標(biāo)本采集分離培養(yǎng)和鑒定

1、1. 標(biāo)本采集標(biāo)本采集應(yīng)在 2 小時(shí)內(nèi)用無菌方法采集新鮮標(biāo)本， 置于滅菌容器中或直接接 種于增菌培養(yǎng)基中， 登記好標(biāo)本編號(hào)和來源送檢， 如不能及時(shí)送檢， 標(biāo)本要存放 在專用的標(biāo)本運(yùn)送箱內(nèi)，包扎好以免容器破損。1. 1 血液應(yīng)根據(jù)病程的不同階段采集不同標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)， 宜在發(fā)病早期和抗生素使用 前采集。抽取病人35ml血液，立即接種已在室溫（20°C ）平衡的血培養(yǎng)瓶 中。推薦采血量為10ml。所有情況下，接種的標(biāo)本量必須做好記錄。血培養(yǎng)瓶 在室溫條件下運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室。1. 2 血清余下的 2ml 病人血液（作為上述采集血液程序的一部分） 及病后 2-3 周采集 恢復(fù)期血液2ml，分離血清

2、做血清學(xué)檢測(cè)（肥達(dá)氏試驗(yàn)等）。1. 3 糞便用無菌采便器采集新排出的糞便約1g直接放入增菌培養(yǎng)管（8-10ml沙門菌 增菌液）內(nèi)，盡快送檢。1. 4 水樣標(biāo)本 按傷寒、副傷寒防治手冊(cè)中所述的方法進(jìn)行水源標(biāo)本的采 集和分離培養(yǎng)。1. 5食品標(biāo)本 固體食品需剪碎和研磨，奶和奶制品可直接取樣增菌，具體操 作見傷寒、副傷寒防治手冊(cè) ，所用的培養(yǎng)基及鑒定方法參考中華人民共和 國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法微生物學(xué)部分） 。注意事項(xiàng) 采集標(biāo)本及標(biāo)本接收時(shí)應(yīng)認(rèn)真核對(duì)名單及標(biāo)本號(hào)， 并作好收樣記 錄（附表 2）。2. 分離培養(yǎng)2. 1血培養(yǎng) 血培養(yǎng)瓶放在37C培養(yǎng)箱里培養(yǎng)10天，每天觀察生長(zhǎng)情況，如出 現(xiàn)混濁現(xiàn)

3、象，應(yīng)馬上轉(zhuǎn)種麥康凱 /血平板，即使沒有肉眼可見的生長(zhǎng)， 也必須在 1、2、7 天轉(zhuǎn)種麥康凱 /血平板。2. 2糞便培養(yǎng) 增菌管37C培養(yǎng)1824小時(shí)，挑取培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種到SS平板，37C 培養(yǎng) 1824 小時(shí)，如果沒有觀察到有可疑菌落生長(zhǎng)， 再繼續(xù)培養(yǎng) 24小時(shí)， 觀察 結(jié)果，挑取可疑菌落。2. 3 水樣標(biāo)本 按傷寒、副傷寒防治手冊(cè)中所述的方法進(jìn)行水源標(biāo)本的采集和分離培養(yǎng)。2. 4食品標(biāo)本 固體食品需剪碎和研磨，奶和奶制品可直接取樣增菌，具體操 作見傷寒、副傷寒防治手冊(cè)，所用的培養(yǎng)基及鑒定方法參考中華人民共和 國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法微生物學(xué)部分）。2. 5菌落形態(tài)見表1。表1 沙門菌屬菌落

4、形態(tài)沙門菌屬大腸桿菌麥康凱平板SS平板不發(fā)酵乳糖（無色）的光滑型菌落不發(fā)酵乳糖、產(chǎn)H2S （中心黑色的無色菌落）或不產(chǎn)H2S發(fā)酵乳糖（粉色）的光滑型菌落發(fā)酵乳糖（粉色）菌落3. 生化鑒定從每個(gè)標(biāo)本的血培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)種的麥康凱平板挑取3個(gè)可疑菌落，糞便培養(yǎng)轉(zhuǎn)種的麥康凱/SS平板挑取3-5個(gè)可疑菌落分別轉(zhuǎn)種到以下培養(yǎng)基：3. 1 KIA :穿刺2/3中段，在斜面上劃線。37°C培養(yǎng)1824h，觀察生化試驗(yàn)結(jié)果，挑取 KIA生化管上菌苔做革蘭 氏染色，并做好記錄。3. 2符合沙門菌KIA反應(yīng)的，取該管斜面菌苔轉(zhuǎn)種MIU :穿刺接種培養(yǎng)基，并沿穿刺線拔出接種針。西檬氏枸櫞酸鹽瓊脂：在斜面上劃線。*

5、生化結(jié)果及血清凝集試驗(yàn)符合菌株轉(zhuǎn)種一個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板（藥敏實(shí)驗(yàn)用）。傷寒副傷寒沙門菌生化特性如表 2,表3。菌KIAMIU乳糖葡萄糖H2S斜面顏色中段顏色尿素動(dòng)力靛基質(zhì)顏色變化黃（有氣泡）底層不變色加大腸桿菌u黃±+試劑后表層呈吲哚紅志賀菌一+一紅黃一一±底層不變色傷寒菌一+±紅黃（無氣泡）一+一底層不變色細(xì)菌擴(kuò)散生長(zhǎng)甲型副傷寒菌一一紅黃（有氣泡）一+一同上乙型副傷寒菌一+紅黃（有氣泡）一+一同上丙型副傷寒菌一+紅黃（有氣泡）一+一同上 產(chǎn)酸產(chǎn)氣；土多數(shù)陽性，少數(shù)陰性；u多數(shù)陰性；少數(shù)陽性；+產(chǎn)酸不產(chǎn)氣;堿性反應(yīng)為紅色；產(chǎn)酸為黃色。4. 血清學(xué)鑒定取符合傷寒、副傷寒

6、菌生化反應(yīng)的 KIA斜面上菌苔用沙門菌屬診斷血清做 玻片凝集試驗(yàn)，并設(shè)鹽水對(duì)照，見表 4。方法：挑取KIA斜面上菌苔，先用0多價(jià)血清凝集，如發(fā)生凝集，再選用 單價(jià)0因子血清凝集（不需煮沸），并用鹽水做對(duì)照。如果 0多價(jià)血清不凝集， 則用Vi血清鑒定Vi抗原。將細(xì)菌制成懸液，經(jīng)100C水浴30分鐘，破壞其Vi 抗原，然后再與0多價(jià)和單價(jià)血清凝集（先做鹽水、0多價(jià)、Vi，再做02、04、 06.7、09因子血清。）。0抗原確定后，再用H因子血清凝集。不同沙門菌血清型，對(duì)0、H及Vi因子血清反應(yīng)情況如下：鳥氨酸脫竣酶 賴氨酸脫竣酶 阿拉伯糖 木膠糖 衛(wèi)茅醇 枸椽酸鹽V I P 甲基紅 尿素 靛基質(zhì)

7、硫化氫 蔗糖 甘露醇 麥芽糖 乳糖 葡萄糖 動(dòng)力傷寒桿菌甲型副傷寒菌乙型副傷寒菌丙型副傷寒菌+ + + + ± 一 + 一 + + + + + 一 年 一 二 + 一一 一 一 +注：陰性（不產(chǎn)酸）；+陽性（產(chǎn)酸）；3產(chǎn)酸產(chǎn)氣；土 多數(shù)陽性，少數(shù)陰性; 二多數(shù)陰性，少數(shù)陽性。表4傷寒、副傷寒等沙門菌血清凝集反應(yīng)菌型O抗原-H抗原Vi菌種來源I相u相傷寒沙門菌9.12d-+人糞、血、脊液、膽汁、腎、穿刺液；豬、蠅、土壤、污水甲副1.2.12a-人糞、血、骨髓、膽汁；豬、污水乙副1.4.5.12b1,2-人糞、血、尿、骨髓、膽汁；豬、牛、驢、禽類、蠅、食品、污水丙副6.7c1,5+人糞、血、膽汁；豬、牛、豆制品、食物、污水注：腸桿菌科細(xì)菌各屬之間，在生化方面有類似之處，抗原方面也可有交叉反應(yīng)，加之有時(shí)可出現(xiàn)不典型的菌株， 因此，僅做一般生化反應(yīng)和血清學(xué)鑒定，還不能有做出正確的結(jié)論，需要進(jìn)一步做系統(tǒng)的生化反應(yīng)的血清學(xué)分型。.二A-F多價(jià)血清)(+ )生化反應(yīng)(KIA、MIU、H2S、動(dòng)力、 枸椽酸鹽、靛基(-)用單價(jià)0因子血清分群1質(zhì)、賴氨酸)有意義的標(biāo)本做全套再做H因子血清定型；生化反應(yīng)|V5.檢驗(yàn)程序傷寒