醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗試驗室工作導則

1、精品文檔附件醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則一、臨床基因擴增檢驗實驗室的設計（一）臨床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設計原則。 原則上 臨床基因擴增檢驗實驗室應當設置以下區(qū)域： 試劑儲存和準 備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。這 4 個區(qū)域 在物理空間上必須是完全相互獨立的，各區(qū)域無論是在空間 上還是在使用中，應當始終處于完全的分隔狀態(tài)，不能有空 氣的直接相通。 根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當合并 。例 如使用實時熒光 PCR儀，擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并； 采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析 儀，則標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。各區(qū) 的功能是：1. 試劑儲

2、存和準備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和 擴增反應混合液的準備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存 和準備。2. 標本制備區(qū)：核酸（RNA DNA提取、貯存及其加入 至擴增反應管。對于涉及臨床樣本的操作，應符合生物安全 二級實驗室防護設備、個人防護和操作規(guī)范的要求。3. 擴增區(qū)：cDNA合成、DNA擴增及檢測。4. 擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增片段的進一步分析測定，如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、測序等。(二) 臨床基因擴增檢驗實驗室的空氣流向。 臨床基因擴增檢驗實驗室的空氣流向可按照試劑儲存和準備區(qū)T標 本制備區(qū)T擴增區(qū)T擴增產(chǎn)物分析區(qū)進行，防止擴增產(chǎn)物順 空氣氣流進入擴增前的區(qū)域?？砂凑諒脑噭﹥Υ?/p>

3、和準備區(qū)T 標本制備區(qū)T擴增區(qū)T擴增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓力遞減 的方式進行?？赏ㄟ^安裝排風扇、負壓排風裝置或其他可行 的方式實現(xiàn)。(三) 工作區(qū)域儀器設備配置標準。1. 試劑儲存和準備區(qū)。(1) 28C和-20 C以下冰箱。( 2)混勻器。(3)微量加樣器(覆蓋 0.2-1000 pl )。( 4)可移動紫外燈(近工作臺面)。( 5)消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加 樣器吸頭。( 6)專用工作服和工作鞋 ( 套)。( 7)專用辦公用品。2. 標本制備區(qū)。(1) 2-8 C冰箱、-20 C或-80 C冰箱。( 2)高速離心機。(3) 混勻器。( 4)水浴箱或加熱模塊。(5)微量加樣器(

4、覆蓋 0.2-1000 pl )。( 6)可移動紫外燈(近工作臺面)。( 7)生物安全柜。( 8)消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加 樣器吸頭(帶濾芯)。( 9)專用工作服和工作鞋 ( 套) 。( 10)專用辦公用品。(11)如需處理大分子 DNA應當具有超聲波水浴儀。3. 擴增區(qū)。( 1 )核酸擴增儀。( 2)微量加樣器(覆蓋 0.2-1000 pl )，(視情況定)( 3)可移動紫外燈(近工作臺面)。( 4)消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加 樣器吸頭(帶濾芯)。( 5)專用工作服和工作鞋。( 6)專用辦公用品。4. 擴增產(chǎn)物分析區(qū)。 視檢驗方法不同而定，基本配置如下：(

5、1)微量加樣器(覆蓋 0.2-1000 pl )。( 2)可移動紫外燈(近工作臺面)（ 3）消耗品：一次性手套、加樣器吸頭（帶濾芯）。（4）專用工作服和工作鞋。（5）專用辦公用品。 上述各區(qū)域儀器設備配備為基本配備，實驗室應當根據(jù) 自己使用的擴增檢測技術或試劑的特點，對儀器設備進行必 要的增減。二、臨床基因擴增檢驗實驗室工作基本原則（ 一 ） 進入各工作區(qū)域應當嚴格按照單一方向進行，即試劑儲存和準備區(qū)T標本制備區(qū)T擴增區(qū)T擴增產(chǎn)物分析區(qū)。（ 二） 各工作區(qū)域必須有明確的標記，不同工作區(qū)域內(nèi)的 設備、物品不得混用。（ 三） 不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏 色）。工作人員離開各工作區(qū)

6、域時，不得將工作服帶出。（四）實驗室的清潔應當按試劑貯存和準備區(qū)T標本制 備區(qū)T擴增區(qū)T擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū) 域應當有其各自的清潔用具以防止交叉污染。（ 五） 工作結(jié)束后，必須立即對工作區(qū)進行清潔。工作區(qū) 的實驗臺表面應當可耐受諸如次氯酸鈉的化學物質(zhì)的消毒 清潔作用。實驗臺表面的紫外照射應當方便有效。由于紫外 照射的距離和能量對去污染的效果非常關鍵，因此可使用可 移動紫外燈（254nm波長），在工作完成后調(diào)至實驗臺上 6090cm內(nèi)照射。由于擴增產(chǎn)物僅幾百或幾十堿基對（bp）,對紫外線損傷不敏感，因此紫外照射擴增片段必須延長照射時 間，最好是照射過夜。（ 六 ） 實驗室的安全

7、工作制度或安全標準操作程序，所有 操作符合實驗室生物安全通用要求（ GB19489-2008）。三、臨床基因擴增檢驗實驗室各區(qū)域工作注意事項（ 一 ） 試劑儲存和準備區(qū)。貯存試劑和用于標本制備的消 耗品等材料應當直接運送至試劑貯存和準備區(qū)，不能經(jīng)過擴 增檢測區(qū)，試劑盒中的陽性對照品及質(zhì)控品不應當保存在該 區(qū)，應當保存在標本處理區(qū)。（ 二 ） 標本制備區(qū)。由于在樣本混合、核酸純化過程中可 能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，可通過在本區(qū)內(nèi)設立正壓條 件，避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的 交叉污染，加入待測核酸后，必須蓋好含反應混合液的反應 管。對具有潛在傳染危險性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)

8、開 蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。（ 三 ） 擴增區(qū)。為避免氣溶膠所致的污染，應當盡量減少 在本區(qū)內(nèi)的走動。必須注意的是，所有經(jīng)過檢測的反應管不 得在此區(qū)域打開。（ 四） 擴增產(chǎn)物分析區(qū)。核酸擴增后產(chǎn)物的分析方法多種 多樣，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法（放射性核素 標記或非放射性核素標記） 、直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、 聚丙烯酰胺凝膠電泳、 Southern 轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì)譜 分析等。本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此必須注意 避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴增產(chǎn)物帶出。在使用 PCR-ELISA 方法檢測擴增產(chǎn)物時，必須使用洗板機洗板，廢 液必須收集至 1 mol/L HCl 中，并且不能在實驗室內(nèi)傾倒