水解度指標(biāo)測(cè)定

1、水解度的測(cè)定精選范本方法一：（茚三酮比色法）（1 ）標(biāo)準(zhǔn)曲線制定:1、20卩g/ml甘氨酸：2mg甘氨酸定容到100ml容量瓶中。2、茚三酮顯示劑：水合茚三酮0.5g，果糖0.3g，磷酸氫二鈉11.2g，磷酸二氫鉀6g,定容到100ml.稍熱溶解，避過低溫保存1周。3、40%乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線制作試管01 2345678待測(cè)樣品標(biāo)液ml0.000.1 0.20.30.40.50.60.71.00.5蒸餾水ml2.001.901.801.701.601.501.401.301.001.5茚三酮顯示11 11111111劑ml搖勻，沸水浴15min,用冷水迅速冷卻至室溫40%乙醇 ml555555555

2、5甘氨酸卩g0246810121420?OD(570nm)水解度計(jì)算公式：dH-AxWO%535(如泌)水解液- N生的含鞅啊曲）_原料蛋白質(zhì)中游離_阻含量（嗣xiOO%所以米樹蛋白的臨產(chǎn)734?N水解液蛋白含量（凱氏定氮）F-米糠蛋白換算系數(shù)5.95方法二：采用甲醛滴定法。水解度（%）=（水解后生成的氨基氮的量/樣品中總氮含量）X 100%（1）粗蛋白含量的測(cè)定：采用凱氏定氮法。（2）氨基氮的測(cè)定氨基酸含有氨基和羧基，具有兩性，加入甲醛與氨基酸中的氨基作用， 可消除其堿性，使羧基顯示出酸性，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，即可對(duì)氨基酸進(jìn)行定量。1、酚酞指示劑：0.5g酚酞溶于100ml50%的乙醇中

3、2、中性甲醛溶液：甲醛溶液（3637%，分析純）50ml，加入0.5%的酚酞指示 劑約3ml，滴加0.1md / L NaOH使溶液顯微粉色，儲(chǔ)存于棕色瓶中，臨用前配制。具體方法如下:分別吸取2mL不同水解度的水解液于燒杯中加蒸餾水 5mL，向燒杯中加入5滴酚酞指示劑，混合后加中性甲醛溶液 2.0ml再混合，用0.1mol /L NaOH滴定顯 微粉色。同時(shí)取同濃度但未水解的蛋白液2mL做空白實(shí)驗(yàn)。氨基氮含量（i】g/i】L）= V-VoXNx14.00810式中:V樣品耗用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù);V0空白耗用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù);N氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液摩爾濃度；14.008 1 mL濃度為1.

4、000 mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于氮的質(zhì)量（mg）。方法三:226水解度的測(cè)定采用P田S就滴定法回。根據(jù)多肽在不同pH的條件卜解離狀態(tài)不同：為pH值ffi 定時(shí)酶水解蛋n后形成的n由竣基、n出®基或氮基酸殘基數(shù)h不等；肖在堿性條件卞 水解時(shí)，釋放的氮基酸使溶液PHffl明顯卜降，用稀堿液將W滴定回起始pH值，可以 知道蛋白質(zhì)的肽鍵斷裂的悄況，棍據(jù)消耗的堿S計(jì)算水解度DH ffl.水解®=（水解的肽鍵數(shù)/總肽鍵數(shù)）X100%計(jì)算公瓦 DH = VNaOH'NKaOHJ （a'Mp*Htot） X 100%2-2公式中：V矗OH :滴定消耗的堿體積（】nL

5、）Nns,oh :滴定消耗的堿當(dāng)量濃度（juol/L）Mp :參加蛋白水解的蛋白總雖（g）Ht,t：每克蛋口小肽鍵的克當(dāng)量數(shù)（9,2iiimol/g）a : CL氨基酸的平M解離度（5CrC時(shí)，PK=7.1 士0.09）EOPH-pK/（+腫徑）PK=7.8+2400* （298-T） /298TT=273J5+t t：反應(yīng)環(huán)境的溫度 比）pH:反應(yīng)起pH值2.3.3水解度CDH）的測(cè)定口質(zhì)的水解程度常以愷口質(zhì)中的狀噩被斷裂的百分率來我示+常見的水解度測(cè)定和監(jiān) 控的方法主要有pH-帥t法（Aldei-Ni器en, 1986）.三硝堆苯瑣酸法、屮醉滴定法、三氯乙酸 沉淀法等.由于pH-stat法

6、口有操作簡(jiǎn)單，連續(xù)測(cè)定的優(yōu)點(diǎn)，并11當(dāng)pH大于&時(shí)，木斛過程 中加入堿的就與斷裂的肽鍵的數(shù)比有宦肚的關(guān)系+闔此，木硏究采用該袪來檢測(cè)大米蚩白的 水刪/；/(%) = xioob = /xA'xl/ccxl / 材 F式中：A單位質(zhì)屋貴門質(zhì)中被水解的肽鍵的城（11111101 g 4；B消耗的堿液休積 inU g-一堿液的濃度，inoVL； 血校匝系數(shù)C堿性貳口酶1&=1.01）： 叫底物中議門質(zhì)的含；;b幻 力陶底物中蛋門質(zhì)中的肽雜總數(shù).ininol/g （大米蠱門取建40） （Hmmd氛2000）.氮溶指數(shù)測(cè)定（TCA-NSI）可以通過檢測(cè)其氮溶解指數(shù)來初步判定小肽或寡肽含量。NSI （ % ）=（ N1/ N0） * 100N0 =總氮N1 =可溶性氮（用三氯乙酸可溶性氮測(cè)定法）氯乙酸氮溶指數(shù)（TCA NSI ）測(cè)定方法：20ml 10 % 三氯乙酸（TCA ）溶液添加到20ml待測(cè)混合液（混合液氯乙酸（TCA）是一種蛋白質(zhì)沉淀劑，它可以沉淀蛋白質(zhì)和較長(zhǎng)的肽 。可以被三氯乙酸沉淀的肽段所含的最少氨基酸殘基數(shù)與底物的種類 關(guān)，就特定的底物而言，三氯乙酸氮溶解指數(shù)可以定性反映蛋白質(zhì)的 解