研究?jī)?nèi)容主要圍 繞三個(gè)目標(biāo)展開(kāi): 第一，有效地固定免疫識(shí)別分子從 而優(yōu)化免疫識(shí)別元件的識(shí)別效果 第二，采用新穎方 式標(biāo)記免疫分子或利用新型功能材料構(gòu)建免疫探針 完成信號(hào)轉(zhuǎn)化過(guò)程 第三，放大輸出電信號(hào)，完成對(duì) 目標(biāo)生物分子的超靈敏檢測(cè) 傳統(tǒng)的單組分材料由 于性能單一而無(wú)法構(gòu)建滿足以上三個(gè)目標(biāo)的優(yōu)良電 化學(xué)免疫傳感界面 因此，依托新型復(fù)合功能材料構(gòu) 建性能優(yōu)良的電化學(xué)免疫傳感器成為當(dāng)

4、下研究的 熱點(diǎn)收稿日期: 2015-03-25 * 通訊作者單質(zhì)石墨烯由于具有分子平面大共軛結(jié)構(gòu)而具有優(yōu)良的導(dǎo)電性，然而單一組分石墨烯存在卷曲、團(tuán)聚、層間堆積以及沒(méi)有特征電信號(hào)等現(xiàn)象7，8 這些性質(zhì)都不利于實(shí)現(xiàn)電化學(xué)傳感界面有效固定生物識(shí)別分子，信號(hào)轉(zhuǎn)換以及輸出信號(hào)放大等目標(biāo) 通過(guò)復(fù)合納米材料對(duì)石墨烯進(jìn)行改性是彌補(bǔ)這一缺陷的有效方法 納米材料由于具有小尺寸效應(yīng)、表面效應(yīng)、量子尺寸效應(yīng)和宏觀量子隧道效應(yīng)而具有獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì) 石墨烯納米復(fù)合材料保留了單質(zhì)石墨烯優(yōu)良的導(dǎo)電性和納米材料的多功能性，同時(shí)由于二者的協(xié)同作用使該復(fù)合體系的電化學(xué)性能及生物 相容性得到了進(jìn)一步提升9-11 應(yīng)用該新型復(fù)合功

5、能材料構(gòu)筑的電化學(xué)免疫傳感界面可以有序地固定大量免疫分子，迅速將生物化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，且利用納米材料的特殊光電性質(zhì)可完成對(duì)輸出信號(hào)的放大進(jìn)而得到靈敏度高，檢測(cè)范圍寬、響應(yīng)時(shí)間短 的電化學(xué)免疫傳感器12-14 由于納米材料形貌、性能的多樣化，石墨烯類物質(zhì)大量的邊界點(diǎn)、結(jié)構(gòu)缺 陷、以及豐富的功能性基團(tuán)，該復(fù)合材料體系的構(gòu)建 和應(yīng)用具有廣闊的研究前景和較高的研究?jī)r(jià)值本文基于電化學(xué)傳感及免疫技術(shù)的基礎(chǔ)上，綜 述了石墨烯構(gòu)筑的納米復(fù)合材料在構(gòu)建電化學(xué)免疫 傳感器中應(yīng)用47首都師范大學(xué)學(xué)報(bào)( 自然科學(xué)版)2015 年1 石墨烯 貴金屬納米粒子復(fù)合材料貴金屬如金 ( Au) 、鉑 ( Pt) 、鈀 (

6、Pd) 的納米顆 粒普遍具有較大的比表面積，優(yōu)良的導(dǎo)電性、反應(yīng) 性和生物相容性，其表面豐富的活性位點(diǎn)可固定15，16，大量的生物識(shí)別分子 同時(shí) 貴金屬納米粒子 還具有特殊的電催化性能，通過(guò)催化反應(yīng)可進(jìn)一 步增 強(qiáng) 輸 出 電 信 號(hào) 從 而 提 高 傳 感 器 的 靈 敏 度17，18 石墨烯 貴金屬納米粒子復(fù)合材料應(yīng)用 于修飾電化學(xué)傳感界面都具有相較于單一組分材 料更好的性能金納米粒子( AuNPs) 是金的納米顆粒，在水溶 液中以膠體金的形式存在，根據(jù)還原劑種類或者濃 度的不同可以制備不同粒徑的 AuNPs AuNPs 可與 抗體或酶上的巰基、氨基形成較強(qiáng)共價(jià)鍵或靜電吸 附將其有效固定，同

7、時(shí)其低生物毒性較好地保護(hù)了 生物分子的活性 此外，AuNPs 還具有優(yōu)良的電子傳 遞能力，可以輔助石墨烯將化學(xué)信號(hào)迅速轉(zhuǎn)換為電 信號(hào) 我們課題組用 AuNPs 和離子液體功能化的石 墨烯復(fù)合制成了一種新型的納米復(fù)合材料 AuNPs通過(guò)離子液體中豐富的氨基可大量固定于石墨烯，19上 AuNPS 表面的活性位點(diǎn)可固定大量抗體 同時(shí)，AuNPs 作為一種電子媒介體可以加快電子在蛋 白質(zhì)和電極表面之間的傳遞速率，最終使該傳感器 7， 6的檢出限低至 1 × 10 ng /mL 檢測(cè)范圍在 1 × 10至 100 ng /mL 之間 袁若課題組也利用 AuNPs 和石墨烯的復(fù)合材料構(gòu)

8、建了一種超靈敏的免疫傳感器該工作先在電極表面修飾了一層殼聚糖 / 二茂鐵 / 二氧化鈦納米顆粒的復(fù)合材料，然后通過(guò)活潑的氨基 連接石墨烯 /AuNPs 的復(fù)合材料，最后吸附抗體完成 對(duì)抗原的非標(biāo)記超靈敏檢測(cè) 該工作指出，摻雜AuNPs 的復(fù)合材料，其穩(wěn)定性、生物相容性和電子轉(zhuǎn) 移速率要明顯優(yōu)于石墨烯或 AuNPs 的單一組分 材料20貴金屬鉑納米粒子( PtNPs) 和石墨烯的復(fù)合材 料在構(gòu)筑免疫傳感器方面也有廣泛的應(yīng)用 羧基功 能化的 PtNPs 通過(guò)丙二醇甲醚醋酸酯( PMA) 和單層 石墨烯連接，并在其表面均勻分布 納米粒子較大的 比表面積可以固定較多的生物分子，同時(shí)良好的生 物相容性可

9、以保持抗體分子的活性 該電化學(xué)傳感 界面的檢出限可低至 4. 2 pg /mL，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)分子超 靈敏檢測(cè)212石墨烯 金屬氧化物納米粒子復(fù)合 材料金屬氧化物如氧化鋅，二氧化鈦，四氧化三鐵的納米顆粒生物毒性較低，且都具有獨(dú)特的物理化學(xué) 性質(zhì)22-25 石墨烯 金屬氧化物復(fù)合體系普遍具有較好的電化學(xué)催化活性，用其可實(shí)現(xiàn)對(duì)電化學(xué)免疫 傳感界面增敏的目的26-29袁若課題組利用氧化鋅納米粒子( ZnONPs) 制備出了一種有效放大信號(hào)的免疫探針，將輸出的電信號(hào)進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為了光信號(hào)，達(dá)到對(duì)癌胚抗體( anti-CEA) 的靈敏檢測(cè) 該工作通過(guò)戊二醛將 ZnONPs 與石墨烯連結(jié)復(fù)合制成復(fù)合修飾材料 在檢

10、測(cè)過(guò)程中，通過(guò) ZnONPs 催化過(guò)氧化氫分解產(chǎn)生活潑的中間體自由基進(jìn)而發(fā)光，根據(jù)光信號(hào)的強(qiáng)弱來(lái)檢測(cè)樣品中 CEA 濃度的目的30 相比傳統(tǒng)的過(guò)氧化氫傳感器ZnONPs 優(yōu)良的催化能力，使該傳感器的相對(duì)誤差小于 5. 10% ，表明其具有較好的精確度Huang 等通過(guò)水熱法合成的二氧化鈦和石墨烯的納米復(fù)合材料，其可對(duì)多巴胺類物質(zhì)的氧化反應(yīng)進(jìn)行電催化，從而放大輸出信號(hào)提高檢測(cè)的靈敏31，度結(jié)果表明 該材料修飾的免疫傳感器對(duì)多巴胺類物質(zhì)檢測(cè)的檢測(cè)范圍為 0. 1 300 ng /mL，檢出限僅為 0. 03 ng /mL3 石墨烯 高分子復(fù)合材料高分子材料是以高分子化合物為基礎(chǔ)的材料由于其分子質(zhì)量

11、較大，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，成膜性好常用 于和石墨烯復(fù)合構(gòu)建電化學(xué)傳感界面32-35殼聚糖 ( CS ) 是由自然界廣泛存在的殼質(zhì) ( chitin) 經(jīng)過(guò)脫乙酰作用得到的一種高分子材料，化 學(xué)名稱為聚葡萄糖胺( 1-4) -2-氨基-B-D 葡萄糖 這種天然高分子由于其生物相容性、安全性、微生物降 解性、成膜性等優(yōu)良性能被各行各業(yè)廣泛關(guān)注 Mao等將殼聚糖( CS) 、亞甲藍(lán)( MB) 、石墨烯( GS) 制成 納米復(fù)合材料用于修飾檢測(cè)前列腺特異抗原( PSA)36 ， ( ) 的免疫傳感器 該研究指出 特異性抗體 Abs容易在電極基底無(wú)序地固定，這樣會(huì)降低 Abs 與目 標(biāo)分子之間的特異性識(shí)別，從

12、而影響檢測(cè)效果 高分子聚合物殼聚糖作為一種分散劑和成膜劑可以使亞甲藍(lán) 石墨烯復(fù)合材料趨于均一和穩(wěn)定，抗體能夠在其表面均一有序地固定 同時(shí)，殼聚糖帶有豐富的氨基，可以固定較多的抗體以增加其檢測(cè)范圍 該免48第 6 期袁征南等: 石墨烯納米復(fù)合材料在電化學(xué)免疫傳感器中的應(yīng)用疫傳感器對(duì) PSA 響 應(yīng) 的 濃 度 范 圍 為 0. 05 5. 00 ng /mL、最低檢出限為 13 pg /mLNafion( 全氟代磺酸酯) 作為一種高分子聚合物 近年來(lái)也備受關(guān)注 Nafion 內(nèi)部有憎水基和親水基 若在水溶劑中，親水基上會(huì)聚集著極化了的溶劑分 子，它在 Nafion 中可以起到陽(yáng)離子交換的作用 同

13、時(shí)，Nafion 的化學(xué)穩(wěn)定性十分優(yōu)良，耐熱性，成膜性，37較好 可以固定大量電活性物質(zhì) Sun 等將 Nafion和石墨烯制成復(fù)合材料滴涂在電極表面修飾為基 底 Nafion 使該免疫傳感器具有較好的穩(wěn)定性: 在4 的條件下保存 20 d 后，檢測(cè)峰電流僅降低了3. 05% 聚苯胺( PANI) 作為一種導(dǎo)電高分子在電子工 業(yè)、信息工程等各個(gè)領(lǐng)域都有所應(yīng)用 Li 等就基于 石墨烯 聚苯胺納米復(fù)合材料制備出了一種檢測(cè)雌 二醇含量的標(biāo)記型電化學(xué)免疫傳感器38 以石墨烯聚苯胺復(fù)合材料為基底修飾電極可以提高電極的電化學(xué)活性和穩(wěn)定性，同時(shí)，由于兩者的協(xié)同作用使該傳 感 器 的 峰 電 流 值 顯 著

14、提 高，檢 出 限 為0. 02 ng /mL，檢測(cè)范圍為 0. 04 7. 0 ng /mL 同時(shí)，該傳感器在重復(fù)性方面也有較好的表現(xiàn): 在用 5 根電極進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)中，對(duì)同一濃度樣品檢測(cè)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差為 3. 5% 4 石墨烯 染料分子復(fù)合材料染料是能使其他材料著色的一種物質(zhì) 很多染料分子都含有氧化還原基團(tuán)，因此表現(xiàn)出良好的電39 ， ( ) 化學(xué)活性 例如 普魯士藍(lán) 鐵氰化物 類化合物，二茂鐵及其衍生物、硫瑾等Wei 等將還原后的氧化石墨烯與硫瑾經(jīng)過(guò)攪拌混合，離心、水洗等步驟制成具有管狀形貌的納米復(fù) 合材料40 其在磷酸緩沖溶液體系內(nèi)中可以產(chǎn)生特征電化學(xué)信號(hào)峰，通過(guò)監(jiān)測(cè)傳感器界面抗體 抗

15、原特異性識(shí)別后電信號(hào)的變化可得到未知體系中抗原的濃度 我組也曾報(bào)道過(guò)一種室溫下一步法合成氧化石墨烯 硫堇 金( GO-Thi-Au) 納米復(fù)合材料的方法，染料分子硫瑾通過(guò) 作用力和靜電作用力與氧化石墨烯表面發(fā)生強(qiáng)烈反應(yīng)形成了穩(wěn)定的交聯(lián)，將該新型納米材料滴涂于電極表面形成穩(wěn)定薄，41膜 并通過(guò)吸附 AuNPs 從而連接 anti-CEA 該傳 感器表現(xiàn)出對(duì) CEA 的超靈敏響應(yīng)，其檢測(cè)范圍及檢 出限分別為 0. 05 2. 00 ng /mL 和 5. 77 pg /mL亞甲藍(lán)作為一種生物染料分子，由于其氧化態(tài)和還原態(tài)的顏色不同，故經(jīng)常作為氧化還原滴定的指示劑 有研究指出，亞甲藍(lán) 石墨烯的納米復(fù)

16、合材料在電化學(xué)表現(xiàn)和導(dǎo)電性方面要明顯優(yōu)于單一組分 材料36 兩者形成的納米復(fù)合材料可構(gòu)建性能穩(wěn)定的電化學(xué)傳感界面5 結(jié)論與展望石墨烯納米材料制成的電化學(xué)傳感器在免疫檢 測(cè)中展現(xiàn)了優(yōu)異的靈敏度和選擇性 通過(guò)石墨烯與 貴金屬納米顆粒、金屬氧化物納米顆粒等無(wú)機(jī)材料 的復(fù)合，或者與高分子聚合物、染料分子等有機(jī)材料 的復(fù)合，提高了傳感器靈敏度，以及檢測(cè)限，增強(qiáng)其 在電化學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用的功能性然而，對(duì)石墨烯納米復(fù)合材料的研究依舊處于 較為基礎(chǔ)的階段，未來(lái)還需要繼續(xù)拓展這種復(fù)合材 料在電化學(xué)免疫檢測(cè)中的應(yīng)用 首先，石墨烯作為當(dāng) 下材料學(xué)領(lǐng)域的明星，對(duì)其的改性研究依然具有很 重要的價(jià)值 同時(shí)，將免疫傳感器推向大規(guī)

17、模生產(chǎn)和 應(yīng)用，還應(yīng)該簡(jiǎn)化其制備工序，優(yōu)化檢測(cè)重復(fù)性等 這些研究可以使我們更深入的了解石墨烯納米復(fù)合 材料的電化學(xué)性質(zhì)，也可以將電分析技術(shù)應(yīng)用于醫(yī) 學(xué)檢測(cè)，重大疾病的早期診斷等領(lǐng)域，從而實(shí)現(xiàn)學(xué)科 之間的融合創(chuàng)新參考文獻(xiàn)1 Zhang L，Yuan ，Huang X，et alPotentiometric immunosensor based on antiserum of Japanese B encephalitisimmobilized in nano-Au /polymerized o-phenylenediamine filmJ Electrochem Commun，2004，6: 1

18、222 12262 Lad U，Khokhar S，Kale G Electrochemical creatinine biosensorsJ Anal Chem，2008，80: 7910 79173 Pumera M，Snchez S，Ichinose I，et al Electrochemical nanobiosensorsJSens Actuators B，2007，123: 11954 Snchez S，oldn M，Prez S，et alToward a fast，easy，and versatile immobilization of biomolecules into ca

19、rbonnanotube /polysulfone-based biosensors for the detection of hCG hormoneJ Anal Chem，2008，80: 65085 Yang H C，Yuan ，Chai Y Q，etal Electrochemical immunosensor forhuman chorionic gonadotropin based onhorseradish peroxidase-functionalizedPrussianblue-carbonnanotubes /goldnanocomposites as labels for

20、signal49首都師范大學(xué)學(xué)報(bào)( 自然科學(xué)版)2015 年amplificationJ Electrochim Acta，2011，56: 19736 Zhang H，Zhao Q，Li X，et al Ultrasensitive assays for proteinsJ Analyst，2007，132: 724 7377 Matthew J Allen，Vincent C Tung，ichard B Kaner Honeycomb carbon: a review of grapheneJ Chem ev，2010，110: 132 1458 Kauffman C A，Malani A

21、 N，Easley C，et al The rise of grapheneJ Nat Mater，2007，6: 183 1919 Wu J F，Xu M Q，Zhao G C Graphene-based modified electrode for the direct electron transfer of Cytochrome c andbiosensingJ Electrochem Commun，2010，12: 175 17710 Lin W J，Liao C S，Zhang J H，et al Graphene modified basal and edge plane py

22、rolytic graphite electrodes for electrocatalytic oxidation of hydrogen peroxide and -nicotinamide adenine dinucleotideJ Electrochem Commun， 2009，11: 2153 215611 Liu C，Alwarappan S，Chen Z F，et al Membraneless enzymatic biofuel cells based on graphene nanosheetsJBiosens Bioelectron，2010，25: 1829 18331

23、2 Shan C S，Yang H F，Song J F，et al Direct electrochemistry of glucose oxidase and biosensing for glucose based ongraphemeJ Anal Chem，2009，81: 2378 238213 Wang Y，Lu J，Tang L H，et al Graphene oxide amplified electrogenerated chemiluminescence of quantum dots and itsselective sensing for glutathione fr

24、om thiol-containing compoundsJ Anal Chem，2009，81: 9710 971514 Babya T T，Aravinda S S J，Arockiadossa T，et al Metal decorated graphene nanosheets as immobilization matrix foramperometric glucose biosensorJ Sens Actuators B: Chem，2010，145: 71 7715 Boisselier E，Astruc D Gold nanoparticles in nanomedicin

25、e: preparations，imaging，diagnostics，therapies and toxicityJ Chem Soc ev，2009，38: 1759 178216 Perez-Juste J，Pastoriza-Santos I，Liz-Marzan L M，et al Gold nanorods: synthesis，characterization and applicationsJ Coord Chem ev，2005，249: 1870 190117 Penn S G，He L，Natan M JNanoparticles for bioanalysisJ Cur

26、r Opin Chem Biol，2003，7: 609 61518 Lu G H，Ocola L E，Chen J H Gas detection using low-temperature reduced graphene oxide sheetsJ Appl PhysLett，2009，94: 8311119 Liu N，Chen X，Ma Z F Ionic liquid functionalized graphene /Au nanocompositesand its application for electrochemicalimmunosensorJ Biosensors an

27、d Bioelectronics，2013，48: 33 3820 Han J，Zhuo Y，Chai Y Q，et al Highly conducting gold nanoparticles-graphene nanohybrid films forultrasensitivedetection of carcinoembryonic antigenJ Talanta，2011，85: 130 13521 Shobhita Singal，Avanish K Srivastava，Ashok M Biradar，et al Pt nanoparticles-chemical vapor d

28、eposited graphenecomposite based immunosensor for the detection of human cardiac troponin IJ Sensors and Actuators B，2014，205:363 37022 Wang J，Xu M Z，Zhao ，et al A highly sensitive H2 O2 sensor based on zinc oxide nanorod arrays film sensing interfaceJ Analyst，2010，135: 1992 199623 Solanki P ，Kaushi

29、k A，Ansari A A，et al Appl Phys Lett，2009，94: 14390124 Khan ，Kaushik A，Solanki P ，et al Anal Chim Acta，2009，616: 207 21325 Bai H P，Lu X X，Yang G M，et al Hydrogen peroxide biosensor based on electrodeposition of zinc oxide nanoflowersonto carbon nanotubes film electrodeJ Chin Chem Lett，2008，19: 314 31

30、826 Luo Y，Liu H，ui Q，Tian Y Detection of extracellular H2 O2released from human liver cancer cells based on TiO2nanoneedles with enhanced electron Transfer of cytochrome cJAnal Chem，2009，81: 3035 304127 Sasha Stankovich，Dmitriy A Dikin，Geoffrey H B Dommett，et al Graphene-based composite materialsJ N

31、ature，2006，442: 282 28628 Chen D，Tang L，Li J Graphene-based materials in electrochemistrJChem Soc ev，2010，39: 3157 318029 Pumera M Graphene-based nanomaterials and their electrochemistryJChem Soc ev，2010，39: 4146 415730 Cheng Y F，Yuan ，Chai Y Q，et al Highly sensitive luminol electrochemiluminescence

32、 immunosensor based on ZnO nanoparticles and glucose oxidase decorated graphene for cancerbiomarker detectionJ Analytica Chimica Acta，2012， 745: 137 14231 Huang K J，Li J，Wu Y Y，et al Amperometric immunobiosensor for -fetoprotein using Au nanoparticles /chitosan /50第 6 期袁征南等: 石墨烯納米復(fù)合材料在電化學(xué)免疫傳感器中的應(yīng)用Ti

33、O2 -graphene composite based platformJ Bioelectrochemistry，2013，90: 18 2332 Pauliukaite ，Ghica M E，F(xiàn)atibello-Filho O，Brett C M A Electrochemical impedance studies of chitosan-modifiedelectrodes for application in electrochemical sensors and biosensorsJ Electrochim Acta，2010，55: 623933 Zhang Y C Elec

34、tro-induced covalent cross-linking of chitosan and formation of chitosan hydrogel films: its application asan enzyme immobilization matrix for use in a phenol sensorJ Anal Chem，2010，82: 527534 Zhuo Y，Yuan ，Chai Y Q，et alAn amperometric immunosensor based on immobilization of hepatitis B surfaceantib

35、ody on gold electrode modified gold nanoparticles and horseradish peroxidaseJAnal Chim Acta，2005，548:20535 Yang BC， WangF， Guo S J， etal Electrochemical behaviorand voltammetric determination of 2，4，6-triaminopyrimidine at glassy carbon electrode modified with multi-walled carbon nanotubes /nafionJ

36、Anal Sci，2010，26: 107136 Mao KX， WuD， LiY， etalLabel-free electrochemicalimmunosensorbased on graphene /methylenebluenanocompositeJ Analytical Biochemistry，2012，422: 22 2737 Sun T，Wang L，Li N，et alLabel-free electrochemical aptasensor for thrombin detection based on the nafion grapheneas platformJ B

37、ioprocess Biosyst Eng，2011，34: 1081 108538 Li J，Liu S，Yu J H，et alElectrochemical immunosensor based on graphene-polyanilinecomposites and carboxylatedgraphene oxide for estradiol detectionJ Sensors and Actuators B，2013，188: 99 10539 Wang Z J，Li M Y，Zhang Y J，et alThionine-interlinked multi-walled carbon nanotube /gold nanoparticle compositesJ Carbon，2007，45: 2111 21