玉米赤霉烯酮酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

1、玉米赤霉烯酮酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用1 使用目的：本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織（如雞、牛肉和豬肉），雞蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿樣中玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）殘留的定量檢測。2 實驗原理本試劑盒采用競爭ELISA方法，在微孔板包被有玉米赤霉烯酮（ZearalenoneZEN）偶聯(lián)抗原，加入玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）標準品或樣品，游離玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）與微孔條上預包被的玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）偶聯(lián)抗原互相競爭抗玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）抗體酶標

2、記物，用TMB底物顯色，加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色，用酶標儀在450nm波長下進行檢測，吸光值與樣品中玉米赤霉烯（Zearalenone，ZEN）含量成反比，通過標準曲線計算樣品中玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）的含量。3 試劑盒組成3.1 預包被的玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）偶聯(lián)抗原的可拆酶標板：1塊（12孔8條）。3.2 玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）標準品：6瓶（1ml/瓶），含量分別是：0ng/ml，0.5ng/ml,2ng/ml,20ng/ml,200ng/ml,400ng/ml。3.3 抗玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZE

3、N）抗體酶結合物：1瓶（6ml）。3.4 顯色液A：1瓶（6ml）。3.5 顯色液B：1瓶（6ml）。3.6 終止液：1瓶（6ml），2M硫酸。3.7 樣本稀釋液：1瓶（10、6ml）,用于樣品稀釋用。3.8 濃縮洗滌液：1瓶（20%20ml）,用于洗板。3.9 說明書一份。4 需要而未提供的材料4.1 設備4.1.1 波長450nm酶標儀。4.1.2 粉碎機。4.1.3 量筒。4.1.4 振蕩器。4.1.5 漏斗。4.1.6 WhatmanNo1或相當?shù)臑V紙。4.1.7 微量移液器。4.2 試劑4.2.1 去離子水或蒸餾水。4.2.2 甲醇。5 貯存5.1 試劑盒貯存于28，切勿冷凍5.2

4、未用完的微孔板應該密封干燥保存26 注意事項6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。6.2 不要使用過期試劑盒。6.3 試劑盒使用前，將試劑恢復至室溫（252），建議至少回溫2小時。6.4 標準品中含有玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN），使用時應特別注意，操作時應帶手套。6.5 終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6 不同標準品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗結果。6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響實驗結果。6.8 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會影響實驗結果6.9 混合試劑時應避免起泡。7 工作液

5、準備7.1 玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）標準品溶液：0ng/ml,0.5ng/ml，2ng/ml,20ng/ml,200ng/ml,400ng/ml7.2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20（1+19）稀釋備用7.3 樣本稀釋液：用蒸餾水按1:10（1+9）稀釋備用7.4 顯色劑：已備用，避免光線直照7.5 反應終止液：已備用8 樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴格按說明書操作，提取過程中應準確稀釋，否則會出現(xiàn)結果不準確，樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存）8.1 取10g粉碎的樣品，加20ml70%甲醇溶液8.2 強力振蕩3分鐘8.3 用WhatmanNo1濾紙過濾8.4

6、取25仙處理后的樣品，力口入25仙樣本稀釋液于反應孔中（樣本稀釋倍數(shù)為2）9 酶免分析步驟9.1 實驗須知9.1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫（252），時間約2小時。回溫至室溫（252）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于28干燥保存注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的精確度和準確度。9.1.2 使用后請立即將試劑放回28保存9.1.3 請不要改變分析程序9.1.4 請使用精確的微量移液器9.1.5 操作一旦開始，請不要中斷任何程序9.1.6 ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序，請嚴格按照要求操作9.1.7 為避免交叉污染，每個標準品和樣品均應使用不同的

7、吸頭加樣9.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面9.2 分析步驟9.2.1 預先進行編號，標記B0、標準品和樣品的位置，推薦進行雙孔檢測9.2.2 取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回28保存9.2.3 樣品稀釋液（10R、濃縮洗滌液（20的稀釋成工作液（蒸儲水或去離子水稀釋）9.2.4 在B0孔中加入50仙10.0ng/mft準品溶液9.2.5 在各標準孔中加入50仙的標準品溶液9.2.6 在各樣品孔中加入50小樣品溶液9.2.7 在所有孔中加入50仙的抗玉米赤霉烯酮（ZearalenoneZEN）抗體酶結合物9.2.8 輕輕晃動反應板幾秒鐘。9.3 37

8、溫浴30min（溫浴過程中不時輕拍反應板，可以減少雙孔誤差）9.3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，最后一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。9.4 反應9.4.1 洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50仙顯色液A,再加50仙顯色液B;輕微晃動反應板使之徹底混勻9.4.2 37溫浴10min9.4.3 每孔中加入50仙終止液，混勻9.4.4 在450nm下檢測吸光度，結果在5min內(nèi)讀取。10 結果計算10.1 定量分析10.1.1 所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以第一個標準（0標準）的吸光度值（B0）再乘以100%,即百分吸光度值。8 標準溶

9、液或樣本溶液的平均吸光度值B0-0祖g/標準溶液的平均吸光度值10.1.2 以玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）濃度的對數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標準曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值，可從曲線上得到對應點的橫坐標，即為玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）濃度的對數(shù)值，求得反對數(shù)即為測定液中玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）濃度C（ppb）10.1.3 由于樣品經(jīng)過了預先稀釋，因此根據(jù)標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。10.2 半定量測定10.1.1 目測半定量測定：首先選擇一個適當?shù)臉藴室号c樣品同運行，根據(jù)樣品與標準品吸光度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。10.1.2 儀器半定量測定：首先選擇一個適當?shù)臉藴室号c樣品同運行，根據(jù)樣品與標準品顏色深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。11 特異性物質(zhì)交叉反應玉米赤霉烯酮100%玉米赤霉酮13%玉米赤霉醇1%12 試劑盒參數(shù)本試劑盒檢測下限為0.05p