食品微生物檢驗室建設(shè)與管理

1、第二章 食品微生物檢驗室建設(shè)與管理【知識目標】1. 了解食品微生物檢驗室及配制情況，并做到檢驗室科學規(guī)范管理，了解檢驗室中該用到哪些儀器設(shè)備。2. 理解食品微生物檢驗室安全條例，理解玻璃器皿的種類及清洗滅菌的操作過程。3. 掌握檢驗室中常用儀器的使用與維護，掌握無菌室的滅菌種類和方法?！炯寄苣繕恕?. 會辦理食品微生物檢驗室的設(shè)備配置工作。2. 能處理檢驗室常遇到的安全問題，如何將玻璃器皿清洗干凈，能處理微生物實驗室常用儀器設(shè)備長久安全使用與維護的技術(shù)問題。3. 能運用無菌室的熏蒸消毒方法對玻璃器皿進行包扎、滅菌。【案例導入】實驗室是高等學校進行教學和研究的重要基地，是新形勢下培養(yǎng)高素質(zhì)人材、

2、出高水平成果、服務(wù)經(jīng)濟建設(shè)的主要場所。我國著名的物理學家馮瑞院士說：“實驗室是現(xiàn)代大學的心臟”。形象地說明了實驗室的重要作用。但是，隨著我國高校對外開放力度的加大和學校內(nèi)部管理體制改革的不斷深入，高校實驗室使用頻繁，人員集中且流動性大，加之種類繁多的化學藥品、易燃易爆物品、劇毒物品和大量的儀器設(shè)備及其技術(shù)資料都存放在實驗室。這就出現(xiàn)了許多新情況、新問題，其中以實驗室安全問題最為突出，實驗室事故的案例也時有發(fā)生。2004年的SARS實驗室事件至今還依然讓人記憶猶新，當時中國（包括臺灣在內(nèi)）、新加坡等國的一些實驗室沒有經(jīng)過衛(wèi)生部的批準就急于開展了針對SARS病毒的科學研究，由于實驗室本身的條件不足

3、、實驗室人員的粗心或?qū)嶒炇夜芾聿簧频纫l(fā)了許多問題，最嚴重的就是發(fā)生了實驗室感染，讓人們異常震驚。2007年8月，英格蘭南部薩里郡出現(xiàn)兩起口蹄疫事件，英國環(huán)境、食品和農(nóng)村事務(wù)部經(jīng)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)暴發(fā)的口蹄疫疫情源自疫情發(fā)生地附近動物衛(wèi)生研究所和梅里亞爾動物保健公司的實驗室，而人類活動可能是病毒得以傳播的途徑。因此說，我們實驗室管理人員要遵守食品微生物檢驗室的規(guī)章制度，確保檢驗室安全規(guī)則順利實施，維護好儀器設(shè)備，盡量杜絕實驗事故的發(fā)生，以減少個人危害及環(huán)境的污染。第一節(jié) 微生物檢驗室一、食品微生物檢驗室基本要求食品微生物檢驗室以質(zhì)量管理、衛(wèi)生以及監(jiān)控危害分析和關(guān)鍵控制點計劃的有效性進為目的，進行檢測、

4、鑒定或描述食品中致病微生物存在與否的實驗室。由于微生物的特殊生物學特性，對致病性微生物的檢測必須在特定的食品微生物檢驗室內(nèi)進行。食品微生物檢驗室完善的組織與管理、規(guī)劃建設(shè)和配套環(huán)境設(shè)施的科學性和合理性、檢驗人員的良好檢驗器具和耗材的質(zhì)量、檢驗方法的合適性、儀器設(shè)備的狀態(tài)、檢驗質(zhì)量的準確性，關(guān)系到食品微生物的檢測質(zhì)量，而且關(guān)系到食品安全，甚至關(guān)系到個人安全、社區(qū)安全和經(jīng)濟貿(mào)易，因此必須通過適當?shù)谋O(jiān)控手段和科學合理的驗證試驗來對其進行管理。 管理要求食品微生物檢驗室應(yīng)根據(jù)國際通用標準規(guī)范，結(jié)合食品檢驗的實際情況，嚴格食品微生物室質(zhì)量控制規(guī)范，把食品微生物檢測室管理納入科學化和規(guī)范化管理軌道，以便于

5、提高食品微生物檢驗室的整體質(zhì)量管理水平，進而提供食品安全檢驗的技術(shù)保證。同時，食品微生物檢驗室應(yīng)具有明確的法律地位。不應(yīng)因經(jīng)濟或政治的因素（例如誘惑）而影響檢測。檢測結(jié)果應(yīng)具有一定的權(quán)威性。食品微生物檢測室要履行對良好職業(yè)行為、檢驗工作質(zhì)量的承諾。食品微生物檢驗室有義務(wù)完成職責范圍內(nèi)的食品微生物檢測工作，對檢出客戶要求以外的食源性致病微生物，應(yīng)將結(jié)果報告客戶，必要時通知相關(guān)部門。并有檢驗室管理人員負責對實驗室質(zhì)量管理體系及全部的食品微生物檢測活動進行監(jiān)督和評審，要設(shè)有對技術(shù)工作和所需資源供應(yīng)全面負責的技術(shù)管理者，以保證所要求的檢驗室工作質(zhì)量。食品微生物檢測室還應(yīng)該建立并實施一套技術(shù)記錄進行識別

6、、收集、索引、訪問、存放、維護以及安全處置的程序。所有記錄均應(yīng)清晰明確，便于檢索。并有專人負責應(yīng)有程序保護和備份以電子形式存儲的記錄，以防止未經(jīng)授權(quán)的侵入和修改。 環(huán)境條件要求 1. 檢驗室內(nèi)要經(jīng)常保持清潔衛(wèi)生，每天上下班應(yīng)進行清掃整理，桌柜等表面應(yīng)每天用消毒液擦拭，保持無塵，杜絕污染。 2. 檢驗室應(yīng)井然有序，不得存放實驗室外及個人物品、儀器等，實驗室用品要擺放合理且有固定位置。 3. 隨時保持檢驗室衛(wèi)生，不得亂扔紙屑等雜物，測試用過的廢棄物要倒在固定的箱筒內(nèi)，并及時處理。 4. 檢驗室應(yīng)具有優(yōu)良的采光條件和照明設(shè)備。 5. 檢驗室工作臺面應(yīng)保持水平和無滲漏，墻壁和地面應(yīng)當光滑和容易清洗。

7、6. 檢驗室布局要合理，一般檢驗室應(yīng)有準備間和無菌室，無菌室應(yīng)有良好的通風條件，如安裝空調(diào)設(shè)備及過濾設(shè)備，無菌室內(nèi)空氣測試應(yīng)基本達到無菌。 技術(shù)要求1檢驗人員的要求食品微生物檢驗室的檢驗人員應(yīng)具備接受檢驗工作所必需的設(shè)備操作、微生物檢測技能（如倒平板、菌落計數(shù)、無菌操作等），積極參加檢驗室管理和生物安全等方面的培訓。檢驗人員應(yīng)具有一定資質(zhì)的微生物學或相近專業(yè)的知識，能夠操作或指導微生物檢驗。應(yīng)按要求根據(jù)相應(yīng)的教育、培訓、經(jīng)驗進行資格確認，檢驗員的基本知識和基本經(jīng)歷在評審中顯得尤其突出。因為微生物檢驗是通過形態(tài)特征、生理生化反應(yīng)征、生態(tài)特征、血清學反應(yīng)等來鑒定菌種的，這需要一個受過微生物方面專門

8、培訓具有一定的理論基礎(chǔ)，并且具有一定的檢驗經(jīng)歷的檢驗人員才能正確地檢驗食品中的微生物。檢驗人員進入檢驗室必須穿工作服，進入無菌室換無菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非檢驗員不得進入檢驗室，嚴格執(zhí)行安全操作規(guī)程。檢驗室管理者應(yīng)授權(quán)專門人員進行特殊類型的抽樣、檢測、發(fā)布檢測報告、提出意見和解釋以及操作特殊類型的設(shè)備。授權(quán)的報告簽發(fā)人應(yīng)具有相關(guān)的工作經(jīng)驗和專業(yè)知識，包括有關(guān)法規(guī)和技術(shù)要求等。檢驗人員要定期檢查試劑有無明晰標簽，定期檢查、保養(yǎng)、檢修儀器, 切不可在冰箱內(nèi)存放和加工私人食品。對各種器材應(yīng)建立領(lǐng)取消耗記錄，貴重儀器要有使用記錄，對破損遺失的器材應(yīng)填寫報告；藥品、器材、菌種不經(jīng)批準不得擅自外借和轉(zhuǎn)讓

9、，更不得私自拿出，應(yīng)嚴格執(zhí)行菌種保管制度。檢驗人員不能在檢驗室內(nèi)吸煙、進餐、會客、喧嘩，離開檢驗室前認真檢查水、電、暖氣、門窗，對于有毒、有害、易燃、污染、腐蝕的物品和廢棄物品應(yīng)按有關(guān)要求執(zhí)行。2設(shè)施的要求食品微生物實驗室的選址應(yīng)考慮對周圍環(huán)境的關(guān)系。微生物實驗室應(yīng)選擇在水電齊全、環(huán)境潔凈、空氣清新的地方，盡量避免與飼料倉庫及排放“三廢”的工廠相鄰。尤其是夏季，更應(yīng)注意實驗室周圍的環(huán)境衛(wèi)生。一級食品微生物實驗室無需特殊選址，普通建筑物即可，但應(yīng)有防止昆蟲和嚙齒動物進入的設(shè)計。二級食品微生物實驗室可用普通建筑物，但應(yīng)自成一區(qū)，宜設(shè)在建設(shè)物的一端或一側(cè)，與建筑物其他部分可相通，但應(yīng)安裝自動關(guān)閉的門

10、，新建實驗室應(yīng)遠離公共場所。三級食品微生物實驗室可共用普通建筑物，但應(yīng)自成一區(qū)，宜設(shè)在建設(shè)物的一端或一側(cè)，與建筑物其他部分不相通，新建實驗室應(yīng)遠離公共場所，主實驗室與外部建筑物的距離應(yīng)不小于外部建筑物高度的1.2倍。四級食品微生物實驗室應(yīng)建造在獨立建筑物的完全隔離區(qū)域內(nèi)，該建筑物應(yīng)遠離公共場所和居住建筑，其間應(yīng)設(shè)植物隔離帶，主實驗室與外部建筑物的距離應(yīng)不小于外部建筑物高度的1.5倍。微生物實驗室的設(shè)計要求和地址選擇都應(yīng)當盡量滿足微生物生長、發(fā)育的需要，能保證實施菌種分離和擴大培養(yǎng)的無菌操作規(guī)程，使接種的菌種能有一個潔凈、恒溫和空氣清新的培養(yǎng)環(huán)境，以提高微生物的成活率和純培養(yǎng)質(zhì)量。 食品微生物檢

11、驗室應(yīng)具有進行微生物檢測所需的適宜的、充分的設(shè)施條件，檢驗室應(yīng)有檢測設(shè)施及輔助設(shè)施（大門、走廊、管理樣品室、洗手間、儲存室等）。某些檢測設(shè)備可能需要特殊的環(huán)境條件。檢驗室負責人應(yīng)制定科學合理的環(huán)境監(jiān)測程序（使用諸如空氣采樣器、沉降平板、接觸盤或棉拭子等方法監(jiān)測空氣和表面微生物污染）。應(yīng)保證工作區(qū)潔凈無塵，空間應(yīng)與微生物檢測需要及檢驗室內(nèi)部整體布局相稱。通過自然條件或換氣裝置或使用空調(diào)，保持良好的通風和適當?shù)臏囟取Ｊ褂每照{(diào)時，應(yīng)根據(jù)不同工作類別檢查、維護和更換合適的過濾設(shè)備。依據(jù)所檢測微生物的不同等級，檢驗室應(yīng)對授權(quán)進入的人員采取嚴格限制措施，根據(jù)具體檢測活動（如檢測種類和數(shù)量等），有效分隔不相

12、容的業(yè)務(wù)活動。應(yīng)采取措施把交叉污染的風險降低到最小。檢驗室的設(shè)計應(yīng)能將意外傷害和職業(yè)病的風險降到最低，并能保證所有工作人員和來訪者免受某些已知危險的傷害。應(yīng)準備足夠數(shù)量的洗手設(shè)施和急救材料。獨立的洗手池，非手動控制效果更好，最好在檢驗室的門附近，并有發(fā)生泄漏時的處理程序。微生物檢測室地面為環(huán)氧樹脂材料，具有無縫隙、耐腐蝕、平整、容易清洗的特征。地面地腳線用陰角鋁材裝飾，美觀且嚴密性好。整個實驗室通過科學設(shè)計，精心施工，使實驗室內(nèi)形成堅固、無縫、平滑、美觀、不反光、不積塵、不生銹、防潮、抗菌、性能優(yōu)良的無菌表面和內(nèi)殼。3設(shè)備和藥品的要求食品微生物檢驗室設(shè)備應(yīng)配有：溫控設(shè)備（培養(yǎng)箱、冰箱、冰凍機、

13、烤箱）、測具（溫度計、計時器、天平、酸度計、菌落計數(shù)器等）、定容設(shè)備（吸管、自動分液器、移液管等）、除菌和滅菌設(shè)備（超凈工作臺或生物安全柜、高壓滅菌鍋）、其他設(shè)備(顯微鏡、離心機、均質(zhì)器、振蕩器、生化培養(yǎng)箱、厭氧培養(yǎng)設(shè)備等)。儀器安放合理，貴重儀器有專人保管，建立儀器檔案，并備有操作方法，保養(yǎng)、維修、說明書及使用登記本，做到經(jīng)常維護、保養(yǎng)和檢查，精密儀器不得隨意移動，若有損壞需要修理時，不得私自拆動、應(yīng)寫出報告、通知管理人員，經(jīng)科室負責人同意填報修理申請、送儀器維修部門。設(shè)備應(yīng)達到規(guī)定的性能參數(shù)，并符合相關(guān)檢測指標。無論何時，只要發(fā)現(xiàn)設(shè)備故障，應(yīng)立即停止使用，必要時檢查對以前結(jié)果的影響。應(yīng)根據(jù)

14、使用頻率在特定時間間隔內(nèi)進行維護和性能驗證，并保存相關(guān)記錄，以確保其處于良好工作狀態(tài)。各種儀器（冰箱、溫箱除外），使用完畢后要立即切斷電源，旋鈕復原歸位，待仔細檢查后，方可離去，同時蓋好有儀器套罩的設(shè)備。依據(jù)食品檢測任務(wù)，制定各種藥品試劑采購計劃，寫清品名、單位、數(shù)量、純度、包裝規(guī)格，出廠日期等，領(lǐng)回后建立文檔，專人管理，每半年做出消耗表，并清點剩余藥品。 藥品試劑陳列整齊，放置有序、避光、防潮、通風干燥，瓶簽完整，劇毒藥品加鎖存放、易燃、揮發(fā)、腐蝕品種單獨貯存。稱取藥品試劑應(yīng)按操作規(guī)范進行，用后蓋好，必要時可封口或黑紙包裹。不使用過期或變質(zhì)藥品。二、微生物檢驗室的生物安全與質(zhì)量控制 微生物檢

15、驗室的生物安全致病微生物是影響食品安全各要素中危害最大的一類，食品微生物污染是涉及面最廣、影響最大、問題最多的一類污染，而且這種現(xiàn)象還將持續(xù)下去。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)估計，全世界每分鐘就會有10名兒童死于腹瀉病，再加上其他的食源性疾病，如霍亂、傷寒等，在全世界范圍內(nèi)受到食源性疾病侵害的人數(shù)更令人震驚。食品微生物檢測是食品安全監(jiān)控的重要組成部分，但由于微生物的特殊生物學特性，對致病性微生物的檢測必須在特定的食品微生物實驗室內(nèi)進行，食品微生物實驗室的規(guī)劃建設(shè)和配套環(huán)境設(shè)施的科學性和合理性，不僅關(guān)系到食品微生物的檢測質(zhì)量，而且關(guān)系到個人安全和環(huán)境安全。近年來隨著中華人民共和國國務(wù)院令第424號病

16、原微生物實驗室生物安全管理條例的頒布，以及GB19489-2004實驗室生物安全通用要求、GB 50346-2004生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范等有關(guān)生物實驗室的相關(guān)管理條例和強制性技術(shù)規(guī)范的出臺，在多個方面規(guī)范了生物安全實驗室的設(shè)計、建造、檢測、驗收的整個過程，從根本上改變了我國缺乏食品微生物實驗室建筑技術(shù)規(guī)范和評價體系以及食品微生物實驗室統(tǒng)一管理規(guī)范的現(xiàn)狀，將把涉及生物安全的實驗室建設(shè)和管理納入標準化、法制化、實用性和安全性軌道。依據(jù)實驗室所處理感染性食品致病微生物的生物危險程度，可把食品微生物實驗室分為與致病微生物的生物危險程度相對應(yīng)的食品微生物實驗室，其中一級對生物安全隔離的要求最低，四

17、級最高。不同級別食品微生物實驗室的規(guī)劃建設(shè)和配套環(huán)境設(shè)施不同。食品微生物實驗室所檢測微生物的生物危害等級大部分為生物安全二級，少數(shù)為生物安全三級和四級（比如霍亂弧菌）。微生物實驗室是一個獨特的工作環(huán)境，工作人員受到意外感染的報道卻并不鮮見，其原因主要是對潛在的生物危害認識不足、防范意識不強、不合理的物理隔離和防護、人為過錯和不規(guī)范的檢驗操作。除此之外，隨著應(yīng)用微生物產(chǎn)業(yè)規(guī)模的日益擴大，一些原先被認為是非病原性且有工業(yè)價值的微生物的孢子和有關(guān)產(chǎn)物所散發(fā)的氣溶膠，也會使產(chǎn)業(yè)人員發(fā)生不同程度的過敏癥狀，甚至影響到周圍環(huán)境，造成難以挽回的損失。微生物實驗室生物危害的受害者不局限于實驗者本人，同時還有其

18、周圍同事，另外被感染者本人也很有可能是一種生物危害，作為帶菌者，也可能污染其他菌株、生物劑，同時又是生物危害的傳播者，這種現(xiàn)象必須引起高度重視。因此說微生物學實驗室的生物危害值得高度警惕，其危害程度遠遠超過一般公害。為了消除實驗室生物安全隱患，應(yīng)注意做到以下五個方面的安全措施。1通風空調(diào)系統(tǒng)實驗室內(nèi)必須安裝獨立的通風空調(diào)系統(tǒng)以控制實驗室氣流方向和壓強梯度。該系統(tǒng)必須確保實驗室使用時，室內(nèi)空氣除通過排風管道經(jīng)高效過濾排出外，不得從實驗室的其他部位或縫隙排向室外；同時確保實驗室內(nèi)的氣流由“清潔”區(qū)域流向“污染”區(qū)域。通風空調(diào)系統(tǒng)為直排系統(tǒng)，不得采用部分回風系統(tǒng)。環(huán)境參數(shù)：相對于實驗室外部，實驗室內(nèi)

19、部保持負壓。實驗間的相對壓強以-30Pa-40Pa為宜，緩沖間的相對壓強以-15Pa-20Pa為宜。實驗室內(nèi)的溫、濕度以控制在人體舒適范圍為宜，或根據(jù)工藝要求而定。實驗室內(nèi)的空氣潔凈度以GB 50073-2001潔凈廠房設(shè)計規(guī)范中所定義的七級至八級為宜。實驗室人工照明應(yīng)均勻，照度不低于500lx。為確保實驗室內(nèi)的氣流由“清潔”區(qū)域流向“污染”區(qū)域，實驗室內(nèi)不應(yīng)使用雙側(cè)均勻分布的排風口布局。不應(yīng)采用上送上排的通風設(shè)計。由生物安全柜排出的經(jīng)內(nèi)部高效過濾的空氣可通過系統(tǒng)的排風管直接排至大氣，也可送入建筑物的排風系統(tǒng)。應(yīng)確保生物安全柜與排風系統(tǒng)的壓力平衡。實驗室的進風應(yīng)經(jīng)初、中、高效三級過濾。實驗室的

20、排風必須經(jīng)高效過濾或加其他方法處理后，以不低于12m/s的速度直接向空中排放。該排風口應(yīng)遠離系統(tǒng)進風口位置。處理后的排風也可排入建筑物的排風管道，但不得被送回到該建筑物的任何部位。進風和排風高效過濾器必須安裝在實驗室內(nèi)設(shè)有圍護結(jié)構(gòu)的風口處，有助于避免污染風管。實驗室的通風系統(tǒng)中，在進風和排風總管處應(yīng)安裝氣密型調(diào)節(jié)閥門，必要時可完全關(guān)閉，以進行室內(nèi)化學熏蒸消毒。實驗室的通風系統(tǒng)中所使用的所有部件必須為氣密型，不能使用帶有木框架的高效過濾器。應(yīng)安裝風機啟動自動聯(lián)鎖裝置，確保實驗室啟動時先開排風機后開送風機。關(guān)閉時先關(guān)送風機后關(guān)排風機。2安全裝置及特殊設(shè)備在主實驗室內(nèi)必須設(shè)置級或級生物安全柜。連續(xù)流

21、離心機或其他可能產(chǎn)生氣溶膠的設(shè)備應(yīng)置于物理抑制設(shè)備之中，該裝置應(yīng)能將其可能產(chǎn)生的氣溶膠經(jīng)高效過濾器過濾后排出。在實驗室內(nèi)設(shè)置的所有其他排風裝置(通風櫥、排氣罩等)的排風均必須經(jīng)過高效過濾器過濾后方可排出，其室內(nèi)布置應(yīng)有利于形成氣流由“清潔”區(qū)域流向“污染”區(qū)域的氣流流型。實驗室中必須設(shè)置不產(chǎn)生蒸汽的高壓滅菌鍋或其他消毒裝置。實驗室與外部應(yīng)設(shè)置傳遞窗。傳遞窗雙門不得同時打開，傳遞窗內(nèi)應(yīng)設(shè)物理消毒裝置。感染性材料必須放置在密閉容器中方可通過傳遞窗傳遞。必須在實驗室入口處的顯著位置設(shè)置壓力顯示報警裝置，顯示實驗室和緩沖間的負壓狀況。當負壓指示偏離預(yù)設(shè)區(qū)間時，必須能通過聲、光等手段向?qū)嶒炇覂?nèi)外的人員發(fā)

22、出警報。也可在該裝置上增加送、排風高效過濾器氣流阻力的顯示。實驗室啟動工作期間不能停電。應(yīng)采用雙路供電電源。如難以實現(xiàn)，則應(yīng)安裝停電時可自動切換的后備電源或不間斷電源，對關(guān)鍵設(shè)備(比如生物安全柜、通風櫥、排氣罩以及照明等)供電。可在緩沖間設(shè)有洗手池：洗手池的供水截門最好設(shè)有自動開關(guān)。洗手池如設(shè)在主實驗室內(nèi)，下水道必須與建筑物的下水管線分離，且有明顯標志。下水必須經(jīng)過消毒處理。洗手池僅供洗手用，不得向內(nèi)傾倒任何感染性材料。供水管必須安裝防回流裝置。不得在實驗室內(nèi)安設(shè)地漏。 3其他室內(nèi)安全措施實驗臺表面應(yīng)不漏水，耐腐蝕、耐熱。實驗室中的家具應(yīng)牢固。為便于清潔，各種家具和設(shè)備之間應(yīng)保持一定的間隙。應(yīng)

23、有專門放置生物廢棄物容器的臺(架)。家具和設(shè)備的邊角和突出部位應(yīng)光滑、無毛刺，以圓弧形為宜。所需真空泵應(yīng)放在實驗室內(nèi)。真空管線必須裝置在線高效過濾器。壓縮空氣等鋼瓶應(yīng)放在實驗室外。穿過圍護結(jié)構(gòu)的管道與圍護結(jié)構(gòu)之間必須用不收縮的密封材料加以密封。氣體管線必須裝置在線高效過濾器和防回流裝置。實驗室內(nèi)必須設(shè)置通訊系統(tǒng)，便于實驗室內(nèi)的實驗記錄等資料通過傳真機發(fā)送至實驗室外。4廢棄物的處理廢料銷毀：所有包含微生物及病毒的培養(yǎng)基為了防止泄漏和擴散，必須放在生物醫(yī)療廢物盒內(nèi)經(jīng)過去污染、滅菌后才能丟棄；所有污染的非可燃的廢物（玻璃或者銳利器具）在丟棄前必須放在生物醫(yī)療廢物盒內(nèi)；所有的液體廢物在排入干凈的下水道

24、前必須經(jīng)過消毒處理；碎玻璃必須放在紙板容器或其他的防止穿透的容器內(nèi)；其他的銳利器具、所有的針頭及注射器組合要放在抗穿透的容器內(nèi)丟棄，針頭不能折彎、摘下或者打碎，銳利器具的容器應(yīng)放在生物醫(yī)療廢物盒中。廢氣處理：少量有毒氣體可以通過排風設(shè)備排出室外，被空氣稀釋。毒氣量大時，必須處理后再排出。如氧化氮、二氧化硫等酸性氣體用堿液吸收，可燃性有機廢液可在燃燒爐中通氧氣完全燃燒。含酚、氰、汞、鉻、砷的廢液處理：低濃度含酚廢液：加次氯酸鈉或漂白粉使酚氧化為二氧化碳和水；高濃度含酚廢水：用乙酸丁酯萃取，重蒸餾回收酚；含氰化物的廢液：用氫氧化鈉溶液調(diào)至pH10以上，再加入3%的高錳酸鉀使CN-氧化分解；CN-含

25、量高的廢液：用堿性氯化法處理，即在pH10以上加入次氯酸鈉，使CN-氧化分解；含汞鹽的廢液：先調(diào)至pH810，加入過量硫化鈉，使其生成硫化汞沉淀，再加入共沉淀劑硫酸亞鐵，生成的硫化鐵將水中的懸浮物硫化汞微粒吸附而共沉淀，排出清液，殘渣用焙燒法回收汞、或再制成汞鹽；鉻酸洗液失效：濃縮冷卻后加高錳酸鉀粉末氧化，用砂芯漏斗濾去二氧化錳后即可重新使用。廢洗液用廢鐵屑還原殘留的Cr（IV）到Cr（），再用廢堿中和成低毒的Cr(OH)3沉淀；含砷廢液：加入氧化鈣，調(diào)節(jié)pH為8，生成砷酸鈣和亞砷酸鈣沉淀?；蛘{(diào)節(jié)pH10以上，加入硫化鈉與砷反應(yīng)，生成難熔、低毒的硫化物沉淀；含鉛、鎘廢液：用消石灰將pH調(diào)至81

26、0，使Pb2+ 和Cd2+ 生成Pb(OH)2和Cd(OH)2沉淀，加入硫酸亞鐵作為共沉淀劑。5意外事故的處置在操作及保存二類、三類及四類危害微生物的實驗室，一份詳細的處理意外事故的方案是必需的。緊急情況下的程序要與所有的人員溝通。實驗室管理層、上一級安全管理層、單位護衛(wèi)、醫(yī)院及救護電話都應(yīng)張貼在所有的電話附近。應(yīng)配備醫(yī)療箱、擔架及滅火器。如果在生物安全柜內(nèi)發(fā)生溢出事件，為了防止微生物外溢，應(yīng)立即啟動去污染程序：用有效的消毒劑擦洗墻壁、工作臺面及設(shè)備；用消毒劑充滿工作臺面、排水盤、盆子，并停留20min；用海綿將多余的消毒劑擦去。 食品微生物檢測實驗室質(zhì)量控制1術(shù)語和定義食品微生物檢測實驗室（

27、food microbiological laboratory），它是指以質(zhì)量管理、衛(wèi)生以及監(jiān)控HACCP計劃的有效性進行評價為目的，進行檢測、鑒定或描述食品中致病微生物存在與否的實驗室。實驗室可以提供其檢查范圍內(nèi)的咨詢性和技術(shù)性服務(wù)，包括結(jié)果解釋和為進一步適當檢查提供建議以及相應(yīng)的措施。在食品微生物檢測質(zhì)量方面，我們會用到一些專業(yè)術(shù)語，這里將常見的術(shù)語列出來。校準（calibration）：在特定條件下，采取一系列步驟建立測量儀器、測量系統(tǒng)，標準物質(zhì)或參考菌株表現(xiàn)值與標準規(guī)定的對應(yīng)數(shù)值之間的關(guān)系。標準參考菌株（certified reference material）：具有認證的標準物質(zhì)，其

28、中一個或更多特征值有一個被認證的程序，這個程序建立了準確表達物質(zhì)特性的可追溯性，同時每個被鑒定值都有一個一定置信區(qū)間的不確定度。測定限度（limit of determination）：主要用于定量的微生物檢測，是指在所用方法的試驗條件下所測定的在一個限定變化范圍內(nèi)估算的微生物最低數(shù)量。檢測限度（limit of detection）：用于定性的微生物檢測，是指在數(shù)量上無法準確統(tǒng)計的可檢測的最低微生物數(shù)量。陰性偏差（negative deviation）：在參考方法得出一個陽性結(jié)果時，而另一個方法卻得出陰性結(jié)果。當真實結(jié)果被證明是陽性時，這種偏離便是一個假陰性。陽性偏差（positive de

29、viation）：在參考方法得出一個陰性結(jié)果時，而另一個方法卻得出陽性結(jié)果。當真實結(jié)果被證明是陰性時，這種偏差便是一個假陽性。參考培養(yǎng)物（reference cultures）：參考菌株、參考原菌株和工作菌株的統(tǒng)稱。參考方法（reference method）：為了測定與預(yù)期在準確度和精確性上同量的一個或多個特征值的方法，即清晰確切的描述必要條件和程序的精確的調(diào)查方法。因此通常用于驗證同一測定的其它方法的準確度，尤其是描述標準物質(zhì)。一般是國內(nèi)或國際標準。參考原株（reference stocks）：由實驗室獲得或由供應(yīng)商提供的參考原株在實驗室經(jīng)過一代轉(zhuǎn)接后的同種菌株。重復性（repeatabi

30、lity）： 在同一實驗室且在相同的測定條件下，用相同方法的連續(xù)測定結(jié)果的接近程度。 再現(xiàn)性（reproducibility）：在不同實驗室變化的測定條件下進行的相同方法的測定結(jié)果的接近程度。敏感性（sensitivity）：在假定檢查中正確分配的陽性培養(yǎng)物或菌落總數(shù)的份數(shù)。特異性（specificity）：在假定檢查中正確分配的陰性培養(yǎng)或菌落總數(shù)的份數(shù)。工作菌株（working culture）：由參考原株轉(zhuǎn)接后獲得的同種菌株。原始樣品（primary sample）：從一個系統(tǒng)中最初取出的一個或多個部分，準備送檢或?qū)嶒炇沂盏讲蕚溥M行檢驗的樣品。委托實驗室（referral laborat

31、ory）：接受樣品進行補充或確認檢驗程序和報告的外部實驗室。2質(zhì)量管理體系實驗室應(yīng)建立、實施并保持與其工作范圍相適應(yīng)的質(zhì)量體系，并將其政策、方針、過程、計劃、程序和指導書等制定成文件，以確保檢測質(zhì)量，還要把體系文件傳達至所有相關(guān)人員，讓他們理解并執(zhí)行。質(zhì)量管理體系不僅包括內(nèi)部質(zhì)量控制和參加有組織的實驗室間的比對活動（如外部質(zhì)量評審計劃），還要在質(zhì)量手冊中予以規(guī)定質(zhì)量管理體系的方針和目標，總體目標應(yīng)在質(zhì)量方針聲明中予以文件化，該方針應(yīng)簡潔易懂，并便于有關(guān)人員及時獲得。實驗室質(zhì)量手冊的目錄可包括以下內(nèi)容：引言；實驗室概述，其法律地位、資源以及主要職責；質(zhì)量方針和質(zhì)量目標；人員的教育與培訓；質(zhì)量體系

32、；文件控制；合同評審；設(shè)施和環(huán)境條件；儀器，試劑和/或相關(guān)消耗品的管理；檢驗程序的驗證；安全規(guī)范（見GB19489-2004）；研究和開發(fā)（如適用）；檢驗程序列表；申請程序，原始樣品，實驗室樣品的采集和處理；內(nèi)部審核；質(zhì)量控制（包括實驗室間比對）；實驗室信息系統(tǒng)；對投訴的補救措施和處理；與委托實驗室和供應(yīng)商的交流及相關(guān)活動；結(jié)果的質(zhì)量保證；結(jié)果的報告。文件控制實驗室應(yīng)建立并保持有關(guān)程序，對構(gòu)成質(zhì)量文件的所有文件和信息（包括政策聲明、教科書、程序、說明、校準表及其來源、圖表、海報、公告、備忘錄、軟件、圖片、計劃書和外源性文件如法規(guī)、標準或檢驗程序等）進行控制。應(yīng)遵循國家、地區(qū)和當?shù)赜嘘P(guān)文件保留的

33、規(guī)定，將每一份受控的文件制作一份以適當?shù)募垙埢蚍羌垙埫浇閭浞荽鏅n以備日后參考，并由實驗室負責人規(guī)定其保存期限。同時需要建立總目錄或相應(yīng)的文件控制程序，以標明現(xiàn)行修改狀態(tài)和質(zhì)量體系內(nèi)的文件發(fā)布情況，并應(yīng)隨時可得，以避免使用失效。所有與質(zhì)量管理體系有關(guān)的文件均應(yīng)能唯一識別，包括標題、版本或當前版本的修訂日期或修訂號，以及發(fā)行機構(gòu)、來源的標識。質(zhì)量記錄實驗室應(yīng)建立并實施一套對質(zhì)量及技術(shù)記錄進行識別、采集、索引、查取、存放、維護以及安全處理的程序。質(zhì)量記錄需要包括內(nèi)部審核和管理評審、糾正和預(yù)防措施記錄。內(nèi)部審核應(yīng)根據(jù)質(zhì)量管理體系的規(guī)定對體系的所有管理及技術(shù)要素進行定期的內(nèi)部審核，以證實體系運作持續(xù)符合

34、質(zhì)量管理體系的要求。內(nèi)部審核應(yīng)包含體系的所有要素，尤其是對食品微生物檢測有重要影響的方面。要明確內(nèi)部審核的程序并形成文件，其中包括審核類型、頻次、方法學以及所需相關(guān)文件。如果發(fā)現(xiàn)有不足或有待改進之處，實驗室應(yīng)采取適當?shù)募m正或預(yù)防措施，并將這些措施形成文件，經(jīng)討論后在約定的時間內(nèi)實施。正常情況下，應(yīng)每12個月對質(zhì)量體系的主要要素進行一次內(nèi)部審核。此外，內(nèi)部審核的結(jié)果還應(yīng)該提交實驗室管理層進行評審。管理評審實驗室管理層應(yīng)對實驗室質(zhì)量管理體系及實驗室全部的食品微生物檢測活動進行評審，包括檢測及咨詢工作，以確保在食品微生物檢測工作中保持穩(wěn)定的服務(wù)質(zhì)量，并及時進行必要的變動或改進。評審的結(jié)果應(yīng)列入一個含

35、有目標、目的和措施的計劃中。管理評審的典型周期為每項12個月一次。在建立質(zhì)量體系期間，建議評審間隔應(yīng)盡量短些，以保證在發(fā)現(xiàn)該質(zhì)量管理體系或其它活動有需要改進之處時，及早采取應(yīng)對措施，至少每年進行一次內(nèi)審。管理評審結(jié)果以及應(yīng)采取的措施均應(yīng)記錄歸檔，同時應(yīng)將評審結(jié)果及評審決定向?qū)嶒炇胰藛T通報。實驗室管理層應(yīng)確保將這些措施在適當?shù)募s定時間內(nèi)公布。所有記錄均應(yīng)清晰明確，便于檢索。應(yīng)符合國家、地區(qū)或當?shù)胤ㄒ?guī)的要求，提供一個適宜的環(huán)境，以適當?shù)男问竭M行存放，保證安全和保密，避免損毀、破壞、丟失、被人盜用或未授權(quán)的接觸，實驗室應(yīng)有程序保護和備份以電子形式儲存的記錄，以防止未經(jīng)授權(quán)的侵入和修改。糾正措施糾正措

36、施程序應(yīng)包括一個抽查過程，以確定問題產(chǎn)生的根本原因或潛在原因。某些情況下會發(fā)展為預(yù)防措施。糾正措施應(yīng)與問題的嚴重性及其帶來的風險的大小相適應(yīng)。調(diào)查問題后采取了相應(yīng)糾正措施，如果需要對操作程序進行改動時，實驗室管理層應(yīng)將這些改動形成文件并執(zhí)行。實驗室管理層應(yīng)負責監(jiān)控每一糾正措施所產(chǎn)生的結(jié)果，以確定這些措施是否有效地解決所識別出的問題。如果識別出的不符合項或偏離對實驗室與其本身的相關(guān)政策、程序或質(zhì)量管理體系的符合性產(chǎn)生懷疑時，則實驗室管理人員應(yīng)保證依據(jù)內(nèi)部審核的規(guī)定對相應(yīng)方面的活動進行審核。糾正措施的結(jié)果應(yīng)提交實驗室管理評審。實驗室應(yīng)該對糾正措施進行監(jiān)控，以確保所采取的糾正措施是有效的。 預(yù)防措施

37、預(yù)防措施應(yīng)確定不符合項的潛在來源和所需的改進，無論是技術(shù)方面的還是相關(guān)的質(zhì)量體系方面。如果需要采取預(yù)防措施，還應(yīng)制定、執(zhí)行和監(jiān)控這些措施計劃。預(yù)防措施程序要包括啟動措施和應(yīng)用控制，以確保其有效性。除對操作程序進行評審之外，預(yù)防措施還可能涉及數(shù)據(jù)分析，包括趨勢和風險分析以及外部質(zhì)量保證。這里需要注意的是，預(yù)防措施是事先主動識別改進可能性的過程，而不是對已發(fā)現(xiàn)的問題或投訴的反應(yīng)。 技術(shù)要求試劑實驗室有對試劑進行檢查、接受或拒收和貯存的程序和標準，保證涉及到的試劑質(zhì)量適用于檢驗。實驗室人員應(yīng)該在保存期限內(nèi)，使用可以溯源至認可的國家或國際的陰性和陽性標準菌株，檢查對食品微生物檢驗起決定性作用的每一批試

38、劑的適用性，在確定這些物品達到標準規(guī)格，或已達到相應(yīng)的規(guī)程中所規(guī)定的標準之前，不得使用，并記錄歸檔。應(yīng)建立一套供貨清單控制系統(tǒng)，該系統(tǒng)中應(yīng)該包括全部相關(guān)試劑、質(zhì)量控制材料以及校準品的批號、實驗室接收日期以及這些材料投入使用的日期。所有這些質(zhì)量記錄應(yīng)在實驗室管理評審中提供。實驗室要確保所有的試劑（包括儲存溶液）、培養(yǎng)基、稀釋劑和其它的懸浮液都貼上標簽，標明其適用性、特性、濃度、儲存條件、準備日期、有效期和（或）推薦的儲存時期。負責微生物檢驗準備的試驗人員可以從記錄中確認。培養(yǎng)基檢查實驗室內(nèi)制備的培養(yǎng)基、稀釋劑和其它懸浮液的性質(zhì)是否合適，原料（包括商業(yè)脫水配料和單獨配料）是否儲存在合適的條件下，例

39、如低溫、干燥和避光等。所有的容器，尤其是那些用于培養(yǎng)基脫水的容器，需高度密封。結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基不能使用。除非實驗方法有特殊要求，試驗用水需要經(jīng)蒸餾、去離子的或反轉(zhuǎn)滲透處理。同時要確定和驗證合適的儲存條件下預(yù)制培養(yǎng)基的保存時間。即用型培養(yǎng)基在使用前需驗證所有準備使用的或部分完成的培養(yǎng)基（包括稀釋劑和其它懸浮液）的有效性，應(yīng)估算目標微生物的復蘇或存活能力，或全面定量評估對非目標微生物的抑制程度；使用客觀的標準對其品質(zhì)（例如物理和生化性質(zhì)）進行評審。作為培養(yǎng)基確認的一部分，要求實驗室使用人員充分了解制造商所提供的產(chǎn)品質(zhì)量說明書，鑒定每一批培養(yǎng)基時，需要證明所接收的每批培養(yǎng)基滿足質(zhì)量要求

40、，制造商應(yīng)確保實驗室人員能及時接到其關(guān)于質(zhì)量規(guī)格的任何改變的通知。如果培養(yǎng)基制造商被權(quán)威質(zhì)量系統(tǒng)認可，則實驗室應(yīng)根據(jù)詳細說明書對其產(chǎn)品有效性的符合度進行檢查。在其他情況下，必須對接收的培養(yǎng)基進行足夠的檢查。設(shè)備維護實驗室基本設(shè)備的維護應(yīng)根據(jù)使用頻率定期進行。保存具體記錄。以下儀器設(shè)備需要清潔、維修、損壞檢查、常規(guī)檢查甚至滅菌加以維護：常規(guī)保養(yǎng)的設(shè)備：濾器、玻璃和塑料容器（瓶子、試管）、玻璃或塑料制成的帶蓋培養(yǎng)皿、采樣工具、接種針或接種環(huán)；培養(yǎng)箱、水浴鍋和干燥箱的維護應(yīng)確定并記錄培養(yǎng)箱、水浴鍋、干熱滅菌箱及保溫室的溫度的穩(wěn)定性、溫度分布的均勻性和達到平衡狀態(tài)時所需時間，尤其要注意其是否在正常使用

41、（如多個帶蓋培養(yǎng)皿之間的位置、空間、高度）。每次經(jīng)過修理和校正后，都應(yīng)檢查和記錄最初驗證設(shè)備時所記錄的各參數(shù)的穩(wěn)定性。實驗室應(yīng)監(jiān)控這類設(shè)備的運行溫度，并保存記錄。高壓滅菌鍋，包括培養(yǎng)基制備儀的維護下面大致列出了有關(guān)校準、確定和監(jiān)控運行的一般性方法。然而，高壓滅菌鍋所進行的數(shù)量檢驗及相應(yīng)項目，如能適應(yīng)高壓滅菌鍋的內(nèi)外變化，這也就提供了同等的質(zhì)量保證。高壓滅菌鍋必須具備指定的時間和溫度允許范圍。壓力儀不能只適于一個壓力量程。用來控制和監(jiān)督工作循環(huán)的感應(yīng)器需要進行校準并對其計時器進行性能測試；最初的測定包括實際應(yīng)用中每個工作循環(huán)和每一種裝載狀態(tài)時的性能研究（空間熱分布測試）。在經(jīng)過大型維修或校正（如

42、更換溫度調(diào)節(jié)的探測儀或程序器，調(diào)整安裝位置及工作循環(huán)）后，或?qū)ε囵B(yǎng)基的質(zhì)量控制檢驗結(jié)果表明需要時，應(yīng)當重復前述性能測試過程。必須安裝足夠的溫度感應(yīng)器（如在充滿水或培養(yǎng)基的容器中）以指示不同位置的不同溫度。至于培養(yǎng)基制備儀，一般認為安裝使用兩個感應(yīng)器（一個靠近控制探測儀，另一個位于遠離控制探測儀處）是適當?shù)?，除此之外，沒有更加合適的方法。應(yīng)確認和考慮溫度上升和下降的適宜性及滅菌時間。在確認和重新確認的過程中，應(yīng)提供基于加熱分布圖的清晰明了的操作說明。制定接受/拒絕的標準和高壓滅菌鍋的使用記錄，包括每個循環(huán)的溫度和時間，可以通過下列措施之一進行監(jiān)控：應(yīng)用熱電偶和記錄儀打印輸出圖表；直接觀察最高的溫

43、度值和當時的時間。除直接監(jiān)控高壓滅菌鍋的溫度外，還應(yīng)使用化學或生物指示劑檢查每個滅菌和消毒循環(huán)的效力。高壓滅菌鍋的記錄帶和指示條帶只能說明一項工作已經(jīng)進行，而不能證明完成了一個可以接受的循環(huán)。測定體積的設(shè)備：吸液管、自動分液器、移液管等；在微生物實驗室中經(jīng)常會用到測定體積的設(shè)備，如自動分液器，分液器/稀釋器，機械性的手動移液管和多功能移液管等。實驗室應(yīng)該對測定體積的設(shè)備進行最初的確證，之后定期檢查以保證儀器按要求正常使用。對于具有一定性能范圍的玻璃器皿，確證工作就不是必須的。應(yīng)檢查儀器設(shè)備的指定體積的準確度而不是固定體積（如在體積可變設(shè)備的不同設(shè)置），也應(yīng)測定重復使用的精確度。對于單獨使用的多

44、功能體積測定儀器，實驗室應(yīng)要求供應(yīng)商提供一份相應(yīng)的質(zhì)量認可系統(tǒng)。經(jīng)過初步的實用性確認后，建議隨時對其進行準確度檢查。如果公司無法提供質(zhì)量認可系統(tǒng)，實驗室應(yīng)對設(shè)備的適用性進行檢驗。測量設(shè)備：溫度計、計時器、天平、酸度計、菌落計數(shù)器等。溫度直接影響分析結(jié)果或?qū)υO(shè)備的正確性能來說是至關(guān)重要的，如安裝在培養(yǎng)箱和高壓滅菌鍋上的液體玻璃溫度計、熱電偶適應(yīng)器和鉑電阻溫度計。如需校準設(shè)備，則應(yīng)遵循國家或國際有關(guān)的溫度標準，精確度在允許范圍內(nèi)，被證明符合國家或國際生產(chǎn)規(guī)定者才可以工作，例如儲藏用電冰箱、制冰機、培養(yǎng)箱及水浴鍋這類精確性可以在允許的溫度范圍內(nèi)變動的設(shè)備。必須對此類設(shè)備進行性能測試。測重儀和天平應(yīng)按

45、國家規(guī)定及其使用目的在一定時間內(nèi)進行校準。其它設(shè)備定期檢驗傳導計、氧氣表、pH計和其它類似儀器的性能，或在使用前對其進行性能檢驗。在合適的條件下儲存檢驗用緩沖液，并且標記有效期。如果濕度對于檢驗結(jié)果很重要，則要根據(jù)國內(nèi)或國際標準對濕度計進行校準。定時器，包括高壓消毒鍋的定時器，須使用一個已經(jīng)過校準的定時器或國內(nèi)時間信號來進行確證。若檢驗步驟中使用離心機，應(yīng)該評估離心力是否對檢驗有決定性作用，如果答案是肯定的，則需要校準離心機。第二節(jié) 無菌室的建設(shè)一、無菌室的結(jié)構(gòu)與要求 無菌室的結(jié)構(gòu)無菌室一般為45 平方米、高 2.5 米的獨立小房間（與外間隔離），內(nèi)部裝修應(yīng)平整、光滑，無凹凸不平或棱角等，四壁

46、及屋頂應(yīng)用不滲水的材質(zhì)，以便于擦洗及殺菌。無菌室專辟于微生物實驗室內(nèi)，可以用板材和玻璃建造，其周圍需要設(shè)有緩沖走廊，走廊旁再設(shè)緩沖間。緩沖室的面積可小于無菌室，另設(shè)有小窗，以備進入無菌間后傳遞物品。無菌室和緩沖室進出口應(yīng)設(shè)拉門，門與窗平齊，窗戶應(yīng)為雙層玻璃，并要密封，門縫也要封緊，兩門應(yīng)錯開，以免空氣對流造成污染；室內(nèi)裝備的換氣設(shè)備必須有空氣過濾裝置，另需設(shè)有日光燈及消毒用的紫外燈，殺菌紫外燈離工作臺以1米為宜 ，其電源開關(guān)均應(yīng)設(shè)在室外。在獲得了無菌環(huán)境和無菌材料后，只有保持無菌狀態(tài)，才能對某種特定的已知微生物進行研究。所以控菌能力和控菌穩(wěn)定性是無菌室的核心驗收指標。業(yè)內(nèi)同行的驗收標準為100

47、級潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過1個菌落，10000級潔凈室平均不得超過3個菌落。無菌室室內(nèi)溫度宜控制在2024，濕度45%60%。 無菌室的使用要求無菌室應(yīng)保持清潔整齊，工作后用消毒液拭擦工作臺面，室內(nèi)只能存放最必需的檢驗用具如酒精燈、酒精棉、火柴、鑷子、接種針、接種環(huán)、玻璃鉛筆等。室內(nèi)檢驗用具及桌凳等位置保持固定，不隨便移動。每隔23周左右的時間，要用2%的石炭酸水溶液擦拭工作臺、門、窗、桌、椅及地面，然后用甲醛加熱或噴霧滅菌。無菌室使用前后應(yīng)將門關(guān)緊，打開紫外線，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時，需30W紫外燈，距離在1.0m處，照射時間不少于30min，使用紫外燈，應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作

48、，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕拭擦，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響。 無菌室的操作要求進入無菌室前，必須于緩沖室更換消毒過的工作服、工作帽及工作鞋。操作人員還要在進無菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟＿M行接種所用的吸管、平皿及培養(yǎng)基等必須進行消毒滅菌操作，各種玻璃器皿、注射器等，要置于高溫干燥箱中160滅菌2h。另外打開包裝但未使用完的器皿也要消毒，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點燃燒灼3次后使用。從包裝中取出吸管時，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時，吸管尖部不能觸及試管或平皿邊緣。接種樣品、轉(zhuǎn)種細菌必須在酒精燈前操作，接種環(huán)和接

49、種針均要經(jīng)火焰燒灼；接種細菌或樣品時，吸管從包裝中取出后要通過火焰消毒。為了避免被接種物灑落，微生物接種環(huán)的直徑應(yīng)為23mm并完全封閉，柄長度應(yīng)小于6cm以減小抖動。使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán)，能夠避免在明火上加熱所引起的感染性物質(zhì)爆濺。最好使用不需要再進行消毒的一次性接種環(huán)。觀察平板時不要開蓋，如果需要蘸取菌落檢查時，必須靠近火焰區(qū)操作，平皿蓋也不能大開，而是適當開個小縫即可。進行可疑致病菌涂片染色時，應(yīng)使用夾子夾持蓋玻片，切勿用手直接拿蓋玻片，以免造成污染，用過的蓋玻片也應(yīng)置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗滌。吸管吸取菌液或樣品時，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取，不能向含有感染性物質(zhì)的溶液中吹入氣

50、體。操作應(yīng)嚴格按照無菌操作規(guī)定進行，操作中少說話，不喧嘩，以保持環(huán)境的無菌狀態(tài)。工作結(jié)束，收拾好工作臺上的樣品及器材，最后用消毒液（含有1%有效氯的溶液或3%過氧化氫的溶液也可）擦拭工作臺。二、無菌室的熏蒸消毒微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養(yǎng)基、被污染和接種的培養(yǎng)物等，必須經(jīng)滅菌后方能使用。 實驗室中常見的化學試劑消毒法 l用甲醛和高錳酸鉀混合熏蒸：一般每平方米需40甲醛10毫升、高錳酸鉀8毫升，進行熏蒸。使用時，先密閉門窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高錳酸鉀，人員隨之離開接種室，關(guān)緊房門，熏蒸2030分鐘即可。 20.1升汞水消毒：用0.1升汞水浸過的紗布或海綿進行指擦，或用

51、噴霧器噴霧滅菌，使箱內(nèi)的上下左右都沾上升汞水，手也可用升汞水消毒，并把袖子卷起來。噴霧后 2030分鐘，箱內(nèi)的雜菌和霧滴一起落到箱底被殺死，內(nèi)部的空氣就變得很清潔。 3紫外線照射滅菌：在無菌箱中裝一支200伏、30瓦的紫外線燈管；每次開2030分鐘，就能達到空間殺菌的目的。照射結(jié)束后，罩黑布半小時，以增強殺菌效果。 4石炭酸噴霧：在每次接種之前，用5石炭酸溶液噴霧，可促使空氣中的微粒和雜菌沉降，防止桌面微塵飛揚，并有殺菌作用。 5石灰揩擦：經(jīng)常用藥物熏蒸，易造成酸性環(huán)境，特別用甲醛和高錳酸鉀熏蒸長久，污染往往越來越嚴重，預(yù)防辦法可把各種藥品交替使用，過一段時間（約五周）用石灰擦洗一遍。實踐證明

52、，這樣做效果很好。 干熱消毒與滅菌1焚燒法：利用點燃燃料或在焚燒爐內(nèi)燃燒的方法使被處理對象燃為灰燼，排出的廢氣應(yīng)不污染環(huán)境。一般分為兩級焚燒，一級溫度約為800，二級溫度應(yīng)高于1100。焚燒法主要用于有傳染性的廢棄物處理，如接觸傳染源的敷料、衣物、食物、垃圾等。2燒灼法：燒灼滅菌適用于微生物實驗室小件耐熱物品滅菌，利用酒精燈或煤氣燈火焰殺滅微生物，如接種棒、剪刀、攝子、試管等。燒灼時，應(yīng)注意將器材放在操作者與火焰相隔的彼方，并逐漸靠近火焰，防止污染物突然進入火焰而發(fā)生爆沾， 以致污染周圍環(huán)境。3干烤法：用電熱、電磁輻射線等依靠空氣傳導加熱物體，因而加熱過程較慢。干熱主要用于耐高熱物品消毒或滅菌

53、， 如玻璃器材、金屬器械、油脂、粉劑等。一般情況下， 加熱至1602 h；1701 h；18030 m in可達到滅菌效果。粉劑和油脂滅菌時，厚度一般不超過1. 3 cm。紙張、有機物品滅菌時，溫度不宜超過170，且在干烤箱溫度降至80后，才可開啟干烤箱，以防玻璃遇到冷空氣炸裂、紙張迂氧燃燒。近年來出現(xiàn)了真空電烤箱，裝載物品后，關(guān)閉箱體，抽真空至0. 27 KPa，然后加熱可至250，縮短了滅菌時間，且物品不易被氧化，延長了使用壽命。 濕熱消毒與滅菌高溫、高濕的環(huán)境可以使微生物的原生質(zhì)和酶發(fā)生不可逆變性，導致微生物死亡。常用的濕熱消毒滅菌方法有煮沸消毒法、流通蒸汽消毒法、巴氏消毒法及高壓蒸汽滅

54、菌法。1煮沸消毒：煮沸消毒時, 將物品浸沒于水中加熱至沸點，細菌繁殖體510min可被殺滅；注射器滅菌應(yīng)煮沸30 m in；水中加10 g /L碳酸鈉或磷酸鈉可提高水的沸點至105，殺菌作用隨之增強。煮沸消毒時，應(yīng)將物品清洗干凈，所用水應(yīng)是蒸餾水，避免物品沾上水垢；煮沸過程中不要中途添加新的物品，待水沸后開始計時。如需要殺死芽胞則應(yīng)該煮沸13小時。此法主要用于一般注射器、膠管和食具等的消毒。2間歇滅菌法：此法適用于不宜高溫滅菌的物質(zhì)，如不耐熱的藥品、含血清的培養(yǎng)基等。其具體方法：根據(jù)被滅菌物品的耐熱程度將其置于間歇滅菌器內(nèi)，加熱至80100，維持3060 m in，此時物品上的細菌繁殖體可被殺

55、滅。此后放入恒溫箱，在37左右維持18 20 h，然后，重復上述處理三次，使其中由細菌芽孢復蘇為繁殖體而被殺滅。全過程可將物品上污染的細菌全部殺滅。3巴氏消毒：巴氏消毒法是以較低溫度殺滅液體中的病原菌，而液體中不耐熱物質(zhì)不受損失的一種消毒方法。主要用于血清、疫苗、牛奶消毒。消毒時將其加熱至56 65，持續(xù)3060 m in，可殺滅細菌繁殖體。但在處理牛奶過程中發(fā)現(xiàn)此溫度不足以殺滅牛結(jié)核分枝桿菌，后改為62. 8 65. 6，作用30 m in。4高壓蒸汽滅菌法：此法是滅菌效果最好、目前應(yīng)用最廣的滅菌方法。利用高壓蒸汽滅菌鍋進行滅菌，由于密閉容器加溫所產(chǎn)生的高壓飽和水蒸汽能獲得較高的溫度，通常在

56、1.05kg/cm2的壓力下，溫度達121.3，維持1530分鐘，可殺死包括細菌芽胞在內(nèi)的所有微生物。此法適用于高溫和不怕潮濕物品的滅菌，如普通培養(yǎng)基、生理鹽水、注射器、敷料和橡皮手套等。在同樣溫度下，濕熱滅菌的效果比干熱滅菌好，原因有三：一是濕熱中菌體吸收水分， 蛋白質(zhì)較易凝固。二是濕熱比干熱的穿透力好，這主要是由于水或飽和水蒸汽傳導熱能的效率明顯高于空氣。蒸汽容易穿透到物體的深部，使滅菌的物體內(nèi)部溫度迅速上升。三是蒸汽有潛熱存在。每一克水在100時，由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)可放出529卡的熱量。當蒸汽與被滅菌的物體接觸時凝結(jié)成水，放出潛熱，能迅速提高滅菌物體的溫度。 其他消毒滅菌法1過濾除菌法過濾除

57、菌是指用阻留技術(shù)去除氣體或液體中的微生物，在微生物實驗室中主要用于液體的除菌和空氣凈化處理，還有一些不能耐受高溫或化學藥物滅菌的藥液、毒素、血液等，也可使用過濾除菌法除菌。2紫外線殺菌法紫外線殺菌原理是通過干擾細菌DNA的合成，波長253.7nm的殺菌力最強。紫外線作用的特點是(1)穿透力弱，只能用于房間空氣、物體表面消毒；(2)殺菌效果與照射時間，距離和強度有關(guān)；(3)對眼睛角膜和皮膚有損傷作用，工作人員切勿在紫外線燈照射下進行操作，佩戴保護眼鏡。 那么滅菌后的物品該如何處理呢？滅菌后物品，按正常情況已屬無菌，從滅菌器中取出應(yīng)仔細檢查放置，以免再度污染。取出后的合格滅菌物品，應(yīng)存放于貯藏室或防塵柜內(nèi)，嚴禁于未滅菌物品混放。凡屬合格物品，應(yīng)標有滅菌日期及有效期限。每批滅菌處理完成后，記錄滅菌品名、數(shù)量、溫度、時間、操作者。三、無菌室無菌程度的測定在超凈工作臺開啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑90mm的無菌培養(yǎng)皿35個，無菌操作分別注入融化并冷卻至約45的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml，放至凝固后，倒置于37培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48小時，證明無菌后，取平板35個，分別放置工作位置的左中右等處，開蓋暴露30分鐘后，倒置于37培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，取出檢查。（100級潔凈區(qū)）平板雜菌數(shù)平均不得超過1個菌落，如超過限度，應(yīng)對無菌室進行徹底消毒，直至重復檢查合乎