麻紅止哮合劑對哮喘氣道重塑大鼠血管內(nèi)皮生長因子與堿性成纖維細(xì)

1、麻紅止哮合劑對哮喘氣道重塑大鼠血管內(nèi)皮生長因子與堿性成纖維細(xì)    【摘要】  目的 觀察麻紅止哮合劑對與哮喘氣道重塑密切相關(guān)的血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)與堿性成纖維細(xì)胞生長因子(b-FGF)的影響,探討其治療哮喘慢性持續(xù)期的作用途徑。方法 SD大鼠40只,隨機(jī)分為正常組、造模組、激素組和中藥組。以腹腔注射100 g/L卵蛋白(OVA) 1 mL和10 g/L 的OVA吸入激發(fā)制成支氣管哮喘模型。激素組和中藥組在每次霧化前20 min給予強(qiáng)的松或中藥干預(yù)。空白組和造模組在每次霧化前20 min給予2 mL生理鹽水。用ELISA法測定血清VEG

2、F與b-FGF濃度。結(jié)果 造模組血清VEGF與b-FGF濃度較正常組、激素組和中藥組明顯增加(P<0.05)。正常組、激素組和中藥組組間比較,血清VEGF濃度有顯著差異(P<0.05)；正常組、激素組和中藥組組間比較,血清b-FGF濃度無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)論 麻紅止哮合劑治療哮喘慢性持續(xù)期的作用途徑,可能有一部分是通過降低血清VEGF、b-FGF濃度來延緩支氣管哮喘氣道重塑的形成,具有和強(qiáng)的松相似的效果。 【關(guān)鍵詞】  支氣管哮喘；氣道重塑；血管內(nèi)皮生長因子；堿性成纖維細(xì)胞生長因子；大鼠     Abst

3、ract：Objective To investigate the effect of Mahong decoction on serum VEGF and b-FGF of rat model bronchus asthma airway remolding. Method Forty SD rats randomly divided into four groups： blank group, asthma group, hormone group, Chinese medicine group. The asthmatic model was established by sensiti

4、zation and challenge with ovalbumin, and the rats in the hormone group and Chinese medicine group conferred hormone and Chinese medicine before the challenge. ELISA was used to measure the level of serum VEGF and b-FGF. Results  The serum VEGF and b-FGF in asthma group was higher than in other

5、groups (P<0.05). The level of serum VEGF in blank group, hormone group, Chinese medicine group were different (P<0.05). The level of serum b-FGF in blank group, hormone group, Chinese medicine group were similar (P>0.05). Conclusion Mahong decoction may control the level of serum VEGF and b

6、-FGF of rat model of bronchus asthma airway remolding, which has the similar result with hormone.    Key words：bronchus asthma；airway remolding；VEGF；b-FGF；rat     麻紅止哮合劑是本院呼吸科治療支氣管哮喘的常用方劑,在臨床上取得了較好的療效。我們建立了大鼠支氣管哮喘模型(以下簡稱哮喘模型),以觀察其氣道重塑的改變,通過麻紅止哮合劑對其干預(yù),初步探討其治療哮喘慢性持續(xù)期

7、的作用途徑,觀察其對與哮喘氣道重塑密切相關(guān)的血清血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)與堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor,b-FGF)的影響,為臨床應(yīng)用提供可靠的理論依據(jù)。 1  實(shí)驗(yàn)材料 1.1  動(dòng)物 健康雄性SD大鼠40只,體重(200±10)g,北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供許可證號：SCXK(京)20020003。 1.2  藥物 卵蛋白(ovalbumin,OVA)Grade,

8、購于Sigma公司。滅活百日咳桿菌苗,購于北京生物制品研究所。氫氧化鋁,購于北京市化學(xué)試劑公司,批號20050412。3.5%水合氯醛,批號 20060315,西苑醫(yī)院制劑室提供。強(qiáng)的松,購于天津力生制藥股份有限公司,批號0512056。血清VEGF試劑盒、血清b-FGF試劑盒,購于北京金鑫然醫(yī)藥有限責(zé)任公司,批號20050615。麻紅止哮合劑(炙麻黃、紅景天、白果、生地黃、穿山龍、川芎、黃芩等),中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院制劑室(批號 20060321), 1 mL藥液相當(dāng)于4 g原藥材,再根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行稀釋。 1.3  主要儀器和設(shè)備 402型醫(yī)用霧化器,上海合

9、力醫(yī)療器械廠生產(chǎn)；80-2臺(tái)式離心機(jī),上海醫(yī)療器械廠生產(chǎn)。 1.4  大鼠分組及哮喘模型的建立 參考文獻(xiàn)1-3方法制作哮喘模型。配置成每1 mL含OVA 100 mg、氫氧化鋁100 mg、滅活百日咳桿菌約6×109個(gè)的溶液。第1天每只大鼠腹腔注射以上溶液1 mL,第8天重復(fù)腹腔注射1 mL。第15天將致敏大鼠置于密閉噴霧箱,給予10 g/L的OVA生理鹽水溶液,超聲霧化,每天激發(fā)20 min,連續(xù)14 d,制成支氣管哮喘模型。    40只大鼠隨機(jī)分為4組,每組10只,中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院二級動(dòng)物室飼養(yǎng)設(shè)施合格證號SYX

10、K(京)20030008適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始實(shí)驗(yàn)。正常對照組(正常組)：腹腔注射及霧化均用生理鹽水,每天霧化吸入前20 min用2 mL生理鹽水灌胃；空白造模對照組(造模組)：OVA造模后,每天激發(fā)前20 min用2 mL生理鹽水灌胃；激素對照組(激素組)：OVA造模后,每天激發(fā)前20 min用2 mL強(qiáng)的松溶液灌胃(每日強(qiáng)的松0.3 mg/100 g體重)；中藥實(shí)驗(yàn)組(中藥組)：OVA造模后,每天激發(fā)前20 min用2 mL麻紅止哮合劑灌胃(每日1.8 g/100 g體重)。 1.5  標(biāo)本的采集    各組大鼠在末次激發(fā)后24 h內(nèi)收集標(biāo)本,用3.5

11、%水合氯醛(1 mL/100 g體重)腹腔注射麻醉大鼠,腹主動(dòng)脈取血,靜置1 h后,2 500 r/min離心15 min,分離血清,分別用血清VEGF試劑盒、血清b-FGF試劑盒,采用ELISA方法測定VEGF、b-FGF濃度。 1.6  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS10.0軟件進(jìn)行計(jì)算,數(shù)據(jù)以x±s表示,兩兩比較采用t檢驗(yàn),組間比較采用方差分析。 2  結(jié)果 2.1  體征觀察 正常組大鼠呼吸平穩(wěn),行動(dòng)靈活,反應(yīng)靈敏,體重穩(wěn)定增長,毛色光澤。造模組出現(xiàn)呼吸急促,輕度紫紺,行動(dòng)遲滯或俯伏不動(dòng),反應(yīng)遲

12、鈍,體重減輕,毛色失去光澤。激素組、中藥組大鼠體重增長低于正常組,其它體征變化不明顯。 2.2  ELISA方法測定血清VEGF、b-FGF (見表1)表1  各組大鼠血清VEGF、b-FGF水平變化(略) 注：與模型組比較,P<0.05；與正常組比較,*P<0.05。 3  討論 麻紅止哮合劑是我們應(yīng)用多年的有效方藥,方中麻黃辛、微苦、溫,歸肺、胃、膀胱經(jīng),具有宣肺平喘之功,研究表明,麻黃除具有平喘鎮(zhèn)咳作用外還具有抗急性血瘀證形成作用4；紅景天味甘、澀、性平,歸肺經(jīng),具有清肺止咳之功,研究表明,紅景天能夠解除支

13、氣管平滑肌痙攣,抑制兔缺氧性肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖,增加血液的載氧能力。兩藥共為君藥。穿山龍甘、苦、溫,歸肝、肺經(jīng),具有祛痰通絡(luò)之功；川芎辛、溫,入肝、膽經(jīng),為血中氣藥,能夠行氣開郁、祛風(fēng)燥濕。兩藥共為臣藥,助麻黃、紅景天宣肺定喘,祛痰通絡(luò)。再加白果祛痰止咳平喘、生地黃補(bǔ)肺益腎平喘、黃芩清熱化痰平喘為佐藥,諸藥合用,使肺絡(luò)得通,痰瘀得清,氣機(jī)通暢,喘哮自平。    本研究發(fā)現(xiàn),哮喘造模組的血清VEGF、b-FGF濃度明顯高于正常組、激素組、中藥組,說明支氣管哮喘確實(shí)存在血清VEGF、b-FGF濃度的增高。糖皮質(zhì)激素是最有效的治療哮喘的藥物,有文獻(xiàn)報(bào)道4,糖皮質(zhì)激素能

14、夠降低哮喘大鼠氣道中的VEGF表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)也證實(shí)糖皮質(zhì)激素的干預(yù)能降低血清VEGF、b-FGF濃度。麻紅止哮合劑具有與其相似的效果。 【參考文獻(xiàn)】  1 Temelkovski J,Hogan SP,Shepherd DP,et al.An improved murine model of asthma：selective airway inflammation,epithelial lesions and increased methacholine responsiveness following chronic exposure to aerosolized allergenJ.Thorax,1998,53：849856. 2 鄒 暉,徐永鍵,朱朝霞,等