丹皮酚的提取與鑒定

1、丹皮酚的提取別離及結(jié)構(gòu)鑒定摘要：丹皮酚是牡丹皮和徐長卿的主要活性成分,在醫(yī)藥、香料、化工領(lǐng)域具有 廣泛用途,其藥理活性廣泛：鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、催眠、解熱、抗炎、抗過敏,免疫調(diào) 節(jié)等,提取丹皮酚的方法主要有有機溶劑浸出法、水蒸氣蒸儲法、超臨界流體萃取法等.本報告主要就丹皮酚的研究狀況等作了介紹,實驗采取水蒸氣蒸儲法從 牡丹皮中提取丹皮酚.并用薄層色譜法,紫外分光光度法等對丹皮酚進(jìn)行了結(jié)構(gòu) 鑒定.關(guān)鍵字：丹皮酚水蒸氣蒸儲法薄層色譜法一、 文獻(xiàn)綜述1前言丹皮酚paeonol,簡稱Pae,又稱牡丹酚,主要是從蘿摩科植物徐長卿干 燥根或全草和毛良科芍藥屬植物牡丹、芍藥的根皮中提取別離出來的一種活性成 分,其成

2、分單一、純度高、質(zhì)量限制良好、藥理作用明確、毒副反響小,而且臨 床使用平安. 是一種小分子的酚類化合物,化學(xué)式為,2-羥基-4-甲氧基-苯乙 酮,呈白色針狀結(jié)晶,具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、解熱、解痙、抗炎等作用,并具有抗心 律失常、抗動脈粥樣硬化、改善微循環(huán)、保護(hù)缺血組織、抗菌和抑制皮膚色素合 成等作用.近年來還發(fā)現(xiàn)丹皮酚具有抗月中瘤作用,同時能提升機體免疫力且無明 顯副作用.2.研究進(jìn)展丹皮始載于?本經(jīng)?,具有清熱涼血,活血化瘀的成效,為歷版?中華人民 共和國藥典?收載品種,.其主要有效成分為丹皮酚.藥理活性廣泛、高效、低毒, 在心腦血管系統(tǒng)疾病和月中瘤防治等方面具有廣闊的開發(fā)前景和臨床應(yīng)用價值.目前

3、市場上對丹皮酚的需求量較大,除用于醫(yī)藥制劑原料外,還廣泛用作牙膏及護(hù) 發(fā)、護(hù)膚、美容等日化產(chǎn)品的原材料.對于丹皮酚的研究,早在1964, Doifode等就合成了 a -澳代的丹皮酚.Rehma等合成了丹皮酚5-位的鹵化衍生物,并且 發(fā)現(xiàn)均具有較好的抗真菌性.1995年,徐鳴夏等合成了乙酰水楊酸丹皮酚酯, 即2-乙酰氧基苯甲酸-2-乙酰基-5-甲氧基苯酯,其藥理作用與乙酰水楊酸酯 類藥物相似,但抗血栓形成作用較強,適用于防治心腦血管栓塞性疾病. 潘顯道 陽對合成得到的5個丹皮酚酯類化合物通過MTfe進(jìn)行體外抗月中瘤藥理活性的評價,初步篩選 結(jié)果顯示：5-硝基-2-味喃甲酸的丹皮酚酯的抑制月中瘤

4、細(xì)胞活性與臨床上常用的 抗癌藥物5氟尿喀呢(5-Fu)的活性相近,對人月中瘤細(xì)胞有一定抑制作用,具細(xì) 胞毒活性可能與該化合物分子具有的氧化特征有關(guān).今年來,對于丹皮酚的制備方法,定量分析,藥理作用和結(jié)構(gòu)修飾方面都有 許多進(jìn)展.2.1 丹皮酚的提取方法牡丹皮中丹皮酚的提取方法：蒸儲法,溶劑浸取法,其中,熱浸取法明顯 優(yōu)于冷浸取法.酸水乙醇,堿水乙醇提取法優(yōu)于醇提取法.經(jīng)酸堿水解提取液中 丹皮酚量升高可能由于酸堿增加了丹皮酚中原甘和次級昔的水解,游離出更多的丹皮酚.徐長卿中丹皮酚的提取方法：蒸儲法,有機溶劑浸取法,直接蒸儲,大孔 樹脂法,超臨界流體萃取法等.人工合成丹皮酚：由于從天然藥物中提取費用

5、高,自然條件限制大,時間 長,所以,人工合成很廣泛,均以間苯二酚為起始原料,但具體工藝流程,工藝 條件,收率有所不同,局部方法收率可達(dá) 55%且純度高.2.2 丹皮酚的主要分析方法2.2.1 HPLC法：是測定中藥成分的主要方法,方便,快捷,準(zhǔn)確盛習(xí)鋒等用該法 測定了不同產(chǎn)地丹皮藥材中丹皮酚和去甲丹皮酚的量 .2.2.2 氣相色譜法：凌婭等用直接蒸儲一毛細(xì)管氣相色譜法,以正十五烷為內(nèi)標(biāo) 物對康潰丸中的丹皮酚進(jìn)行了內(nèi)標(biāo)比對定量研究.2.2.3 薄層掃描法：該法簡單易行,測定結(jié)果穩(wěn)定,重現(xiàn)性好,準(zhǔn)確可靠尤其在 中藥復(fù)方制劑中,可較好的排除其他成分的干擾,葉鳳等用該法測定了血脂平膠 囊中丹皮酚的量,

6、劉義海等用薄層掃描法測定了知地黃丸中丹皮酚的量.2.2.4 毛細(xì)管電泳法：趙新鋒等選用產(chǎn)丁為內(nèi)標(biāo)用膠束電動毛細(xì)管色譜法別離牡 丹皮及中藥六味地黃丸中丹皮酚的量.以丹皮酚對照品峰面積與內(nèi)標(biāo)的比值對其 濃度作圖,得標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性關(guān)系良好且加樣回收率高,簡單,快捷,經(jīng)濟高效2.2.5 化學(xué)發(fā)光法：丹皮酚含有酚羥基,具有復(fù)原性.汪寶其等選用魯米諾-過氧 化氫-鉆離子為空白發(fā)光體系利用光氧化氫對丹皮酚結(jié)構(gòu)中酚羥基的氧化作用, 而消耗發(fā)光體系中的過氧化氫,致使原空白發(fā)光體系的發(fā)光強度降低,即淬滅, 淬滅程度的強弱在一定范圍內(nèi)與丹皮酚的濃度呈線性關(guān)系進(jìn)而,對丹皮酚進(jìn)行測定.2.2.6 分光光度法應(yīng)用分光光度

7、法測定丹皮酚含量的技術(shù)較為成熟,按不同的原理又可分為以 下幾種方法：1)紫外分光光度法：具有操作簡單、費用較低等優(yōu)點.但由于該法根本上沒有 別離水平,樣品處理要求嚴(yán)格,故常被用于要求不很嚴(yán)格的一般測定、中藥材炮 制方法與處理條件比擬、制劑工藝選擇等方面.胡錫波等以紫外分光光度法測定了丹皮酚包合物中丹皮酚的含量,結(jié)果顯示丹皮酚質(zhì)量濃度在1. 24-10. 25Ixg/m電圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好(r=0 . 999 6).2 ) 一階導(dǎo)數(shù)分光光度法：王煥云等 用水蒸氣蒸儲法提取丹皮酚得樣品溶液,分別對樣品溶液、對照品溶液及陰性對照品溶液在 210360 nm波長范圍內(nèi)繪制吸 收光譜及一階導(dǎo)數(shù)光譜

8、圖.從一階導(dǎo)數(shù)光譜可知,選擇 263 llm和267 nm兩波長 以峰零法定量效果較好.以4 A=A A:為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),丹皮 酚質(zhì)量濃度線性范圍是3. 0188. 048 Ixg/mL回收率為101. 95%.結(jié)果表 明,此法可不經(jīng)別離對丹皮酚進(jìn)行含量測定,且結(jié)果準(zhǔn)確.3)正交函數(shù)分光光度法：王煥云等用水蒸氣蒸儲法提取麥味地黃丸得供試品溶 液,以水為空白,在220350 nm波長范圍內(nèi)分別對丹皮酚對照品、供試品和陰 性對照品溶液進(jìn)行掃描,得吸收光譜.根據(jù)光譜信息,選用二次正交多項式系數(shù) (P2)作為定量參數(shù),以消除陰性對照的干擾,在 263. 8-283. 8 nlTl波長之間

9、每間隔4 nnW定各個波長的吸收度值,按公式P2: (+5)A1+ ( 1)A2+( 4)A3+( 一 4)A4+( 1)A5+(+5)A6計算P2值.結(jié)果P2與質(zhì)量濃度 源良好的線性關(guān)系,平均回 收率為99. 0%.3 .丹皮酚的藥理作用3. 1改善心腦血管作用3. 1. 1抗心律失常多年來國內(nèi)外學(xué)者對丹皮酚抗心律失常作用及其機制進(jìn)行了深入研究,發(fā)現(xiàn)Paet明顯對抗大鼠心肌缺血再灌注模型心律失常作用,80 mg?kr 160 mg?kgPae,能使大鼠室顫VF及室性心動過速VT的發(fā)生率降低,并可有效地縮短持 續(xù)時間,縮小心肌缺血和梗死的范圍,拮抗心肌損傷.近來研究發(fā)現(xiàn),丹皮酚的 抗心律失常作

10、用與其對鈣離子通道的阻滯作用具有重要的內(nèi)在聯(lián)系.3.1.2 抗動脈粥樣硬化動脈粥樣硬化Athero sclersis , AS是當(dāng)今嚴(yán)重威脅人類健康的疾病之一, 是許多心腦血管疾病的病理根底,尋找有效對抗AS勺藥物成為近年來研究的熱點 之一.經(jīng)兔、鴿鶉、大鼠等多種動物實驗發(fā)現(xiàn),PaeM有明顯的抗AS乍用.75 mg?kg 150 mg?kg Pae可明顯降低兔動脈粥樣硬化模型血清中總膽固醇TC和低密度脂蛋白LDL水平,延緩動脈粥樣硬化進(jìn)程,顯著降低兔主動脈斑塊面積、內(nèi)膜, 中膜厚度比及內(nèi)膜泡沫細(xì)胞數(shù).病理學(xué)觀察顯示,丹皮酚可不同程度地減輕主動 脈的病變.3.1.3 改善血流變心腦血管血栓性疾病

11、的發(fā)生和開展過程中,除血小板聚集活性增高外,常伴 隨著血液流變學(xué)性質(zhì)的異常,特別是與血液粘度、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞聚集性的 升高和紅細(xì)胞變形性降低等因素有關(guān).Pae寸血液流變學(xué)指標(biāo)具有多方面的影響. 100 mg?kg丹皮酚能顯著降低切率條件下的全血粘度,并顯著降低紅細(xì)胞壓積、 紅細(xì)胞聚集指數(shù)、最大變形時間及血小板粘附率.紅細(xì)胞初始表觀變形指數(shù)和最 大表觀變形指數(shù)與對照組相比明顯增大.3.1.4 抗心肌梗死作用丹皮酚能明顯減少冠脈結(jié)扎致實驗性心肌梗死犬的心肌梗死面積、降低心肌 梗死程度、減少心肌酶的釋放,同時可提升模型犬血清中SOD的活力,增強消除自由基水平,降低血清中MDA的含量,減輕脂質(zhì)過氧

12、化損傷的程度.其作用 機制可能是通過穩(wěn)定細(xì)胞膜,抑制缺血心肌的膜損傷,去除自由基,降低脂質(zhì)過 氧化等發(fā)揮作用.3.1.5 抗腦缺血再灌注性損傷的作用武繼彪等10采用大鼠大腦動脈栓塞本K型,觀察缺血再灌注 24h后,大鼠神經(jīng)功能病癥評分、腦梗死體積測定、病理組織學(xué)變化以及腦組織勻漿中超氧化 物歧化酶SOD、谷胱甘肽過氧化酶GSH-PX、丙二醛MDA和過氧化氫酶CAT的 含量,結(jié)果顯示丹皮酚干預(yù)后大鼠神經(jīng)功能病癥評分提升,腦梗死體積縮小,腦缺血再灌注損傷腦組織的病理改變減輕,SOD GSH-Px CAT的活性升高,MDA含 量減少,提示丹皮酚保護(hù)缺血腦組織的作用機理可能與抗自由基損傷有關(guān). 3.

13、2抗月中瘤作用.研究顯示,丹皮酚在體內(nèi)外對人白血病細(xì)胞 K562、人乳腺癌基因細(xì)胞T6-17、 肝癌細(xì)胞BEL-7404移植性肝癌細(xì)胞HepA人白血病月中瘤細(xì)胞株K562/ ADM宮 頸癌細(xì)胞系HeLa人大腸癌細(xì)胞株HT-29等多種月中瘤細(xì)胞具有增殖抑制作用. 與 大多數(shù)抗月中瘤藥物作用特點相同,丹皮酚對不同月中瘤細(xì)胞株的增殖表現(xiàn)出不同的 抑制作用.Paeft月中瘤作用不僅表達(dá)在直接抑制月中瘤細(xì)胞的生長,還表現(xiàn)在逆轉(zhuǎn) 月中瘤細(xì)胞多藥耐藥的作用和對多種化療藥物的增敏作用及協(xié)同作用.3. 3增強免疫力作用PaW僅通過調(diào)節(jié)某些免疫學(xué)指標(biāo)來發(fā)揮抗月中瘤效應(yīng),而且還具有提升正常 機體免疫系統(tǒng)功能的作用.

14、據(jù)文獻(xiàn)5報道,與對照組比擬,75. 4. mg?kg 37 . 7 mg?kg 18. 9 mg?kg Pae組的小鼠脾臟指數(shù)分別增力口 28. 3、61. 3、15. 1 , 胸腺指數(shù)分別增加67. 4、79. 1、34. 9 ,淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率分別增加31. 4%、 57. 6 9, 6、20. 9.可見,PaeX寸小鼠免疫功能具有明顯的增強作用.通過觀 察小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能、血清溶血素的形成和二硝基氯苯DNCB致小鼠遲發(fā)型變態(tài)反響Delayed cutaneous hypersensitivity, DcH,發(fā)現(xiàn)丹皮酚能提升小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能,使小鼠血清溶血素明顯高于對照組,同

15、時可增 強DNCB致的皮膚遲發(fā)型變態(tài)反響,說明Pae對小鼠特異性體液免疫功能、特異 性細(xì)胞免疫功能以及非特異性免疫功能均有增強作用.3. 4鎮(zhèn)痛、消炎作用王憲齡等運用熱板法和扭體法對牡丹皮的鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)牡丹皮 的高、中、低劑量組均表現(xiàn)出一定的鎮(zhèn)痛作用,能延長小鼠疼痛潛伏期,減少醋 酸所致小鼠扭體反響次數(shù).其中以高劑量組作用最強.牡丹皮水煎劑能抑制炎癥 組織的通透性和前列腺素PG的生物合成,從而對多種急性炎癥反響具有抑制作用,并且它不抑制特 異性抗體的產(chǎn)生,不影響補體旁路途經(jīng)的溶血活性,故在發(fā)揮抗炎作用的同時不 影響正常的體液免疫功能.湯文璐等先用角叉菜膠誘導(dǎo)形成大鼠急性足爪月中脹模

16、 型、用二甲苯誘導(dǎo)形成小鼠耳片水月中模型、用福氏完全佐劑CFA誘導(dǎo)形成大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型,然后用丹皮總音TGM»行灌胃給藥抗炎治療.發(fā)現(xiàn)TGM寸 上述幾種炎癥均有明顯的抑制作用.止匕外,丹皮酚還有護(hù)肝、保護(hù)腎缺血再灌注 損傷、降血糖等眾多藥理作用.3.5抑菌作用早期研究發(fā)現(xiàn)丹皮酚在體外l ： 15 000濃度下對大腸桿菌、枯草桿菌有明顯 抑制作用,在體外1 ： 2 000濃度下對金黃色葡萄球菌有明顯抑制作用,對流感 病毒及常見致病性皮膚真菌亦有抑制作用.高健等,通過瓊脂擴散抑菌試驗證實, 丹皮酚及其衍生物對受試的白色念珠菌、 金黃色葡萄球菌、短小芽抱桿菌和肺炎 克雷伯氏菌4種革蘭氏

17、陰性菌、陽性菌皆有明顯的抑制作用.4 .丹皮酚的結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)化學(xué)名：2-羥基-4-甲氧基-苯乙酮化學(xué)式丹皮酚的物理性質(zhì)：丹皮酚為白色或微黃色有光澤的針狀結(jié)晶,無色針狀結(jié)品乙醇,熔點49C-51 C,氣味特殊,味微辣,易溶于乙醇和甲醇中,溶于乙 醴、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中,稍溶于水,在熱水中溶解,不溶于冷水,能 隨水蒸汽揮發(fā).丹皮酚可隨水蒸氣蒸儲,且在紫外光區(qū)有強烈吸收,在 274n成 長處E 1% 1cn為862,利用此性質(zhì)可用紫外分光光度計進(jìn)行測定.5 .丹皮酚的鑒別(1)取本品約5mg加乙醇1ml溶解后,加重氮苯磺酸試液0.5ml,搖勻,加 碳酸氫鈉試液1滴,漸顯橙紅色.(2)取本品

18、加乙醇溶解,制成每1ml中約含5 g的溶液,照分光光度法(中國 藥典2000年版二部附錄IV A)測定,在314n林口274nmi勺波長處有最大吸收,在 295nmF 口 244nm勺波長處有最小吸收.(3)在含量測定項下記錄的色譜圖中,供試品主峰的保存時間應(yīng)與丹皮酚對 照品峰的保存時間一致.(4)本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜(光譜集46圖)一致6 .含量測定照氣相色譜法(中國藥典200孫版第二部附錄VI E)測定.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以聚乙二醇(PEG)-20那么固定相,涂布濃度為 10%;柱溫為200C.理論板數(shù)按丹皮酚峰計算應(yīng)不低于 2000,丹皮酚峰與內(nèi)標(biāo) 物質(zhì)峰的別離度應(yīng)符

19、合要求.校正因子測定 取聯(lián)苯適量,力口石油醴(6090C)制成每lml含0.5mg的溶液, 作為內(nèi)標(biāo)溶液.另取丹皮酚對照品約50mg精密稱定,置具塞錐形瓶中；精密加 入內(nèi)標(biāo)溶液50ml,搖勻,取2膜注入氣相色譜儀,按峰面積計算校正因子.測定法 取本品50mg精密稱定,置具塞錐形瓶中；精密參加內(nèi)標(biāo)溶液50ml, 搖勻,吸取2仙1,注入氣相色譜儀,測定,計算,即得.7 .丹皮酚的應(yīng)用7.1 丹皮酚在醫(yī)藥中的應(yīng)用藥理實驗已經(jīng)證實丹皮酚具有消炎抗菌1、解熱鎮(zhèn)痛、降壓利尿、抗凝血、 抗變態(tài)性反響、抗癌、抗血栓形成、抗動脈粥樣硬化、抑制月中瘤、促進(jìn)微循環(huán)、 增強免疫功能等作用.以丹皮酚單體為主料做成的膠囊

20、劑、注射劑、口服液、顆 粒劑、酊劑,外用性軟膏劑、膜劑、片劑、凝膠劑、磷脂復(fù)合體等已廣泛用于臨 床應(yīng)用.如5%徐長卿注射荊朋于治療風(fēng)濕痛、胃痛、及其他諸痛；丹皮酚注射 劑及丹皮酚的親水性軟膏和吸水性軟膏用于治療皮膚瘙瘁、過敏性皮炎,濕疹等；丹皮酚口腔藥膜具有直接通過口腔粘膜吸收起效特點；以丹皮酚為主料的消月中貼膏能有效抑制急性炎癥和亞急性炎癥反響. 隨著人們對丹皮酚藥理活性的深入研 究,丹皮酚還將擴大在,心血管、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病等方面的應(yīng)用.7.2 丹皮酚在化裝品中的應(yīng)用丹皮酚是一種天然無毒的日化添加劑, 它能抑制細(xì)胞內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生,具 有使皮膚增白,將皮膚沉積色素復(fù)原退色,消淤化斑等作用.

21、如含丹皮酚的特效 美容霜和駐顏面膜用于促進(jìn)面部皮膚血液循環(huán)、活化衰老的表皮細(xì)胞、消除皺紋、 去斑等作用；以其為主要成分做成的護(hù)發(fā)去屑香波和健美發(fā)膠具有保溫護(hù)發(fā)、促進(jìn)頭發(fā)增生、止瘁等作用.止匕外,丹皮酚還廣泛用于婦女、嬰兒衛(wèi)生用品、食品 添加劑、保健茶品、飼料添加劑中.二、實驗方案設(shè)計1.實驗?zāi)康?1)掌握用水蒸汽蒸儲法提取丹皮酚的方法；(2)學(xué)會用薄層色譜法鑒別丹皮酚；2 .實驗意義水蒸汽蒸儲,可以直接獲取丹皮酚晶體,提取物純度較高,尤其是水蒸汽蒸 儲法本錢低,且不需要特殊儀器.在鑒定丹皮酚時用薄層色譜法,簡單,易行, 重現(xiàn)性好,可靠性高,在對丹皮酚的提取中水蒸氣蒸儲和薄層色譜法都具有重要 意

22、義.3 .實驗原理丹皮酚提取原理：水蒸氣蒸儲法是指先蒸儲提取揮發(fā)性成分、將藥渣再加水 提取的方法,適用于含揮發(fā)性成分藥材的提取,但其提取率遠(yuǎn)低于醇提法.水蒸氣蒸儲法又可以分為直接水蒸氣蒸儲法、 堿溶液浸泡一水蒸氣蒸儲法、酸溶液 浸泡一水蒸氣蒸儲法、鹽溶液浸泡一水蒸氣蒸儲法.研究發(fā)現(xiàn),加鹽蒸儲法是丹 皮酚提取的最優(yōu)方法.為了提升其在水中溶解度,通常采用有機溶劑、助溶 劑、外表活性劑等途徑.在蒸儲過程中可以加鹽、先加堿后加酸等提升提取率. 提取過程中,適宜pH£圍的選擇以及保證溶液貯存過程中的穩(wěn)定性是關(guān)鍵.丹皮酚的鑒定原理：薄層掃描法簡便易行,測定結(jié)果穩(wěn)定,重現(xiàn)性好,準(zhǔn)確 可靠,尤其在中

23、藥復(fù)方制劑中可較好地排除其他成分的干擾.白少巖等應(yīng)用反射法鋸齒掃描法測定了牡丹皮中丹皮酚含量,以環(huán)己烷一氯仿一無水乙醇7: 3:1為展開劑,將待測溶液在0. 13 m怵膠電展開,波長A =274 nm和An=365 am 下進(jìn)行掃描,結(jié)果均較理想,證實薄層掃描法操作簡便、省樣、省時,不失為理 想方法4 .實驗流程圖牡丹皮飲片150g 網(wǎng)碎牡丹皮細(xì)粉| 1500mLzK, 40gNaCl,15mL95吸醇,40 C 浸泡 1h 浸泡好的牡丹皮I共水蒸儲 儲出液 靜置析晶,過濾 II丹皮酚粗品濾液匕0mL無水乙醇溶解 溶液| 200mL水,靜置析晶結(jié)晶液過濾II丹皮酚純品濾液5 .實驗步驟5.1

24、提取別離方法： 稱取150gtt丹皮,用粉碎機粉碎,將粉碎好的牡丹皮細(xì)粉放入 1000燒杯中, 參加1500m本,15mL95%酉I, 40gNaCl,于40c的熱水中浸泡； 浸泡40min后,取850m西材進(jìn)行水蒸氣蒸儲,剩余藥材繼續(xù)浸泡；2h后將剩余的650m西材參加圓底燒瓶進(jìn)行蒸儲； 收集所有儲出液,放置析晶,有白色針狀結(jié)晶析出,濾取結(jié)晶,合并所有結(jié) 品產(chǎn)物,得丹皮酚粗品；將粗品置于500m蛻杯中,參加40mL£水乙醇溶解,待溶解完全后參加200mL 水,放置析晶； 待乙醇揮發(fā)完全后,過濾,收集所有結(jié)晶,得丹皮酚純品.考前須知：假設(shè)在制取過程中得不到白色結(jié)晶,只有油珠狀物質(zhì)沉出

25、,可在蒸儲液中參加 少量品種,摩擦瓶壁后,既有較大量的丹皮酚結(jié)晶析出.也可用乙醴萃取蒸儲液幾次,合并萃取液后,加無水硫酸鈉脫水,回收乙醴至 少量,放置析品,抽濾,結(jié)晶用少量水洗23次,置于枯燥器中枯燥.5.2 結(jié)構(gòu)鑒定(1)定性鑒別1 .測熔點：取少量純品,在顯微熔點測定儀測熔點,熔點 49C -51 C2 .顯色反響：取本品約5mg加乙醇1ml溶解后,加重氮苯磺酸試液0.5ml ,搖勻,加碳 酸氫鈉試液1滴,漸顯橙紅色三氯化鐵反響取產(chǎn)品結(jié)晶少許,滴加5獷氯化鐵醇溶液,呈暗紫色.與濃硝酸反響 取產(chǎn)品結(jié)晶少許,滴加濃硝酸數(shù)滴,呈紅棕色(2)結(jié)構(gòu)鑒定3 .紫外分光光度法：取本品加乙醇溶解,制成每

26、1ml中約含5 g的溶液,照 分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IV A)測定,在314nnffi274nm勺波長 處有最大吸收,在295nnffi244nm勺波長處有最小吸收.4 .薄層色譜法：取本品粉末1g,加乙醴10ml,密塞,振搖10min,濾過,濾 液揮干.殘渣加丙酮2ml使溶解,作為供試品,另取丹皮酚對照品,加丙酮酸制 成每1ml含2mg勺溶液.作為對照品溶液.照薄層色譜法,吸取上述溶液各10微升, 分別點于同一硅膠G1層板上,以環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(4: 1: 0.1)為展開 劑,展開,取出,曬干,噴以2貼草醛硫酸乙醇(1>10)在105c加熱至斑點顯清楚,供試品色譜中,與對照品色譜相應(yīng)的位置,顯相同顏色的斑點6 .實驗儀器與試劑