基因敲除三大技術對比

1、基 因 敲 除大 技 術 對 比技人名稱優(yōu)勢局限性可提供效勞類型基于胚胎干細胞的同源重組技術成熟、可靠、精細是目前 為止唯個可以滿足所 有要求的打靶技術1 需要ES細胞,目前只有小鼠有高效的ES細胞,其它 模式動物的ESC還不能實現(xiàn) 大規(guī)模應用.2周期長、工作量大、費用相比照擬高1全基因敲除模式小鼠2條件性基因敲除模式小鼠3先全敲除再條件性敲除模式小鼠4基因敲入模式小鼠5 ROSA位點定點轉基因TALEN技術基因敲除效率高,速度快,可實現(xiàn)多物種基因敲除基因敲入效率較低,多基因敲除困難,系統(tǒng)構建相對復雜,存在脫靶風險1全基因敲除大/小鼠2全基因敲除細胞系EGE系統(tǒng)基因敲除/敲入效率高,速度快,可

2、實現(xiàn)多基因、多物種基因敲除/敲入,系統(tǒng)構建簡單存在脫靶風險,但通過選擇合 適的sgRNA可以有效降低脫 靶率,In vivo 脫靶可通過傳 代去除1全基因/條件性基因敲除大/小鼠2全基因/條件性報告基因敲除/敲入大/小鼠3 CRISPR心as9粒構建4細胞系敲除/敲入免疫類B-NSG 小鼠：Biocytogen-NOD-SCID-IL2rgB-NSG小鼠是NOD遺傳背景,Prkdc和IL2rg雙基因敲除的小鼠,是目前國際公認的免疫缺陷程度最 高、最適合人源細胞或組織移植的工具小鼠.根本特征?NOD (non-obese diabetes )遺傳背景：自發(fā)I型糖尿??；其巨噬細胞對人源細胞吞噬作用

3、弱；先天 免疫系統(tǒng),如補體系統(tǒng)和樹突狀細胞功能降低.?Prkdcscid : Prkdc (protein kinase DNA-activated catalytic )基因突變,小鼠的功能性T 和 B 細胞缺失,淋巴細胞減少,表現(xiàn)為細胞免疫和體液免疫的重度聯(lián)合免疫缺陷(severe combined immunedeficiency, scid ).?Il2rgnull : Interleukin-2 受體的gamma 鏈(IL-2R yc,又稱 CD132 )位于小鼠 X染色體上,是具 有重要免疫功能的細胞因子Il2、Il-4、Il-7、Il-9、Il-15和I-21的共同受體亞基,該基

4、因敲除后的小鼠機體免疫功能嚴重降低,尤其是 NK細胞的活性幾乎喪失.B-NSG小鼠：綜合了 NOD-SCID-IL2rg背景特征,具有重度免疫缺陷表型,無成熟 T細胞、B細胞和功能性NK細胞,細胞因子信號傳遞水平缺失等.非常適合人造血干細胞及外周血單核細胞的移植和生長.優(yōu)點?迄今世界上免疫缺陷程度最高的工具小鼠；?與NOD-scid 小鼠相比壽命更長,平均長達1.5年；?對人源細胞和組織幾乎沒有排斥反響；?少量細胞即可成瘤,依賴于細胞系或細胞類型；?無8淋巴細胞泄漏.成功案例小鼠脾臟流式分析圖：主要應用領域?ES和iPS細胞研究?造血和免疫學研究IL17-EGFP knockin miceCa

5、talog number: bcg -IM-0001Name : C57BL/6-Il17atm1BcgenMouse strain : IL17 EGFP knockin miceGene common name : Interleukin 17A, IL 17A,IL17AChromosome ： Chromosome 1Allele Type : Targeted (Knockin)Strain of Origin ： C57BL/6JES Cell Line Strain ： C57BL/6Expressed Gene ： EGFP, Enhanced Fluorescent ProteinNote : DNA fragment containing IRES EGFP -SV40polyA signal sequence