食品毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)

1、叮叮小文庫實(shí)驗(yàn)一 動物的一般操作技術(shù)1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?* 毒理學(xué)研究需要用實(shí)驗(yàn)動物來進(jìn)行各種實(shí)臉， 通過對動物的實(shí)驗(yàn)觀察和分析來研究毒作 用，獲得毒物的毒性、劑量 - 反應(yīng)關(guān)系、毒作用機(jī)制等方面的資料，因此動物實(shí)驗(yàn)是毒理學(xué) 研究中重要的手段之一。通過本次學(xué)習(xí)毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)中有關(guān)動物實(shí)驗(yàn)的基本操作技術(shù)， 掌握實(shí)驗(yàn)動物的選擇、 動物 抓取和分組等技術(shù)。2. 實(shí)驗(yàn)原理 做毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)， 首先要了解實(shí)驗(yàn)動物選擇的要求，實(shí)驗(yàn)動物分組、 實(shí)驗(yàn)樣品的采集、實(shí) 驗(yàn)動物處死方法等。3. 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備 :小鼠若干，手套 15 副，苦味酸酒精飽和液， 0.5%中性紅或品紅溶液，棉簽，解剖剪刀10 把，感應(yīng)量為 0.1

2、g 的天平一臺。4. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步騷 :（ 一） 健康動物的選擇 無論選擇哪種種屬品系的動物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)， 均要求選擇健康的實(shí)驗(yàn)動物。 健康動物檢查時 要求達(dá)到：外觀體型豐滿，被毛濃密有光澤、緊貼體表，眼睛明亮，行動迅速，反應(yīng)靈活， 食欲及營養(yǎng)狀況良好。選擇時重點(diǎn)檢查以下幾項(xiàng)：1. 眼睛 明亮，瞳孔雙側(cè)等圓，無分泌物2. 耳 耳道無分泌物溢出，耳殼無膿瘡3. 鼻 無噴嚏，無漿性粘液分泌物4. 皮膚 無創(chuàng)傷、無膿瘡、疥癬、濕疹。5. 頸部 要求頸端端正，如有歪斜提示可能存在內(nèi)耳疾患，不應(yīng)選作實(shí)驗(yàn)動物。6. 消化道 無嘔吐、腹泄，糞便成形，肛門附近被毛潔凈。7. 神經(jīng)系統(tǒng) 無震顫、麻痹。若動物 （大鼠、

3、小鼠 ） 出現(xiàn)圓圈動作或提尾倒置呈圓圈擺 動，應(yīng)放棄該動物。8. 四波及尾 四肢、趾及尾無紅腫及潰瘍。（ 二） 實(shí)驗(yàn)動物的性別鑒定小鼠 主要依據(jù)肛門與生殖孔間的距離區(qū)分， 間距大者為雄鼠， 小者為雌性。 成年雄鼠 臥位可見睪丸，雌性在腹部可見乳頭。（ 三） 抓取方法 正確地抓取固定動物， 是為了在不損害動物健康、 不影響觀察指標(biāo)、 并防止被動物咬傷 的前提下，確保實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。小鼠的抓取方法 先用右手抓取鼠尾提起， 置于鼠籠或?qū)嶒?yàn)臺上向后位， 在其向前爬行 時，用左手拇指和食指抓住小鼠的兩耳和頸部皮膚，將鼠體置于左手心中， 把后肢拉直，以 無名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。（ 四） 編號、標(biāo)記

4、方法1 、稱重鼠的感應(yīng)量在 0.1g 以下。2 、標(biāo)記方法染色法 : 采用染科 （苦味酸酒精飽和液 ） 涂擦動物皮毛標(biāo)記的方法進(jìn)行編號。用毛筆或棉 簽蘸取染料涂于動物的不同部位， 以苦味酸黃色斑點(diǎn)染料標(biāo)記來表示不同號碼。 一般習(xí)慣涂 在左前腿為 1，左腰部為 2，左后腿為 3，頭部為 4，背部為 5，尾基部為 6，右前腿為 7， 右腰部為8,右后腿為9。如果動物編號超過 10,需要10100號碼時，可采用在上述動物 的不同部位，再涂染另一種涂料斑點(diǎn)，即表示相應(yīng)的十位數(shù)，即左前腿為10,左腰部為 20，以此類推。（ 五） 實(shí)驗(yàn)動物的隨機(jī)分組方法 （隨機(jī)數(shù)字表法 ）為了得到客觀的劑量反應(yīng)關(guān)系。應(yīng)將

5、一群動物按統(tǒng)計(jì)學(xué)原則隨機(jī)分配到各個試驗(yàn)組中。將實(shí)驗(yàn)單位隨機(jī)分成三組設(shè)有動物X只，隨機(jī)等分成Y組。將動物編號后，按上述方法，從隨機(jī)數(shù)字表抄錄 X個數(shù)字， 將各數(shù)一律以Y除之，并以余數(shù)1,2,3代表各組。動物號碼12345隨機(jī)數(shù)目 除 Y 后的余數(shù)要使各組的動物數(shù)相等, 須把原歸某組的動物改配到其他組去。 可以隨機(jī)數(shù)字表繼續(xù)按斜角 線抄錄一個數(shù)字,得 60,以有多出的一組現(xiàn)有只數(shù)除之,余數(shù)為幾,就可以把第幾個移入 其他組。5. 注意事項(xiàng) :在實(shí)驗(yàn)操作過程中, 注意安全, 以免被小鼠咬傷,防止小鼠丟失。 同時要遵守實(shí)驗(yàn)操作 規(guī)程。6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 :掌握實(shí)驗(yàn)動物的一般操作、實(shí)驗(yàn)樣品采集、實(shí)驗(yàn)動物處死方

6、法等7. 實(shí)驗(yàn)報告要求 :實(shí)驗(yàn)報告應(yīng)包含如下內(nèi)容 :原理、儀器和試劑、步驟、原始數(shù)據(jù)、計(jì)算結(jié)果。- 2叮叮小文庫實(shí)驗(yàn)二 動物染毒途徑和方法1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊螅赫莆粘Ｓ玫膭游锶径就緩胶头椒ā?. 實(shí)驗(yàn)原理 :實(shí)驗(yàn)動物的一般染毒途徑主要是皮下注射、 皮內(nèi)注射、 肌內(nèi)注射、 靜脈注射、 腹腔注射、 經(jīng)口染毒、皮膚染毒和呼吸道染毒。3. 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備 :實(shí)驗(yàn)動物：成年、健康小鼠二器材：注射器 （0.5,1ml） 、消毒棉球、手套、 5Oml 燒杯。試劑：0,9%生理鹽水（100ml,滅菌）。4. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟 : 染毒的途徑和方法多種多樣，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、動物種類和藥物劑型等情況確定。1. 皮下注射

7、注射時以左手拇指和食指提起皮膚。將連有針頭的注射器刺入皮下。注 射部位一般在大腿外側(cè)、內(nèi)側(cè)、背部、耳根部、腹部。2. 皮內(nèi)注射 皮內(nèi)注射時需要將注射的局部脫去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按 住皮膚使之繃緊， 在兩指之間， 將連有針頭的注射器緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi)， 然后再向上挑 起并再稍刺入，即可注射藥物，此時可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘。3. 肌內(nèi)注射肌內(nèi)注射應(yīng)選用肌肉發(fā)達(dá)、沒有大血管通過的部位，一般多選臀部。注射時垂直刺入肌肉，回抽針?biāo)o回血，即可進(jìn)行注射。4. 靜脈注射 一般采用尾靜脈注射， 鼠尾靜脈有三根， 左右兩側(cè)尾靜脈比較容易固定，多采用。 操作時先將動物固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯中，

8、 使尾巴露出， 尾部用溫水浸潤或用酒 精擦拭。 以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè)， 中指從下面托起尾巴， 以無名指和小指夾住尾巴 的末梢， 右手持注射器， 使針頭與靜脈平行， 從尾下四分之一處進(jìn)針， 先緩慢注入少量藥液， 如無阻力， 可繼續(xù)注入。 注射完畢后把尾部向注射側(cè)彎曲以止血。 或用消毒棉球壓迫針眼止 血。5. 腹腔注射 用小白鼠做實(shí)驗(yàn)時，以左手抓住動物，使腹部向上，右手將注射針頭于 左或右下腹刺入皮下，使針頭向前推進(jìn)0.5 1.0cm，再以45度角穿過腹肌，固定針頭，緩慢注入藥液。6. 經(jīng)口染毒 （ 見實(shí)驗(yàn)五 ）7. 皮膚染毒 （ 見實(shí)驗(yàn)四 ）8. 呼吸退染毒 （ 見實(shí)驗(yàn)六 ）5. 注意事

9、項(xiàng) : 在實(shí)驗(yàn)操作過程中， 注意安全， 以免被小鼠咬傷， 防止小鼠丟失。 同時要遵守實(shí)驗(yàn)操作 規(guī)程。6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 : 掌握實(shí)驗(yàn)動物染毒的常用的方法及其操作 .7. 實(shí)驗(yàn)報告要求 : 實(shí)驗(yàn)報告應(yīng)包含如下內(nèi)容 : 原理、儀器和試劑、實(shí)驗(yàn)操作步驟。實(shí)驗(yàn)三 動物生物材料采集、準(zhǔn)備1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?掌握動物生物樣品采集方法及實(shí)驗(yàn)動物的處死方法。2. 實(shí)驗(yàn)原理 : 動物生物樣品的采集對實(shí)驗(yàn)結(jié)果十分重要， 各臟器的比重和血液指標(biāo)反映了動物染毒后 的生理變化。3. 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備 : 實(shí)驗(yàn)動物：成年、健康小鼠 試劑：酒精。 器材：酒精棉球、解剖剪刀、血色素吸管、干棉球、注射器、鑷子。4. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟 :（

10、一）采血方法1. 鼠尾采血方法：適用于血量少的實(shí)驗(yàn)。方法：將動物固定后，把鼠尾浸入 4550°C溫水中使尾靜脈充血，擦干皮膚后，再用酒精棉球擦拭消毒。剪去尾尖（約0.20.3cm）,拭去第一滴血，用血色素吸管 （ 根據(jù)需要事先在吸管內(nèi)加入與不加抗凝劑）吸取一定量尾血 ,然石用干棉球壓迫止血。也可以不剪尾，以 1 ml 注射器連上 7-8 號針頭直接刺破尾靜脈進(jìn) 行定最采血。2. 眼眶靜脈叢采血法： 操作者以左手拇指、 食指緊緊握住小鼠頸部壓迫頸部兩側(cè)使眶 后靜脈叢充血（注意用力要恰當(dāng)，以防止動物窒息死亡） ，右手持玻璃毛細(xì)管從一側(cè)眼內(nèi)眥 部以 45 度角刺入，捻轉(zhuǎn)前進(jìn)。如無阻力繼續(xù)刺

11、入，有阻力就抽出玻璃毛細(xì)管調(diào)準(zhǔn)方向后再 刺入，直至出血為止。右手持容器收集血液后，拔出毛細(xì)管，用干棉球壓迫止血。3. 腹主動脈或股動 （ 靜）脈采血法：為一次性采血方法。大、小鼠麻醉后，仰臥位固 定動物，剪開腹腔，剝離暴露腹主動脈或暴露股動 （靜） 脈，用往射器刺入采血。4. 斷頭采血法：操作者左手握住動物， 右手持剪刀，快速剪斷頭頸部，倒立動物將血 液滴入容器。注意防止剪斷的毛發(fā)掉入接血容器中。（二）處死方法1. 脊椎脫臼法 左手按住鼠頭， 右手抓住鼠尾猛力向后拉， 使動物頸椎拉斷脫節(jié)而立 即死亡。此法多用于處死小鼠。2. 斷頭法 操作者用右手握住大鼠或小鼠頭部， 左手握住背部， 露出頸部，

12、 助手用大 剪刀或斷頭器剪斷頸部使之死亡。也可使用斷頭器。3. 急性大失血法 可用鼠眼眶動脈和靜脈急性大量失血法使大、 小鼠立即死亡 .（ 詳見 動物的采血方法 ） 。4. 擊打法 右手抓住鼠尾，提起，用力摔打其頭部，鼠痙孿后立即死亡。也可用小木 錘或器具猛力擊打動物頭部，使其立即死亡，常用于處死家兔或大鼠。（三）實(shí)驗(yàn)動物臟器的觀察和采取。5. 注意事項(xiàng) : 在實(shí)驗(yàn)操作過程中， 注意安全， 以免被小鼠咬傷， 防止小鼠丟失； 實(shí)驗(yàn)使用的有毒化學(xué) 藥品妥善處理 ; 要遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程。6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 : 掌握各種采血方法、實(shí)驗(yàn)動物各器官的正確位置和實(shí)驗(yàn)動物常用的處死方法。7. 實(shí)驗(yàn)報告要求 : 實(shí)

13、驗(yàn)報告應(yīng)包含如下內(nèi)容 : 原理、儀器和試劑、步驟，各種采血和處死方法的適用范圍。實(shí)驗(yàn)四 皮膚刺激實(shí)驗(yàn)1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?本試驗(yàn)的目的是 : 學(xué)習(xí)皮膚染毒技術(shù)，了解受試物對皮膚是否有刺激或腐蝕作用。2. 實(shí)驗(yàn)原理 : 有些化學(xué)毒物與皮膚接觸后可經(jīng)皮膚吸收引起機(jī)體中毒，或引起皮膚、粘膜局部損傷。因此，經(jīng)皮膚接觸毒性試驗(yàn)在衛(wèi)生毒理學(xué)中占有重要位置。3. 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備：實(shí)驗(yàn)動物：成年、健康的小鼠。皮膚刺激試驗(yàn)需動物3只。器材：解剖剪刀，細(xì)玻璃棒，棉球、醫(yī)用紗布、塑料薄膜、無刺激性膠布。試劑：辣椒油；脫毛劑：取3份硫化鈉，I份洗衣粉和7份淀粉，使用前臨時用溫水調(diào) 成糊狀。4. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟：1. 小鼠脫

14、毛技術(shù)。方法有三種：剪毛、拔毛和脫毛。剪毛 固定動物后用粗剪刀剪去所需部位的被毛。應(yīng)注意幾點(diǎn)：把剪刀貼緊皮膚剪，不可用手提起被毛，以免剪破皮膚；依次剪毛，不要亂剪；剪下來的被毛集中在一個容器內(nèi)， 勿遺留在手術(shù)和操作臺周圍。拔毛 小鼠作尾靜脈注射時，需用拇指、食指將局部被毛拔去，以利操作。脫毛脫毛系指用化學(xué)藥品脫去動物的被毛，適用于無菌手術(shù)的準(zhǔn)備以及觀察動物局部皮膚血液循環(huán)和病理變化。常用硫酸鋇或脫毛劑配方配制脫毛劑。2. 小鼠染毒操作浸尾法：染毒前先將小鼠放入特制地固定盒內(nèi)，并使其尾巴通過固定盒底部的軟木塞的圓孔露出管外。繼之將尾巴通過小試管軟木塞小孔，插入裝有受試物液體的試管內(nèi)， 浸飽26小

15、時。觀察中毒癥狀。涂布法：用棉簽將受試物液體均勻涂布于脫毛的皮膚上，在其上覆蓋紗布，并用膠布固 定。于染毒后 30min, 60min, 2h, 4h分別觀察染毒部位的皮膚，有無紅斑和水腫，有無水 泡，糜爛滲出等癥狀。記錄癥狀并判斷待測物對皮膚的刺激性。3. 皮膚局部刺激作用的觀察方法和評價。表1.皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)刺激反應(yīng)分值紅斑無紅斑0輕度紅斑（勉強(qiáng)可見）1中度紅斑（明顯可見）2重度紅斑3紫紅色紅斑到輕度焦痂形成4水腫無水腫0輕度水腫（勉強(qiáng)可見）1中度水腫（明顯隆起）2重度水腫（皮膚隆起 1mm輪廓清楚）3嚴(yán)重水腫（皮膚隆起 1mm以上并有擴(kuò)大）4最高總分值8表2.皮膚刺激強(qiáng)度評價標(biāo)準(zhǔn)分

16、值評價0-0.49無刺激性0.5-2.99輕度刺激性3.0-5.99重度刺激性6.0-8.0強(qiáng)刺激性4. 實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)脫毛操作過程中，注意不要傷到小鼠皮膚；小鼠在染毒過程中，注意其隨時間的變化。5. 注意事項(xiàng)：在實(shí)驗(yàn)操作過程中， 注意安全，以免被小鼠咬傷，防止小鼠丟失；實(shí)驗(yàn)使用的有毒化學(xué) 藥品妥善處理；要遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程。6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：觀察辣椒油對小鼠皮膚的刺激作用，并做出皮膚刺激性分級的判斷。7. 實(shí)驗(yàn)報告要求：實(shí)驗(yàn)報告應(yīng)包含如下內(nèi)容：原理、儀器和試劑、步驟、結(jié)果。實(shí)驗(yàn)五 經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊罅私庖淮位?4小時內(nèi)多次給予受試化學(xué)物后，動物所產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)及其嚴(yán)重程度，中毒

17、死亡的特征以及可能的死亡原因，觀察受試物毒性反應(yīng)與劑量的關(guān)系，求出半數(shù)致死量。2. 實(shí)驗(yàn)原理：經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)是研究化學(xué)化學(xué)物經(jīng)口染毒的方法是毒理學(xué)中重要的基本技術(shù)之一， 物毒性效應(yīng)的基本試驗(yàn)。 通過該實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)化學(xué)物毒性試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則和掌握經(jīng)口灌胃技 術(shù)。3. 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備：實(shí)驗(yàn)動物：成年、健康的雌、雄小鼠若干。器材：注射器（0.25, 1，2，5ml）吸管（0.1 ,0.2 ,0.5 ,1 ,2 ,10ml）容最瓶（10, 25 ，50ml）,燒杯（10,25,50ml ）,滴營、灌胃針、電子天平、動物體重稱、解剖剪刀、鑷子。試劑：受試化合物氯化鋇溶液，20mg/mL ）。4. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

18、步驟：1. 健康動物的選擇和性別鑒定。2. 實(shí)驗(yàn)動物稱重、編號和隨機(jī)分組。3. 受試化學(xué)物溶液的配置。4. 小鼠灌胃操作技術(shù)。取9只小鼠，稱重并隨機(jī)分成三組，對三組動物分別用灌胃法給以0.2mg/g，0.l mg/g，0.5mg/g的氯化鋇溶液。小鼠灌胃法將鈍頭的16號注射針（活用于小鼠）（注意事先可用焊錫在針尖周圍焊一圓頭，使其不易損傷動物的消化道）安裝在適當(dāng)容積的注射器上，吸取所需的受試物溶液，左手抓住動物雙耳后至背部的皮膚（小鼠僅抓住耳后、頸部的皮膚，用無名指、小手指和大魚際肌將其尾根部壓緊），將動物固定成垂直體位，腹部面向操作者。注意使動物的上消化 道固定成一直線。右手持注射器，將針頭

19、由動物口腔側(cè)插入，避開牙齒，沿咽后壁緩緩滑入食管。若遇阻力，可輕輕上下滑動探索，一旦感覺阻力消失，即可深入至胃部。如遇動物掙 扎。應(yīng)停止進(jìn)針或?qū)⑨槹纬觯扇f不能強(qiáng)行插入，以免操作穿破食管，其至誤入氣管，導(dǎo)致 動物立即死亡。進(jìn)針深度一般是小鼠 24cm為了驗(yàn)明是否已正確地插入胃部，可輕輕回抽注射器，如 無氣泡抽出，表明已插入胃中；如有大量氣泡，則提示誤插氣管，應(yīng)抽出重插。隨后將受試 物溶液注入。灌胃容量小鼠通常為0.2-1 ml。5. 毒性癥狀的觀察染毒后注意觀察中毒的發(fā)生、發(fā)展過程的規(guī)律以及中毒特點(diǎn)和毒作用的靶器官，觀察要點(diǎn)見表1,做好實(shí)驗(yàn)記錄.急性毒性試驗(yàn)可不做病理組織學(xué)檢查，但對死亡動物應(yīng)

20、做大體病 理學(xué)觀察，存活動物實(shí)驗(yàn)結(jié)束時可做大體解剖學(xué)觀察，肉眼觀察到病變時應(yīng)取材做病理組織學(xué)檢查，以便為下階段毒性試驗(yàn)劑量選擇提供參考依據(jù)。表1急性毒性試驗(yàn)原始記錄受試物種名稱：提供單位：染毒劑量：Mg/kg染毒途徑:動物種屬品系：動物來源：合格證號：室溫：相對濕度:組別染毒劑量(mg/kg)動物編號性別體重(g)染毒時間癥狀及 出現(xiàn)時 間死亡時間體重記錄(g)實(shí)驗(yàn)記錄者：記錄日期：年 月 日5. 注意事項(xiàng)在實(shí)驗(yàn)操作過程中， 注意安全，以免被小鼠咬傷，防止小鼠丟失；實(shí)驗(yàn)使用的有毒化學(xué) 藥品妥善處理；要遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程。為了使受試物能完全吸收，灌胃染毒時要求動物保持空腹?fàn)顟B(tài)，這是因?yàn)榛瘜W(xué)毒物進(jìn)入

21、胃內(nèi)易與食糜作用而降低毒性，而且胃內(nèi)容物也不利于受試物溶液的灌入，因此染毒前應(yīng)禁食610小時，但要注意時間不能過長。否則動物長時間饑餓會影響肝臟，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 灌胃后至少23小時后才能喂食，油劑比水溶液要求限制喂食的時間更長些。相同劑量的受試物， 若以不同濃度給藥， 死亡情況會有所不同。體積太小、太濃可能發(fā) 生局部刺激或其他損傷；體積太大可能會引起胃部機(jī)械性損傷，影響正常生理功能。常用的 方法是將受試物體積固定，根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的劑量將受試物配制成不同濃度的溶液進(jìn)行灌胃。 通常灌胃體積以體重的 1%L 2%十算，最多不超過 3%即每100g體重灌胃1 一 2 ml,最多不 超過3 ml。根據(jù)實(shí)際

22、經(jīng)驗(yàn)得出的各種實(shí)驗(yàn)動物灌胃量的極限是：小鼠0.5 1 ml，大鼠4一 5 ml 。6.實(shí)驗(yàn)結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照表1的內(nèi)容進(jìn)行填寫。7.實(shí)驗(yàn)報告要求：實(shí)驗(yàn)報告應(yīng)包含如下內(nèi)容：原理、儀器和試劑、步驟、原始數(shù)據(jù)、計(jì)算結(jié)果。實(shí)驗(yàn)六經(jīng)呼吸道急性毒性試驗(yàn)1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊蠼?jīng)呼吸道急性毒性試驗(yàn)是研究氣態(tài)、蒸氣志、氣溶膠、煙塵、粉塵狀的外源性化合物在吸入過程中對呼吸道有無損傷，能否經(jīng)呼吸道吸收以及吸收后對機(jī)體有無損害。經(jīng)呼吸道急性毒性試驗(yàn)是衛(wèi)生毒理學(xué)的重要基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一。本實(shí)驗(yàn)的目的是學(xué)習(xí)靜式呼吸道染毒技術(shù)。2. 實(shí)驗(yàn)原理：外源性化合物經(jīng)呼吸道吸入是工業(yè)毒理學(xué)和環(huán)境毒理學(xué)中最常見的基礎(chǔ)途徑之一，在衛(wèi)生毒理學(xué)研

23、究中具有重要意義。3. 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備：實(shí)驗(yàn)動物：成年、健康的雌、雄小鼠若干。器材：靜式吸入染毒柜干燥器改裝）、吸管（0.2、0.5、1.0、5.0ml ）、0.1g 下的天平。試劑：受試化合物乙醚）。4. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟：1. 復(fù)習(xí)實(shí)驗(yàn)動物選擇、性別鑒定、稱重、編號和隨機(jī)分組。2. 小鼠靜式呼吸道吸入染毒操作。向干燥器的陶瓷底板下分別放入沾有3ml，1.5ml，0.5ml乙醚的脫脂棉，將1只小鼠置于干燥器中，加蓋密封，每二十分鐘可開小縫通氣一次。持續(xù)觀察4h,觀察小鼠活動狀態(tài)，表現(xiàn)癥狀，如有死亡，則記錄死亡時間。在觀察結(jié)束后計(jì)算LD50.吸入接觸可分為兩種方式，一是動式吸入，一是靜式吸入。其類型

24、又可分為兩種 ，一是將實(shí)驗(yàn)動物整體置于染毒柜中；一是只將實(shí)驗(yàn)動物的口鼻部位與染毒柜中含受試化合物的空氣接觸，身體其它部位置于染毒柜外，一般成為面罩吸入染毒，可以避免化合物經(jīng)皮交叉吸收。靜式吸入：系將實(shí)驗(yàn)動物置于一個一定體積的密閉容器內(nèi)，加入定量的易揮發(fā)液態(tài)受試化合物或一定體積的氣態(tài)受試化合物。在容器內(nèi)形成所需的受試化合物濃度的空氣環(huán)境。接觸一定時間（一般為 2h或4h）后，觀察動物的中毒反應(yīng)，并根據(jù)動物的死亡隋況和相應(yīng)的 受試物濃度。求出LC50b這種接觸方式，實(shí)驗(yàn)動物在整個接觸期間得不到氧氣的補(bǔ)充。隨著接觸時間延長，染毒柜內(nèi)氧分壓下降，二氧化碳分壓上升，濕度、溫度也會上升。為此， 染毒柜的體積與所放置的動物數(shù)量應(yīng)相應(yīng)，