第二章藥物分析基礎(chǔ)分析方法驗證

1、2022-1-81需驗證的項目需驗證的項目驗證的內(nèi)容驗證的內(nèi)容準確度準確度防腐劑防腐劑溶出度溶出度,釋放度釋放度鑒別試驗鑒別試驗雜質(zhì)檢查雜質(zhì)檢查含量測定藥品質(zhì)量標準分析方法驗證藥品質(zhì)量標準分析方法驗證 精密度精密度 專屬性專屬性 檢測限檢測限 重復(fù)性重復(fù)性中間精密度中間精密度重現(xiàn)性重現(xiàn)性 2022-1-82一、準確度一、準確度(一一) 含量測定方法含量測定方法 (二二) 雜質(zhì)定量測定雜質(zhì)定量測定 加入已知量雜質(zhì)進行測試加入已知量雜質(zhì)進行測試 (三三) 數(shù)據(jù)要求數(shù)據(jù)要求 9個測定結(jié)果個測定結(jié)果3個不同濃度個不同濃度(80,100,120)每個濃度各每個濃度各3份份v 準確度系指用該方法測定的結(jié)果

2、與準確度系指用該方法測定的結(jié)果與 真實值或參考值接近的程度真實值或參考值接近的程度v 一般用回收率一般用回收率(%)表示表示 定義定義）（加入量樣品含量測得總量）回收率（% 100%）（加入量測得量）回收率（% 100%2022-1-83二、精密度二、精密度1.重復(fù)性重復(fù)性p 同一分析人員同一分析人員連續(xù)測定所得結(jié)連續(xù)測定所得結(jié)果的精密度果的精密度;p 也稱批內(nèi)精密也稱批內(nèi)精密度或日內(nèi)精密度度或日內(nèi)精密度 2.中間精密度中間精密度p 不同時間不同不同時間不同分析人員用不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果之設(shè)備測定結(jié)果之間的精密度間的精密度p 批批/日間精密度日間精密度 3.重現(xiàn)性重現(xiàn)性 p 在不同實

3、驗室在不同實驗室不同人員測定結(jié)不同人員測定結(jié)果之間的精密度果之間的精密度p 法定標準采用的法定標準采用的分析方法進行分析方法進行 v同一均勻供試品多次取樣測定所得同一均勻供試品多次取樣測定所得 結(jié)果之間的接近程度結(jié)果之間的接近程度 v標準偏差標準偏差(s,SD);相對標準偏差相對標準偏差(RSD)v數(shù)據(jù)要求同數(shù)據(jù)要求同“準確度準確度”定義定義2022-1-84三、專屬性三、專屬性(一一) 鑒別反應(yīng)鑒別反應(yīng) 空白空白, , 結(jié)構(gòu)相結(jié)構(gòu)相似物或有關(guān)物質(zhì)呈似物或有關(guān)物質(zhì)呈負反應(yīng)負反應(yīng)(三三) 含量與雜質(zhì)測定含量與雜質(zhì)測定 含雜質(zhì)或降解產(chǎn)含雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣中各峰能物的試樣中各峰能獲得分離獲得分離v

4、 在其他成分在其他成分(雜質(zhì)雜質(zhì),降解產(chǎn)物降解產(chǎn)物,輔料等輔料等)可能可能 存在下存在下,方法能正確測定出被測物的特性方法能正確測定出被測物的特性v 鑒別鑒別,雜質(zhì)檢查和含量測定方法雜質(zhì)檢查和含量測定方法 定義定義與應(yīng)用與應(yīng)用2022-1-85四、檢測限四、檢測限 適用于可用目視法直接評價結(jié)果的適用于可用目視法直接評價結(jié)果的 分析方法分析方法, 非儀器分析法非儀器分析法 鑒別的顯色法鑒別的顯色法;雜質(zhì)檢查的雜質(zhì)檢查的TLCl適用于能直觀顯示信號與基線噪聲適用于能直觀顯示信號與基線噪聲 水平的分析方法水平的分析方法, 如如HPLC法法 l 信噪比信噪比S/N=3(2)時的相應(yīng)濃度或量時的相應(yīng)濃度

5、或量p 適用于不能直觀比較信噪比的儀器適用于不能直觀比較信噪比的儀器 分析方法分析方法, 如如UV-Vis法法 p 檢測限檢測限(limit of detection, LOD)是指試樣中被是指試樣中被測物能被檢測出的最低濃度或量測物能被檢測出的最低濃度或量LOD是一種限度檢驗效能指標是一種限度檢驗效能指標,反映方法靈敏度反映方法靈敏度 1.目視法目視法 2.信噪比法信噪比法 3.標準偏差標準偏差法法 空樣樣空SACSfLOD332022-1-86五、定量限五、定量限雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量方法研究時雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量方法研究時, 應(yīng)確定應(yīng)確定LOQ LOQ的測定方法與的測定方法與LOD相同相同

6、相應(yīng)的系數(shù)相應(yīng)的系數(shù)(倍數(shù)倍數(shù))不同不同, 如信噪比如信噪比S/N=10定量限定量限(limit of quantitation, LOQ )是指試樣是指試樣中被測物能被定量測定的最低量中被測物能被定量測定的最低量;反映方法的靈敏度反映方法的靈敏度測定結(jié)果應(yīng)具有一定準確度和精密度測定結(jié)果應(yīng)具有一定準確度和精密度 2022-1-87六、線性與范圍六、線性與范圍范圍系指方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間范圍系指方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間在試驗研究開始前確定驗證的范圍和方法在試驗研究開始前確定驗證的范圍和方法在范圍內(nèi)應(yīng)能達到一定精密度在范圍內(nèi)應(yīng)能達到一定精密度,準確度和線性準確度和線性p線性系指在設(shè)

7、計的線性系指在設(shè)計的“范圍范圍”內(nèi)內(nèi), 響應(yīng)值響應(yīng)值(y)與被與被測物濃度測物濃度(x)直接呈正比關(guān)系的程度直接呈正比關(guān)系的程度 y = ax + bp系列系列(n5)供試樣品測定供試樣品測定,以響應(yīng)信號作為被測以響應(yīng)信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖物濃度的函數(shù)作圖p用最小二乘法進行線性回歸用最小二乘法進行線性回歸; 或經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換后或經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換后再進行線性回歸再進行線性回歸2022-1-88六、線性與范圍六、線性與范圍原料藥原料藥/制劑含量測定制劑含量測定: 80%120% 制劑含量均勻度檢查制劑含量均勻度檢查: 70%130% 溶出度或釋放度檢查溶出度或釋放度檢查: 下限下限-20%上限上限+2

8、0%特殊元素含量測定特殊元素含量測定: 下限下限-20%上限上限+20%雜質(zhì)測定雜質(zhì)測定: 限度限度20%如果雜質(zhì)檢查與含量測定同時進行如果雜質(zhì)檢查與含量測定同時進行, 雜質(zhì)限度雜質(zhì)限度-20含量上限含量上限+20% u涉及定量測定的項目均需對范圍進行驗證涉及定量測定的項目均需對范圍進行驗證如如: 含量測定含量測定, 含量均勻度含量均勻度, 溶出度或釋放溶出度或釋放度度, 特殊元素或特殊雜質(zhì)的定量檢查特殊元素或特殊雜質(zhì)的定量檢查2022-1-89七、耐用性七、耐用性耐用性系指在測定條件有小的變動時耐用性系指在測定條件有小的變動時, 測定測定結(jié)果不受影響的承受程度結(jié)果不受影響的承受程度; 體現(xiàn)測

9、定條件的體現(xiàn)測定條件的允許變動范圍允許變動范圍HPLC法典型因素有法典型因素有: 流動相的組成和流動相的組成和pH值值及流速及流速, 不同廠牌或不同批號的同類型色譜不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱柱, 柱溫等柱溫等 GC法典型因素有法典型因素有: 不同廠牌或批號的色譜柱不同廠牌或批號的色譜柱, 固定相固定相, 不同類型的擔(dān)體不同類型的擔(dān)體, 柱溫柱溫, 進樣口和檢進樣口和檢測器溫度等測器溫度等 2022-1-810八、驗證內(nèi)容的選擇八、驗證內(nèi)容的選擇 驗證內(nèi)容選擇的一般原則驗證內(nèi)容選擇的一般原則:非定量分析方法非定量分析方法 如鑒別如鑒別,雜質(zhì)的限度檢查法雜質(zhì)的限度檢查法: 驗驗證證“專屬性專

10、屬性”,“檢測限檢測限”和和“耐用性耐用性”定量分析方法定量分析方法 如原料藥或制劑的含量測定及含如原料藥或制劑的含量測定及含量均勻度量均勻度,溶出度或釋放度的測定方法溶出度或釋放度的測定方法: 除除“檢測檢測限限”和和“定量限定量限”外外, 其余均驗證其余均驗證微量定量分析方法微量定量分析方法 如雜質(zhì)的定量測定方法如雜質(zhì)的定量測定方法: 除除“檢測限檢測限”視情況而定外視情況而定外, 其余均驗證其余均驗證2022-1-811八、驗證內(nèi)容的選擇八、驗證內(nèi)容的選擇 驗證內(nèi)容驗證內(nèi)容分析項目分析項目鑒別鑒別試驗試驗元素或雜質(zhì)檢查元素或雜質(zhì)檢查含量測定及含量測定及溶出量測定溶出量測定限度限度定量定量準確度準確度 +精密度精密度重復(fù)性重復(fù)性 +中間精密度中間精密度 +專屬性專屬性