消水散藥效學(xué)研究

1、消水散藥效學(xué)研究              作者：郭新美， 王樹榮， 榮學(xué)東【摘要】  目的研究消水散治療結(jié)核性胸水的機(jī)制。方法運(yùn)用灌胃給藥途徑觀察其對(duì)小鼠在促進(jìn)結(jié)核性胸水的消退、抗慢性增生性炎癥中的作用及其對(duì)小鼠胸腺、脾臟的重量和血清溶血素水平的影響。結(jié)果該制劑具有良好的加速結(jié)核性胸水的消退及一定的抗慢性炎癥作用，并可增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。結(jié)論消水散對(duì)結(jié)核性胸水的治療作用主要在于能加速消水、抗炎及增強(qiáng)免疫功能。 【關(guān)鍵詞】  消水散； 藥效學(xué)Abstrac

2、t：ObjectiveTo study the treatment mechanism of Xiaoshui powder on tuberculous pleurisy.MethodsTo observe the effects of Xiaoshui powder on promoting extinction of tuberculous pleural fluid of Mus musculus albus with the administration route of lavage，counteracting Chronic hyperplastic inflammation ,

3、and in their weight of thymus gland and spleen of mouse, as well as the level of serumal hemolysin.ResultsXiaoshui powder could promote  extinction of tuberculous pleural fluid and counteract Chronic hyperplastic inflammation and reinforce immune function. ConclusionXiaoshui powder can speed up

4、 the extinction of fluid and resist inflammatory and reinforce immune function.Key words：Xiaoshui powder；  Pharmacodynamics   消水散是在老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方(生黃芪、丹參、枸杞子、百部等)的基礎(chǔ)上加減并經(jīng)現(xiàn)代工藝研制而成的散劑,具有利水消腫、養(yǎng)陰健脾的功效,用于結(jié)核性胸水的治療有較好的臨床效果。為進(jìn)一步闡明該藥的治療機(jī)理,筆者按衛(wèi)生部中藥新藥研究指南1的基本要求對(duì)其進(jìn)行了藥效學(xué)研究?，F(xiàn)報(bào)道如下。1  器材1.1  藥物消水散 (

5、山東省中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科提供,每毫升相當(dāng)于含有生藥1.5g)、呋噻米注射液(泗水希爾康制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào)0307021),玉屏風(fēng)顆粒(廣東環(huán)球制藥有限公司,批號(hào)050902),瓊脂（青島海洋化工廠，批號(hào)031104），XS-225A電子天平(瑞士Precisa公司生產(chǎn))，結(jié)核分枝桿菌菌株:用我院傳代的標(biāo)準(zhǔn)人型結(jié)核菌株H37Rv在改良羅氏培養(yǎng)基上培養(yǎng)3周,刮取菌落,用電子秤稱重量。研磨勻漿后用生理鹽水稀釋制成每毫升含菌量0.03 mg的懸液備用。1.2  儀器UA-2100型分光光度計(jì)（尤尼柯儀器有限公司生產(chǎn)），DZKW-C型恒溫水?。S曄市卸甲電器廠），DL-5-B型離心機(jī)

6、（上海安亭科學(xué)儀器廠）。1.3  動(dòng)物昆明系小鼠 (由山東大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,魯動(dòng)質(zhì)字D20040923)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)入后在實(shí)驗(yàn)室條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后在大鼠右側(cè)腹股溝內(nèi)側(cè)備皮、消毒,卡介苗(BCG)懸液0.1 ml(0.06 mg)皮內(nèi)注射。BCG為上海生物制品研究所生產(chǎn),批號(hào)S20013038。2  方法2.1  動(dòng)物模型的制備 健康小鼠100只，體重2023 g，雄雌各半，按體重性別隨機(jī)均分為5組，其中3組灌胃不同劑量的消水散，0.2 ml/10 g，1次/ d，連續(xù)7 d。對(duì)照組、呋噻米組同時(shí)灌胃等容量生理鹽水。實(shí)驗(yàn)第8天實(shí)驗(yàn)前1 h，給呋噻米

7、組動(dòng)物灌服呋噻米。小鼠于接種BCG后5周作胸腔穿刺術(shù)。先胸部備皮,用地西泮注射液0.3 ml/只肌肉注射,5 min后以5號(hào)針頭從右側(cè)肋弓角頂點(diǎn)緊貼劍突側(cè)緣作胸腔穿刺,約進(jìn)針0.5 cm后注入結(jié)核分枝桿菌懸液1ml,第2天以順利抽出胸腔積液為模型建立成功。實(shí)驗(yàn)時(shí)將各組動(dòng)物用苦味酸標(biāo)記、稱重。胸腔內(nèi)注入后第2，5，10，15，20天處死小鼠。每只大鼠肌肉注射地西泮溶液0.4 ml后,剪開(kāi)腹部皮膚,腹主動(dòng)脈放血至死。然后用剪刀從劍突處沿胸骨剪開(kāi)皮膚和胸骨,暴露雙側(cè)胸腔。觀察胸腔積液在胸內(nèi)的分布收集、記錄胸腔積液量。注射后每隔2 h用電子天平稱量動(dòng)物體重1次并記錄，連續(xù)4次。2.2  消水

8、散抗慢性增生性炎癥實(shí)驗(yàn)2，3取健康小鼠100只，體重2023 g，雄雌各半，按體重性別隨機(jī)均分為5組；分別灌喂生理鹽水、不同劑量的消水散以及玉屏風(fēng)顆粒，0.2 m1/10 g，1次/d，連續(xù)13 d。實(shí)驗(yàn)第1天動(dòng)物均右側(cè)腋窩皮下注射2%瓊脂0.5 ml只。實(shí)驗(yàn)第14天，將動(dòng)物脫頸椎處死，仔細(xì)剖取皮下瓊脂塊，用精密電子分析天平稱量其濕重。2.3  消水散對(duì)幼鼠胸腺、脾臟重量的影響2，3健康小鼠100只，體重1315 g，雄雌各半，按體重性別隨機(jī)均分為5組；分別灌胃生理鹽水、不同劑量的消水散以及玉屏風(fēng)顆粒，0.2 ml10 g，1次/d，連續(xù)7 d。實(shí)驗(yàn)第8天，將動(dòng)物脫頸椎處死，仔細(xì)剖取

9、動(dòng)物胸腺、脾臟，置入Bounis中固定24 h，仔細(xì)剔除附著的結(jié)締組織，分析天平稱重，計(jì)算胸腺、脾臟重量系數(shù)(mg10 g組織)。2.4  消水散對(duì)小鼠血清溶血素水平的影響2，3健康小鼠100只，體重1315 g，雄雌各半，按體重性別隨機(jī)均分為5組；分別灌胃生理鹽水、不同劑量的消水散以及玉屏風(fēng)顆粒，0.2 ml10 g，1次/d，連續(xù)7 d。            實(shí)驗(yàn)第1天動(dòng)物均腹腔注射5雞紅細(xì)胞液0.2 ml只刺激動(dòng)物免疫。實(shí)驗(yàn)第8天,摘取動(dòng)物眼球取血(不加抗凝劑)，離心3 000

10、 rmin，10 min；所得血清用生理鹽水稀釋100倍；取稀釋血清l ml，加入5雞紅細(xì)胞液0.5 ml，10補(bǔ)體0.5 ml，混勻；在37水浴溫育30 min，0冰水終止反應(yīng)。將上述液體離心，3 000 rmin，10 min；取上清液于分光光度計(jì)540 nm處測(cè)定吸光度(OD值)，  以O(shè)D值大小反映血清溶血素水平的高低。2.5  實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理采用SASS8.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。3  結(jié)果3.1  消水散促進(jìn)結(jié)核性胸水消退情況結(jié)果見(jiàn)表1。胸腔鏡和胸膜活檢的病理發(fā)現(xiàn)50%80%的結(jié)核性胸膜炎患者其胸膜有典型的結(jié)核結(jié)節(jié),提示結(jié)核分枝桿菌直接侵襲胸膜引起

11、胸膜炎癥并產(chǎn)生胸腔積液4,這成為胸腔內(nèi)注入結(jié)核分枝桿菌以建立結(jié)核性胸膜炎的動(dòng)物模型的依據(jù)。本研究采用減毒活結(jié)核分枝桿菌直接注入大鼠的胸腔內(nèi),試圖建立結(jié)核性胸膜炎并發(fā)胸腔積液的實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型,再給小鼠分別灌胃消水散、鹽水及呋噻米后，以觀察其對(duì)胸水消退的程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，消水散3種劑量均可加速結(jié)核性胸水的消退(P0.05)；其中以小劑量的消水散效應(yīng)稍微優(yōu)于其它兩種劑量。表1  消水散促進(jìn)結(jié)核性胸水消退實(shí)驗(yàn)結(jié)果(略)3.2  消水散抗慢性增生性炎癥情況結(jié)果見(jiàn)表2。3種劑量的消水散均具有一定的抗慢性炎癥作用；小劑量的消水散抗炎效應(yīng)與對(duì)照組比較可見(jiàn)顯著性差異(P005)。該實(shí)驗(yàn)與上

12、述實(shí)驗(yàn)均未呈現(xiàn)消水散的量-效關(guān)系，  出現(xiàn)該現(xiàn)象的原因不清，可能與中藥方藥具有最適治療劑量有關(guān)。表2  消水散抗慢性增生性炎癥實(shí)驗(yàn)結(jié)果(略)3.3  消水散對(duì)幼鼠胸腺、脾臟重量的影響結(jié)果見(jiàn)表3。在有關(guān)免疫功能實(shí)驗(yàn)中，可以觀察到連續(xù)給動(dòng)物灌服消水散，可以增加幼小動(dòng)物胸腺、脾臟的重量系數(shù)；在增加胸腺重量系數(shù)方面，大、中劑量的消水散與對(duì)照組比較可見(jiàn)顯著性差異(P0.05)；在增加脾臟重量系數(shù)方面，  3種劑量的消水散有一定作用趨勢(shì)；這表明消水散可以增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能。表3  消水散對(duì)幼鼠胸腺、脾臟重量的影響(略)3.4  消水散對(duì)小鼠

13、血清溶血素水平的影響結(jié)果見(jiàn)表4。血清溶血素水平測(cè)定結(jié)果顯示，消水散可提高血清溶血素水平，  中劑量消水散作用更加顯著，意味其具有體液免疫增強(qiáng)功能。表4  消水散對(duì)小鼠血清溶血素水平影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果(略)4  討論   近年來(lái)，結(jié)核病疫情在世界范圍內(nèi)呈現(xiàn)回升趨勢(shì), 結(jié)核性胸膜炎的發(fā)病率也有所增加。結(jié)核性胸膜炎是臨床常見(jiàn)病，是結(jié)核分支桿菌及其代謝產(chǎn)物進(jìn)入高敏狀態(tài)的機(jī)體胸膜所引起的胸膜炎癥，可同時(shí)伴有或無(wú)明顯的肺部結(jié)核病灶5。遲發(fā)性超敏反應(yīng)在結(jié)核性胸膜炎發(fā)病中起重要作用，若機(jī)體免疫力低，變態(tài)反應(yīng)不很強(qiáng)時(shí)，可發(fā)生干性胸膜炎；若機(jī)體免疫力高，變態(tài)反應(yīng)很強(qiáng)時(shí)，

14、則可發(fā)生滲出性胸膜炎，產(chǎn)生胸腔積液，即結(jié)核性胸水，量多少不等，為漿液性、漿液纖維素性或纖維素性，少數(shù)為血性。大多數(shù)結(jié)核性胸水在積極的抗結(jié)核治療及胸腔穿刺抽液下，療程內(nèi)可完全吸收治愈，但仍有許多病人會(huì)出現(xiàn)胸水吸收慢、吸收不徹底，乃至病情遷延不愈，最后導(dǎo)致胸膜肥厚、胸廓塌陷，給病人帶來(lái)痛苦。   結(jié)核性胸膜炎在中醫(yī)則屬“飲證”范疇，名曰“懸飲”，多由中焦陽(yáng)虛，不能溫陽(yáng)化水，以致水飲內(nèi)停，水氣凌心射肺而致6。消水散系由生黃芪、丹參、云苓、澤瀉、車前子、豬苓等中藥組成的方藥，具有利水滲濕、補(bǔ)益氣血之功效，臨床用于治療結(jié)核性胸水具有顯著療效。本研究主要目的是根據(jù)該方藥的功效主治，從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)角度觀察該方藥的有關(guān)藥效學(xué)效應(yīng)。   實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，消水散具有良好的加速結(jié)核性胸水消退、一定的抗慢性炎癥作用；可增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政管理局