食品中水溶性維生素檢驗(yàn)（二）

1、食品中水溶性維生素檢驗(yàn)（二） (三)其他b族維生素測定 1維生素b3維生素b3又稱煙酸(nicotinamide)、尼克酸(niacin)、維生素pp。是指具有煙酸生物學(xué)活性的吡啶-3-羧酸及其衍生物的總稱，包括煙酸和。為白色針狀結(jié)晶，在酸、堿、光、氧或加熱條件下不易被破壞，是維生素中最穩(wěn)定的一種。煙酸的測定辦法有高效液相色譜法(gb 5413.15)、分光光度法(gb/t 9695.25)、微生物法(gb/t 5009.89)等。高效液相色譜法是將試樣經(jīng)熱水提取、酸性沉淀蛋白質(zhì)后，以c18色譜柱分別煙酸和，用紫外檢測器于261 nm波特長測定吸光度值，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。此法適用于嬰幼兒食品和乳

2、品中煙酸和的測定。分光光度法的測定原理是：煙酸經(jīng)溶液提取，與溴化氫結(jié)合，在對氨基苯乙酮作用下，生成黃色化合物，在420nm波特長測定吸光度值，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。此辦法適用于肉與肉制品中煙酸的檢測。 2維生素b6 (pyridoxine, pn)、(pyridoxal,pl)、(pyridoxamine,pm)是維生素b6的3種自然存在形式，它們易溶于水，在空氣和酸性環(huán)境中穩(wěn)定，堿性條件和光照下易被破壞。 維生素b6的測定辦法有熒光分光光度法、微生物法(gb/t 5009.154)、高效液相色譜法(gb 5413.13)。高效液相色譜法原理是：試樣經(jīng)熱水提取、凈化后，經(jīng)c18色譜柱分別，熒光檢測器

3、檢測，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。適用于嬰幼兒食品和乳品中維生素b6的測定。 3維生素b12又稱鈷胺素(cobalamin)，展現(xiàn)鈷元素的深紅色，易溶于水和乙醇，在強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、光照條件下及氧化劑存在下易被破壞。常用于測定維生素b12的辦法有高效液相色譜法、離子交換色譜法、原子汲取分光光度法等。食品平安國家標(biāo)準(zhǔn)中嬰幼兒食品和乳品中維生素b12的測定采納微生物法(gb 5413.14)；保健食品中維生素b12的測定辦法采納高效液相色譜法(gbit 5009.217)，利用固相萃取或免疫親和色譜法對樣品提取液中的維生素b12舉行富集并去除雜質(zhì)后，用高效液相-紫外檢測器舉行測定。 4. b族維生素同時測定針對單個

4、維生素的測定辦法較為費(fèi)時，而采納高效液相色譜法可以同時檢測多種b族維生素。我國國家標(biāo)準(zhǔn)辦法采納高效液相色譜法對保健食品中、鹽酸吡哆醇、和同時舉行檢測(gbit 5009.197)。 樣品經(jīng)、水和磷酸的混合液(100+400+0.5)超聲波提取，離心、過濾后，以c18柱分別，紫外檢測器檢測，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。在流淌相中加入0.1%磷酸調(diào)整ph可以降低b族維生素的離子化，從而調(diào)整其保留時光和分別度，充實(shí)峰形。另外，流淌相中加入烷基磺酸鹽，可與離解的b族維生素生成中性離子對，利于分別檢測。為提高檢測敏捷度，維生素b1檢測波長可調(diào)整為260nm，維生素b6、煙酸和的波長可調(diào)整為280nm。 (四)維生素

5、c測定 維生素c即抗壞血酸(ascorbic acid)，為無色結(jié)晶，對光、熱敏感，在堿性條件下易被氧化，酸性條件下較為穩(wěn)定，其有較強(qiáng)還原性。抗壞血酸被氧化的產(chǎn)物脫氫抗壞血酸仍具有生理活性，但進(jìn)一步氧化則生成無生理活性的2,3-二酮古樂糖酸。食品分析中測定的總抗壞血酸僅包括前兩者，即抗壞血酸和脫氫抗壞血酸。 抗壞血酸的測定辦法有熒光分光光度法、分光光度法、滴定法、高效液相色譜法等。其中熒光分光光度法因?yàn)槊艚荻雀?、干擾較小、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)被廣泛采納(gbit 5009.86;gbit 9695.29; gb 5413.18); 滴定法(gb 6195)和固藍(lán)鹽比色法(gbit5009.159)用

6、于測定食品中還原型抗壞血酸含量，熒光分光光度法和法測定的是食品中總抗壞血酸含量。 1總抗壞血酸的測定 (1)熒光法 1)原理：還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化為脫氫型抗壞血酸后，可與(opda)反應(yīng)生成有熒光的喹喔啉(quinoxaline )，其熒光強(qiáng)度與抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比，由此可測定食品中抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量。樣品中熒光雜質(zhì)的干擾可通過脫氫抗壞血酸與硼酸形成復(fù)合物而不能與opda反應(yīng)生成熒光物質(zhì)排解。 2)分析步驟：稱取適量樣品，加入偏磷酸-乙酸溶液，勻漿，調(diào)整ph至1.2并過濾；分離取樣品濾液和標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入活性炭生成樣品氧化液和標(biāo)準(zhǔn)氧化液，過濾；取上述兩種濾液分離加入硼

7、酸-乙酸鈉溶液，4冰箱中放置2小時作為空白溶液；再分離另取樣品氧化液和標(biāo)準(zhǔn)氧化液各一份，加入溶液，備用。 取樣品空白和樣品液，在暗室中快速加入鄰苯二胺，振搖混合，于室溫下反應(yīng)35分鐘，用激發(fā)光波長338nm，放射光波長420nm測定熒光強(qiáng)度。同樣辦法測定標(biāo)準(zhǔn)空白液和標(biāo)準(zhǔn)系列的抗壞血酸溶液的熒光強(qiáng)度，用抗壞血酸含量為橫坐標(biāo)，對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度減去標(biāo)準(zhǔn)空白熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算樣品中抗壞血酸的含量。 3)辦法解釋：本辦法最低檢出量為0.022ug/ml，線性范圍520ug/ml。本操作應(yīng)全程避光；溶液因在空氣中色彩逐漸加深，影響顯色，故需臨用前配制；活性炭用量要精確，因其氧化作用

8、是基于其表面吸附的氧舉行界面反應(yīng)，加入不足，氧化不充分；加入過量，對抗壞血酸有吸附作用；影響熒光強(qiáng)度的因素?zé)o數(shù)，為保證測定條件全都，標(biāo)準(zhǔn)曲線最好與樣品平行測定。 (2)2,4-二硝基苯肼法 1)原理：樣品中還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化后生成脫氫抗壞血酸，再與作用，生成紅色脎，其色彩強(qiáng)度與總抗壞血酸含量成正比，通過測定吸光度定量。 2)分析步驟：取適量樣品，加入草酸勻漿，定容，過濾。取一定體積濾液加入活性炭氧化，再加入硫脲混勻。取3支試管分離加入上述氧化液，1支作為空白，另2支加入2,4-二硝基苯肼37保持3小時顯色，取出后冰水冷卻，空白管冷至室溫后同樣加入2,4-二硝基苯肼。向每支試管再滴加85硫酸脫水，室溫放置30分鐘后立刻于波長500nm處測定吸光度值。 3)辦法解釋：本辦法最低檢出量為0.1ug/ml，線性范圍112ug/ml;試驗(yàn)過程應(yīng)當(dāng)避光舉行；加入硫脲可防止抗壞血酸氧化，并利于脎的形成，但硫脲在溶液中終于濃度應(yīng)全都，否則影響測定；冰水中取出30分鐘后立刻測定，否則溶液色彩加深。 2還原型抗壞血酸測定 (1)原理：2,6-二氯靛酚染料在中性或堿性條件下呈藍(lán)色，在酸性溶液中呈粉紅色，被還原后色彩消逝。滴定時，還原型抗壞血酸將染料還原為無色，本身被氧化為脫氫抗壞血酸，盡頭時，稍過量