研究人參蛋白的抗輻射損傷作用

1、研究人參蛋白的抗輻射損傷作用摘要：目的研究人參蛋白的抗輻射損傷作用。方法以 60Co-丫射線一次性 照射小鼠全身，觀察人參蛋白對照射小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)，骨髓細(xì)胞微核數(shù)，紅細(xì)胞超氧化物歧化酶（SOD活性，肝臟丙二醛（MDA含量以及胸腺、脾臟指數(shù) 的影響。結(jié)果人參蛋白能增加輻射后小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)，減少骨髓細(xì)胞微核數(shù)，增加紅細(xì)胞SOD活性，抑制肝臟MDA含量升高，提高胸腺及脾臟臟體指數(shù)。結(jié)論 人參蛋白對丫射線所致小鼠輻射損傷有較好的保護(hù)作用。關(guān)鍵詞：人參蛋白；小鼠；輻射損傷人參為五加科植物人參 Panax ginseng C. A. Meyer 的干燥根。大量研究 顯示，人參單味藥及復(fù)方藥均具有明

2、顯的抗輻射作用1,但目前研究大多針對人參皂苷及多糖類，認(rèn)為皂苷與多糖是人參抗輻射作用的主要成分26，對于蛋白類成分抗輻射研究未見報道。本實驗通過觀察人參蛋白對輻射小鼠損傷的 保護(hù)作用，為進(jìn)一步研究人參蛋白的抗輻射作用奠定基礎(chǔ)。1 材料與儀器藥物5年生人參購自吉林靖宇縣，為五加科植物人參 （Panax giseng Mey.的干燥根。人參蛋白樣品為本實驗室制備，經(jīng) Bradford蛋白含量試劑盒法 測定蛋白含量為80%動物由吉林大學(xué)實驗動物中心提供的ICR小鼠，雄性，體質(zhì)量1822 g。動物 質(zhì)量合格證號：10-1023。儀器與試劑貝克曼-庫爾特5分類血球計數(shù)儀，Backman公司；XS-212

3、-201雙目光學(xué)顯 微鏡，Jnoec公司；UV mini-1240型紫外可見分光光度計，Shimadzu公司；SOD 試劑盒、MDAC劑盒，南京建成生物研究所。2 方法動物分組取40只小鼠，隨機分為4組，即正常對照組，輻射對照組，人參蛋白高劑 量組（1 mg/g）及人參蛋白低劑量組（mg/g ）。各組均為灌胃給藥，1 ml/次， 對照組灌服等體積蒸餾水。連續(xù)給藥 7d后，除正常對照組外，其余3組均實施 一次性60Co- 丫射線全身照射，照射劑量為2 Gy。外周血白細(xì)胞計數(shù)照射后24 h尾靜脈采血20卩l(xiāng)，加入到ml 2%HA溶液中，充分混勻，力卩 入血球計數(shù)板中，在顯微鏡下讀取白細(xì)胞（WBC個

4、數(shù)。骨髓細(xì)胞微核計數(shù)照射后24 h小鼠頸椎脫臼處死，取胸骨，用止血鉗擠出骨髓液與玻片一端 的小牛血清混勻，常規(guī)涂片。涂片自然干燥后放入甲醇中固定510 min。將固定好的涂片放入Giemsa應(yīng)用液中，染色1015 min。立即用蒸餾水沖洗，晾干， 鏡檢。選擇細(xì)胞完整、分散均勻、著色適當(dāng)?shù)膮^(qū)域，在油鏡下觀察。以有核細(xì)胞 形態(tài)完好作為判斷制片優(yōu)劣的標(biāo)準(zhǔn)。紅細(xì)胞SOD舌性及肝臟MDA含量測定小鼠頸椎脫臼處死后，立即眼球取血并剝?nèi)「闻K。全血經(jīng)生理鹽水沖洗， 冷雙蒸水混合、95%乙醇振蕩、三氯甲烷抽提制備SODt提液，按照試劑盒說明 書測定SOD舌力。肝組織經(jīng)生理鹽水沖洗，磷酸鹽緩沖液勻漿制成 5%組織

5、勻漿 液，取上清按照試劑盒說明測定 MDA含量。臟體指數(shù)計算照射24 h后，分別對各受試小鼠進(jìn)行稱重。小鼠處死后 分別取出胸腺和脾臟稱量，計算胸腺、脾臟的臟體指數(shù)比。數(shù)據(jù)處理與分析數(shù)據(jù)以土 s表示，組間差異按Poisson分布進(jìn)行t檢驗。3 結(jié)果人參蛋白對輻射小鼠血液白細(xì)胞數(shù)及骨髓細(xì)胞微核數(shù)的影響顯微鏡下讀取計數(shù)板中白細(xì)胞個數(shù)，計算計數(shù)池中4個大方格中白細(xì)胞總數(shù)：白細(xì)胞數(shù)（109/L） =4個大方格中白細(xì)胞總數(shù)/4 X稀釋倍數(shù)X 107;每只動 物計數(shù)1 000個嗜多染紅細(xì)胞，計算骨髓細(xì)胞微核率，以千分率表示。結(jié)果見表 1。表1 人參蛋白對白細(xì)胞數(shù)及骨髓微核數(shù)的影響（略）由表1可見，輻射對照組

6、與正常對照組比較，WBC數(shù)明顯降低，微核率明顯升高，說明造模成功。人參蛋白組較輻射對照組小鼠 WB（數(shù)明顯增多，微核率 明顯降低，說明人參蛋白可對抗輻射所致白細(xì)胞數(shù)降低及微核數(shù)升高。人參蛋白對輻射小鼠SOD舌性及MDA含量的影響 按照試劑盒方法分別 測定紅細(xì)胞SOD舌性及肝臟MDA含量，并按照試劑盒所示公式進(jìn)行計算。 結(jié)果見 表2。表2 人參蛋白對SOD舌性及MDA含量的影響（略）由表2可見，輻射對照組與正常對照組比較，SOD舌性明顯降低、MDA含量明 顯升高，說明造模成功。人參蛋白組與輻射對照組比較，SOD舌性明顯升高，且成一定量效關(guān)系，說明人參蛋白可對抗輻射所致SOD舌性降低；MDA含量雖

7、無明顯變化但有降低趨勢，且成一定量效關(guān)系，說明人參蛋白可能具有抑制小鼠MDA含量升高的作用。人參蛋白對輻射小鼠胸腺及脾臟指數(shù)的影響小鼠處死后稱取胸腺、脾臟重量，并與處死前當(dāng)天小鼠體質(zhì)量進(jìn)行比較， 計算臟體系數(shù)比。結(jié)果見表3。表3 人參蛋白對胸腺及脾臟指數(shù)的影響（略）由表3可見，輻射對照組與正常對照組比較，胸腺及脾臟指數(shù)明顯降低， 說明造模成功。人參蛋白組與輻射對照組比較，胸腺指數(shù)及高劑量脾臟指數(shù)明顯 升高，說明人參蛋白可對抗輻射所致胸腺及脾臟指數(shù)降低，且成一定量效關(guān)系。綜上，給予人參蛋白能有效預(yù)防丫射線照射引起的小鼠白細(xì)胞數(shù)減少、 骨 髓微核數(shù)增加、紅細(xì)胞SOD舌性降低及胸腺、脾臟指數(shù)降低，對

8、MDA含量升高雖 無明顯抑制作用，但有一定抑制趨勢。4 討論輻射對生物體的危害較大，可以直接作用于 DNA蛋白質(zhì)及酶類，使分子 變性、細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞；也可以作用于機體內(nèi)水分子，使其產(chǎn)生大量的具有強氧化 性能的自由基，致使機體代謝紊亂，引起免疫、神經(jīng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)功能障 礙等一系列病變7。外周血白細(xì)胞數(shù)減少、骨髓細(xì)胞微核數(shù)增高、血或組織中 SOD舌性降低等均為一次性全身 丫射線照射引起輻射損傷的主要表現(xiàn)。白細(xì)胞 又稱白血球，作為免疫系統(tǒng)的一部分幫助身體抵抗傳染病以及外來的東西，白細(xì)胞急劇減少可引起血液病等多種免疫性疾病。微核是在細(xì)胞有絲分裂后期沒有進(jìn) 入細(xì)胞核而留在細(xì)胞質(zhì)中的染色體或片段， 它

9、在末期以后，單獨形成一個或幾個 規(guī)則的次核，由于比核小得多故稱微核。微核的多少直接反映染色體的損傷程度， 也間接代表機體受輻射損傷的狀況。 另外，正常組織受到輻射后，會產(chǎn)生大量自 由基，后者作用于生物膜引起脂質(zhì)過氧化，造成生物膜功能和代謝的改變。SOD作為機體組織主要清除自由基的抗氧化酶， 其活力的高低可間接反映機體清除自 由基的能力；MDA是脂質(zhì)過氧化的主要產(chǎn)物，其含量高低反映機體的自由基水平和氧化應(yīng)激水 平8。本實驗中人參蛋白能明顯抑制受照小鼠的白細(xì)胞數(shù)減少、微核數(shù)增多、SOD活性降低、MDA含量增加，說明人參蛋白對輻射損傷小鼠具有很好的保護(hù)作用。 同時，人參蛋白提高使受照小鼠的胸腺、 脾

10、臟指數(shù)增加，反映了人參蛋白有提高 免疫力的作用。綜上，我們認(rèn)為，人參蛋白具有有效防治輻射對機體損傷的作用， 且認(rèn)為人參蛋白的抗輻射作用可能與其增強免疫力，清除自由基作用密切相關(guān)。 對于人參蛋白的其他作用機理，我們正在進(jìn)一步研究中。【參考文獻(xiàn)】1 鄔 蓉,高守紅,辛海量.人參抗輻射損傷研究概況J.藥學(xué)實踐 雜志,20XX,25(6):364.2 姜建華,張學(xué)進(jìn),王育麗.人參皂苷對60Co照射小鼠不良反應(yīng)的影響J. 浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，20XX,15(11):682.3 Iva nova T, Han Y, Son HJ, et a1. An timutage nic effect of polysaccharide ginsan extracted from Panax ginseng J .Food ChemToxieol, 20XX, 44:517.4 金光輝,劉樹錚,劉 揚,等.人參組甙對紫外線輻射致皮膚角質(zhì)形成細(xì) 胞損傷的保護(hù)作用J 中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志,20XX,22(6):420.5 劉麗波，孫曉玲，張海英，等.人參三醇組苷對小鼠骨髓細(xì)胞染色體輻射 的防護(hù)作用J 吉林大學(xué)學(xué)報,20XX,2