[醫(yī)藥衛(wèi)生]第六章 動(dòng)物細(xì)胞制藥ppt課件

1、第六章 動(dòng)物細(xì)胞工程制藥一、動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)一、動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài) 通常將離體培養(yǎng)的細(xì)胞分為貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、通常將離體培養(yǎng)的細(xì)胞分為貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、兼性貼壁細(xì)胞。兼性貼壁細(xì)胞。1 1、貼壁細(xì)胞：細(xì)胞的生長(zhǎng)必須有給以貼附的支持物、貼壁細(xì)胞：細(xì)胞的生長(zhǎng)必須有給以貼附的支持物外表，細(xì)外表，細(xì) 胞依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附胞依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該外表生長(zhǎng)、增殖。當(dāng)細(xì)胞在該外表生長(zhǎng)因子才能在該外表生長(zhǎng)、增殖。當(dāng)細(xì)胞在該外表生長(zhǎng)后，一般形成兩種形態(tài)：成纖維樣細(xì)胞型、上皮樣細(xì)后，一般形成兩種形態(tài)：成纖維樣細(xì)胞型、上皮樣細(xì)胞型。胞型。2 2、懸浮細(xì)胞：細(xì)胞的生長(zhǎng)不依賴于支持物

2、外表，可、懸浮細(xì)胞：細(xì)胞的生長(zhǎng)不依賴于支持物外表，可在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)。如血液中的淋巴細(xì)胞。在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)。如血液中的淋巴細(xì)胞。3 3、兼性貼壁細(xì)胞：有些細(xì)胞的生長(zhǎng)不嚴(yán)格地以來(lái)于、兼性貼壁細(xì)胞：有些細(xì)胞的生長(zhǎng)不嚴(yán)格地以來(lái)于支持物，它既可以貼附于支持物外表上生長(zhǎng)，也可以支持物，它既可以貼附于支持物外表上生長(zhǎng)，也可以在培養(yǎng)基中呈懸浮狀態(tài)良好地生長(zhǎng)。在培養(yǎng)基中呈懸浮狀態(tài)良好地生長(zhǎng)。第一節(jié)第一節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)與生理特點(diǎn)動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)與生理特點(diǎn)二、動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞的生理特點(diǎn)二、動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞的生理特點(diǎn)1 1、細(xì)胞的分裂周期長(zhǎng)：一般需要、細(xì)胞的分裂周期長(zhǎng)：一般需要12-48h12-48h，隨不

3、同的，隨不同的種屬不同而不同。種屬不同而不同。2 2、細(xì)胞生長(zhǎng)需貼附于基質(zhì)，并有接觸抑制現(xiàn)象。細(xì)、細(xì)胞生長(zhǎng)需貼附于基質(zhì)，并有接觸抑制現(xiàn)象。細(xì)胞生長(zhǎng)需要于基質(zhì)上貼附，伸展后才能生長(zhǎng)繁殖。胞生長(zhǎng)需要于基質(zhì)上貼附，伸展后才能生長(zhǎng)繁殖。3 3、正常二倍體細(xì)胞的壽命是有限的。隨著年齡增大、正常二倍體細(xì)胞的壽命是有限的。隨著年齡增大而細(xì)胞的培養(yǎng)代數(shù)會(huì)減少。而細(xì)胞的培養(yǎng)代數(shù)會(huì)減少。4 4、對(duì)周圍的環(huán)境非常敏感。、對(duì)周圍的環(huán)境非常敏感。5 5、對(duì)培養(yǎng)基的要求高：需要、對(duì)培養(yǎng)基的要求高：需要1212種必需氨基酸、種必需氨基酸、8 8種以種以上的維生素、多種無(wú)機(jī)鹽和微量元素、葡萄糖、多種上的維生素、多種無(wú)機(jī)鹽和微

4、量元素、葡萄糖、多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子、貼壁因子等才能生長(zhǎng)。細(xì)胞生長(zhǎng)因子、貼壁因子等才能生長(zhǎng)。6 6、蛋白質(zhì)的合成途徑和修飾功能與細(xì)菌不同。、蛋白質(zhì)的合成途徑和修飾功能與細(xì)菌不同。 第二節(jié)第二節(jié) 消費(fèi)用動(dòng)物細(xì)胞的獲得消費(fèi)用動(dòng)物細(xì)胞的獲得一、消費(fèi)用動(dòng)物細(xì)胞的獲得一、消費(fèi)用動(dòng)物細(xì)胞的獲得 什么樣的細(xì)胞才能允許用以消費(fèi)人用的藥品，什么樣的細(xì)胞才能允許用以消費(fèi)人用的藥品，這一直是一個(gè)引起人們爭(zhēng)論的熱點(diǎn)這一直是一個(gè)引起人們爭(zhēng)論的熱點(diǎn)。 用于消費(fèi)的動(dòng)物細(xì)胞有：原代細(xì)胞、已建立的用于消費(fèi)的動(dòng)物細(xì)胞有：原代細(xì)胞、已建立的二倍體細(xì)胞系、可無(wú)限期傳代的轉(zhuǎn)化細(xì)胞系、以及二倍體細(xì)胞系、可無(wú)限期傳代的轉(zhuǎn)化細(xì)胞系、以及用這些細(xì)

5、胞進(jìn)展交融和重組的工程細(xì)胞。用這些細(xì)胞進(jìn)展交融和重組的工程細(xì)胞。 1、原代細(xì)胞：直接取動(dòng)物組織、器官，經(jīng)過(guò)粉、原代細(xì)胞：直接取動(dòng)物組織、器官，經(jīng)過(guò)粉碎、消化而獲得的細(xì)胞懸液。碎、消化而獲得的細(xì)胞懸液。 2、二倍體細(xì)胞系：原代細(xì)胞經(jīng)過(guò)傳代、挑選、二倍體細(xì)胞系：原代細(xì)胞經(jīng)過(guò)傳代、挑選、克隆，而從多種細(xì)胞成分的組織中挑選并純化出某克隆，而從多種細(xì)胞成分的組織中挑選并純化出某種具有一定特征的細(xì)胞株。種具有一定特征的細(xì)胞株。 二倍體細(xì)胞株仍具有正常細(xì)胞的特點(diǎn)：二倍體細(xì)胞株仍具有正常細(xì)胞的特點(diǎn)： A、2n染色體核型染色體核型 B、具有明顯的貼壁依賴和接觸抑制、具有明顯的貼壁依賴和接觸抑制 C、只有有限的增

6、殖才能、一般可連續(xù)傳代培、只有有限的增殖才能、一般可連續(xù)傳代培養(yǎng)養(yǎng)50代。代。 D、無(wú)致瘤性、無(wú)致瘤性 3轉(zhuǎn)化細(xì)胞系：是通過(guò)某個(gè)轉(zhuǎn)化過(guò)程形成的，常常由轉(zhuǎn)化細(xì)胞系：是通過(guò)某個(gè)轉(zhuǎn)化過(guò)程形成的，常常由于染色體的斷裂變成了異倍體，而失去了正常細(xì)胞于染色體的斷裂變成了異倍體，而失去了正常細(xì)胞的特點(diǎn)，獲得了無(wú)限增殖的才能。的特點(diǎn)，獲得了無(wú)限增殖的才能。二、基因工程細(xì)胞的構(gòu)建和挑選二、基因工程細(xì)胞的構(gòu)建和挑選 1 1、真核細(xì)胞基因表達(dá)載體的構(gòu)建、真核細(xì)胞基因表達(dá)載體的構(gòu)建 目前一般選擇的載體有：目前一般選擇的載體有：1 1病毒載體：牛痘病毒、腺病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒和桿狀病毒等。病毒載體：牛痘病毒、腺病毒、反轉(zhuǎn)錄

7、病毒和桿狀病毒等。 牛痘病毒：構(gòu)建多價(jià)疫苗；牛痘病毒：構(gòu)建多價(jià)疫苗； 腺病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒：用于基因治療；腺病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒：用于基因治療； 桿狀病毒：作載體用于外源基因表達(dá)。桿狀病毒：作載體用于外源基因表達(dá)。 桿狀病毒作為載體的優(yōu)點(diǎn)：桿狀病毒作為載體的優(yōu)點(diǎn)： 是雙是雙DNADNA，易于重組；，易于重組； 插入插入7-87-8個(gè)個(gè)bpbp的的DNADNA不會(huì)影響正常正常病毒粒子的形成；不會(huì)影響正常正常病毒粒子的形成； 多角體蛋白質(zhì)和病毒粒子的形成無(wú)直接關(guān)系，因此用外源基因更多角體蛋白質(zhì)和病毒粒子的形成無(wú)直接關(guān)系，因此用外源基因更換多角體蛋白基因，仍能形成有感染力的病毒粒子；換多角體蛋白基因，仍能

8、形成有感染力的病毒粒子； 多角體蛋白基因有強(qiáng)啟動(dòng)子，產(chǎn)生的蛋白質(zhì)可占全部蛋白質(zhì)的多角體蛋白基因有強(qiáng)啟動(dòng)子，產(chǎn)生的蛋白質(zhì)可占全部蛋白質(zhì)的20-20-30%30%； 用顯微鏡可以看到多角體，可以此為標(biāo)記物來(lái)挑選陽(yáng)性克?。挥蔑@微鏡可以看到多角體，可以此為標(biāo)記物來(lái)挑選陽(yáng)性克?。?假如用家蠶桿狀病毒，可以在家蠶體內(nèi)直接表達(dá)外源基因。假如用家蠶桿狀病毒，可以在家蠶體內(nèi)直接表達(dá)外源基因。2質(zhì)粒載體質(zhì)粒載體 常用穿梭質(zhì)粒載體：能在細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)都能擴(kuò)增。常用穿梭質(zhì)粒載體：能在細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)都能擴(kuò)增。2、基因載體的導(dǎo)入和高效表達(dá)工程細(xì)胞株的挑選、基因載體的導(dǎo)入和高效表達(dá)工程細(xì)胞株的挑選DNADNA導(dǎo)

9、入動(dòng)物細(xì)胞的常用方法導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞的常用方法高效表達(dá)工程細(xì)胞株的挑選：高效表達(dá)工程細(xì)胞株的挑選：依靠構(gòu)建載體內(nèi)的選擇標(biāo)記采用相應(yīng)的挑選系統(tǒng)：依靠構(gòu)建載體內(nèi)的選擇標(biāo)記采用相應(yīng)的挑選系統(tǒng)：HATHAT選選擇系統(tǒng)：挑選擇系統(tǒng)：挑選tktk+ +、h hgprtgprt+ +的轉(zhuǎn)化細(xì)胞；的轉(zhuǎn)化細(xì)胞；G418G418geneticingeneticin選擇系統(tǒng)：挑選選擇系統(tǒng)：挑選neoneor r的轉(zhuǎn)化細(xì)胞；的轉(zhuǎn)化細(xì)胞；MTXMTX選擇系統(tǒng)：挑選選擇系統(tǒng)：挑選dhfrdhfr+ +的轉(zhuǎn)化細(xì)胞。的轉(zhuǎn)化細(xì)胞。對(duì)選出的細(xì)胞要進(jìn)展克隆和亞克隆使其純化對(duì)選出的細(xì)胞要進(jìn)展克隆和亞克隆使其純化在多數(shù)情況下要利用其擴(kuò)增系

10、統(tǒng)，不斷增加其基因拷貝數(shù)，在多數(shù)情況下要利用其擴(kuò)增系統(tǒng)，不斷增加其基因拷貝數(shù)，從而獲得能高效表達(dá)的穩(wěn)定的工程細(xì)胞株。從而獲得能高效表達(dá)的穩(wěn)定的工程細(xì)胞株。三、常用消費(fèi)用動(dòng)物細(xì)胞的特性自學(xué)三、常用消費(fèi)用動(dòng)物細(xì)胞的特性自學(xué) 四、細(xì)胞庫(kù)的建立四、細(xì)胞庫(kù)的建立 除原代細(xì)胞外，其他的細(xì)胞株、細(xì)胞系，無(wú)論除原代細(xì)胞外，其他的細(xì)胞株、細(xì)胞系，無(wú)論是二倍體細(xì)胞、轉(zhuǎn)化細(xì)胞、交融細(xì)胞還是經(jīng)重組的工是二倍體細(xì)胞、轉(zhuǎn)化細(xì)胞、交融細(xì)胞還是經(jīng)重組的工程細(xì)胞，一旦建立后都要建立細(xì)胞庫(kù)加以保存。按照程細(xì)胞，一旦建立后都要建立細(xì)胞庫(kù)加以保存。按照我國(guó)和美國(guó)我國(guó)和美國(guó)FDA的規(guī)定，用于消費(fèi)的工程細(xì)胞必須建的規(guī)定，用于消費(fèi)的工程細(xì)

11、胞必須建立立2個(gè)細(xì)胞庫(kù)：原始細(xì)胞庫(kù)個(gè)細(xì)胞庫(kù)：原始細(xì)胞庫(kù)master cell bank,MCB和消費(fèi)用細(xì)胞庫(kù)和消費(fèi)用細(xì)胞庫(kù)manufacturers working cell bank ,MWCB或叫工作細(xì)胞庫(kù)或叫工作細(xì)胞庫(kù)working cell bank ,WCB。貯藏細(xì)胞的檔案資料：貯藏細(xì)胞的檔案資料：細(xì)胞系歷史：來(lái)源、動(dòng)物的年齡、性別、細(xì)胞細(xì)胞系歷史：來(lái)源、動(dòng)物的年齡、性別、細(xì)胞別離方法、所用培養(yǎng)材料來(lái)源于人的還需該人別離方法、所用培養(yǎng)材料來(lái)源于人的還需該人的病史的病史細(xì)胞的特性：細(xì)胞的特性： 形態(tài)、生長(zhǎng)特性形態(tài)、生長(zhǎng)特性增倍時(shí)間、分增倍時(shí)間、分種批；種源的特性：核型、同功酶、細(xì)胞抗原

12、、種批；種源的特性：核型、同功酶、細(xì)胞抗原、特異的標(biāo)記染色體；用于消費(fèi)用的重組細(xì)胞：載特異的標(biāo)記染色體；用于消費(fèi)用的重組細(xì)胞：載體構(gòu)建的資料、基因拷貝數(shù)、表達(dá)產(chǎn)物的性質(zhì)、體構(gòu)建的資料、基因拷貝數(shù)、表達(dá)產(chǎn)物的性質(zhì)、產(chǎn)量及其穩(wěn)定性。產(chǎn)量及其穩(wěn)定性。各種有害因子的檢查結(jié)果：細(xì)菌、真菌、支原各種有害因子的檢查結(jié)果：細(xì)菌、真菌、支原體、各種病毒，包括反轉(zhuǎn)錄病毒。體、各種病毒，包括反轉(zhuǎn)錄病毒。MWCBMWCB細(xì)胞還需確定其最高使用的傳代數(shù)。細(xì)胞還需確定其最高使用的傳代數(shù)。一、動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件一、動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件1 1、器材的清洗和消毒、器材的清洗和消毒1 1器材的清洗：用過(guò)的器材需要經(jīng)過(guò)浸泡、刷洗、器

13、材的清洗：用過(guò)的器材需要經(jīng)過(guò)浸泡、刷洗、泡酸、沖洗泡酸、沖洗4 4個(gè)步驟。用個(gè)步驟。用3%3%磷酸三鈉日夜浸泡過(guò)夜。磷酸三鈉日夜浸泡過(guò)夜。新玻璃器材必須先泡酸。新玻璃器材必須先泡酸。2 2器材的消毒滅菌：所有培養(yǎng)用的器材和液體必器材的消毒滅菌：所有培養(yǎng)用的器材和液體必須進(jìn)展嚴(yán)格的消毒滅菌處理，方法有：物理消毒須進(jìn)展嚴(yán)格的消毒滅菌處理，方法有：物理消毒-紫外線、干熱、濕熱、過(guò)濾；化學(xué)法紫外線、干熱、濕熱、過(guò)濾；化學(xué)法-化學(xué)化學(xué)消毒劑和抗生素。第三節(jié)第三節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基2 2、水質(zhì)：由于動(dòng)物細(xì)胞對(duì)微量的有毒元素、過(guò)多的金、水質(zhì)：由于動(dòng)物細(xì)胞對(duì)微量的有毒元素、

14、過(guò)多的金屬離子、微生物的污染很敏感。所以細(xì)胞培養(yǎng)用的水屬離子、微生物的污染很敏感。所以細(xì)胞培養(yǎng)用的水必須經(jīng)過(guò)特殊處理，才能使用。方法有：整餾、離子必須經(jīng)過(guò)特殊處理，才能使用。方法有：整餾、離子交換、電滲析、反浸透、中空纖維過(guò)濾。交換、電滲析、反浸透、中空纖維過(guò)濾。3 3、pHpH：最適：最適pH7.27.4pH7.27.4，常在培養(yǎng)基中參加緩沖系統(tǒng)：，常在培養(yǎng)基中參加緩沖系統(tǒng)：Na2HPO4/NaH2PO4Na2HPO4/NaH2PO4，NaHCO3/CO2NaHCO3/CO2，Tricine-glycineTricine-glycine等。等。4 4、浸透壓：理想浸透壓為、浸透壓：理想浸透壓

15、為290-300mOsm/kg290-300mOsm/kg，一般用，一般用NaClNaCl的增減來(lái)調(diào)節(jié)。每增加或減少的增減來(lái)調(diào)節(jié)。每增加或減少1mg/ml1mg/ml，可使培養(yǎng)，可使培養(yǎng)基的浸透壓增加或減少基的浸透壓增加或減少32mOsm/kg32mOsm/kg。5 5、溫度：哺乳動(dòng)物最正確溫度為、溫度：哺乳動(dòng)物最正確溫度為37370.50.5，昆蟲(chóng)為，昆蟲(chóng)為2727。6 6、空氣：必須給以足夠的氧氣，一般低于空氣中氧的、空氣：必須給以足夠的氧氣，一般低于空氣中氧的飽和值的飽和值的60%60%。二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基的種類和組成二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基的種類和組成 動(dòng)物細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基的要求較高，且隨著細(xì)胞

16、的種屬不同動(dòng)物細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基的要求較高，且隨著細(xì)胞的種屬不同而差異很大。常常需要花很多的時(shí)間和精力去對(duì)個(gè)別的細(xì)胞而差異很大。常常需要花很多的時(shí)間和精力去對(duì)個(gè)別的細(xì)胞系進(jìn)展研究，以便配置適宜于這一細(xì)胞特殊需要的培養(yǎng)基。系進(jìn)展研究，以便配置適宜于這一細(xì)胞特殊需要的培養(yǎng)基。用動(dòng)物細(xì)胞制藥之所以本錢高，培養(yǎng)基的復(fù)雜和昂貴是其主用動(dòng)物細(xì)胞制藥之所以本錢高，培養(yǎng)基的復(fù)雜和昂貴是其主要原因。培養(yǎng)基包括要原因。培養(yǎng)基包括1 1、天然培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基 指在細(xì)胞培養(yǎng)的早期使用，如血漿凝塊、血清、淋巴液、指在細(xì)胞培養(yǎng)的早期使用，如血漿凝塊、血清、淋巴液、胚胎浸液、羊水、腹水。胚胎浸液、羊水、腹水。2 2、合成培養(yǎng)基

17、、合成培養(yǎng)基 采用成清楚確的化學(xué)試劑配成的培養(yǎng)基。采用成清楚確的化學(xué)試劑配成的培養(yǎng)基。優(yōu)點(diǎn)：成清楚確，組分穩(wěn)定，可大量消費(fèi)供給。優(yōu)點(diǎn)：成清楚確，組分穩(wěn)定，可大量消費(fèi)供給。 合成培養(yǎng)基的組成：合成培養(yǎng)基的組成：氨基酸類：氨基酸類：1212種必須氨基酸。它們是：精氨酸、胱氨酸、組種必須氨基酸。它們是：精氨酸、胱氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、奔丙氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、奔丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸。氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸。維生素：維生素： A A、脂溶性的：、脂溶性的：VAVA、VDVD、VEVE、VKVK。 B B、水溶性的：、水溶性

18、的：VBVB族、族、VCVC等等糖類：糖類：C C源，是能量來(lái)源。源，是能量來(lái)源。 葡萄糖、谷氨酰胺。使用葡萄糖時(shí)，要參加丙酮酸鈉；有葡萄糖、谷氨酰胺。使用葡萄糖時(shí)，要參加丙酮酸鈉；有些還要參加核糖和脫氧核糖、醋酸鈉。些還要參加核糖和脫氧核糖、醋酸鈉。無(wú)機(jī)鹽：主要是保持浸透壓、緩沖無(wú)機(jī)鹽：主要是保持浸透壓、緩沖pHpH的變化，并積極參與細(xì)的變化，并積極參與細(xì)胞代謝。一般參加胞代謝。一般參加NaCl,KCl,MgSO4,CaCl2,NaH2PO4,NaCl,KCl,MgSO4,CaCl2,NaH2PO4,NaHCO3NaHCO3等。還有等。還有FeSO4,CuSO4,ZnSO4FeSO4,CuS

19、O4,ZnSO4等等 其他成分：合成核酸的前體物質(zhì)，如腺苷、鳥(niǎo)苷、其他成分：合成核酸的前體物質(zhì)，如腺苷、鳥(niǎo)苷、胞苷、尿苷、胸苷。還要參加動(dòng)物血清，如胞苷、尿苷、胸苷。還要參加動(dòng)物血清，如5-10%5-10%的的小牛血清，作用機(jī)理不明?？赡苤饕菫榱耍盒∨Ｑ?，作用機(jī)理不明?？赡苤饕菫榱耍篈 A 提供細(xì)胞生長(zhǎng)增殖所需要的各種生長(zhǎng)因子和激素；提供細(xì)胞生長(zhǎng)增殖所需要的各種生長(zhǎng)因子和激素；B B 提供有利于細(xì)胞貼壁所需要的貼附因子和伸展因提供有利于細(xì)胞貼壁所需要的貼附因子和伸展因子；子；C C 提供可識(shí)別金屬、激素、維生素、脂類的結(jié)合蛋提供可識(shí)別金屬、激素、維生素、脂類的結(jié)合蛋白；白；D D 提供細(xì)

20、胞生長(zhǎng)所必需的脂肪酸和微量元素；提供細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的脂肪酸和微量元素；E E 提供良好的提供良好的pHpH緩沖系統(tǒng)。緩沖系統(tǒng)。 3 3、無(wú)血清培養(yǎng)基、無(wú)血清培養(yǎng)基優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：A、進(jìn)步細(xì)胞培養(yǎng)的可重復(fù)性防止了由于血清批次之間的差異；B、防止了由于血清帶來(lái)的病毒、真菌、支原體微生物等的污染；C、供給充足、穩(wěn)定；D、產(chǎn)品易于純化；E、防止了血清中某些因素對(duì)有些細(xì)胞的毒性；F、減少了血清中某些蛋白對(duì)生物測(cè)定的干擾，便于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析。無(wú)血清培養(yǎng)基中一般需要參加：無(wú)血清培養(yǎng)基中一般需要參加：A、激素和生長(zhǎng)因子；、激素和生長(zhǎng)因子；B、結(jié)合蛋白；、結(jié)合蛋白；C、貼附和伸展因子；、貼附和伸展因子；D、其他利于

21、細(xì)胞生長(zhǎng)的因子和元素：如消除氧自、其他利于細(xì)胞生長(zhǎng)的因子和元素：如消除氧自由基損害的谷胱苷肽，微量元素如硒等。由基損害的谷胱苷肽，微量元素如硒等。 一、動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法一、動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法 根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的種類分為原代細(xì)胞培培養(yǎng)和傳根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的種類分為原代細(xì)胞培培養(yǎng)和傳代細(xì)胞培養(yǎng)，也可以根據(jù)培養(yǎng)容器和方式的不同分代細(xì)胞培養(yǎng)，也可以根據(jù)培養(yǎng)容器和方式的不同分為靜止培養(yǎng)、旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)、攪拌培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、為靜止培養(yǎng)、旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)、攪拌培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、中空纖維培養(yǎng)、固體床和流化床培養(yǎng)等。中空纖維培養(yǎng)、固體床和流化床培養(yǎng)等。1 1、懸浮培養(yǎng)：、懸浮培養(yǎng)： 適用于一切非貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)，也適應(yīng)

22、于適用于一切非貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)，也適應(yīng)于兼性貼壁細(xì)胞。兼性貼壁細(xì)胞。 優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便。培養(yǎng)條件比較均一，傳質(zhì)和優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便。培養(yǎng)條件比較均一，傳質(zhì)和傳氧較好，容易擴(kuò)大培養(yǎng)規(guī)模。傳氧較好，容易擴(kuò)大培養(yǎng)規(guī)模。 缺點(diǎn)：由于細(xì)胞體積小，很難采取灌流培養(yǎng)，缺點(diǎn)：由于細(xì)胞體積小，很難采取灌流培養(yǎng)，因此細(xì)胞密度一般比較低。因此細(xì)胞密度一般比較低。第四節(jié)第四節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的方式和操作方法動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的方式和操作方法2 2、貼壁培養(yǎng)、貼壁培養(yǎng) 適用于貼壁細(xì)胞和兼性貼壁細(xì)胞。適用于貼壁細(xì)胞和兼性貼壁細(xì)胞。 優(yōu)點(diǎn)：適應(yīng)于細(xì)胞種類廣，因?yàn)橄M(fèi)中使用的大多數(shù)細(xì)優(yōu)點(diǎn)：適應(yīng)于細(xì)胞種類廣，因?yàn)橄M(fèi)中使用的大多數(shù)細(xì)胞都是貼壁

23、細(xì)胞，較易采用灌流培養(yǎng)，細(xì)胞密度高。胞都是貼壁細(xì)胞，較易采用灌流培養(yǎng)，細(xì)胞密度高。 缺點(diǎn)：操作比較費(fèi)事，需要適宜的貼壁材料和足夠的面缺點(diǎn)：操作比較費(fèi)事，需要適宜的貼壁材料和足夠的面積，培養(yǎng)條件不易單一，傳質(zhì)和傳氧較差。不便進(jìn)展擴(kuò)大培積，培養(yǎng)條件不易單一，傳質(zhì)和傳氧較差。不便進(jìn)展擴(kuò)大培養(yǎng)。養(yǎng)。 貼壁培養(yǎng)在傳代和擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)需要用酶將細(xì)胞從基質(zhì)上貼壁培養(yǎng)在傳代和擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)需要用酶將細(xì)胞從基質(zhì)上消化下來(lái)。常用的消化物有：胰酶、消化下來(lái)。常用的消化物有：胰酶、EDTAEDTA、胰酶、胰酶檸檬酸鹽、檸檬酸鹽、胰酶胰酶-EDTA-EDTA結(jié)合使用。其他如膠原酶、鏈霉蛋白酶、木瓜酶結(jié)合使用。其他如膠原酶、鏈霉

24、蛋白酶、木瓜酶等。他們的作用主要是使細(xì)胞間質(zhì)和一些促使細(xì)胞貼壁的蛋等。他們的作用主要是使細(xì)胞間質(zhì)和一些促使細(xì)胞貼壁的蛋白因子水解，使細(xì)胞從基質(zhì)別離成單個(gè)細(xì)胞。白因子水解，使細(xì)胞從基質(zhì)別離成單個(gè)細(xì)胞。 3 3、貼壁、貼壁懸浮培養(yǎng)也稱假懸浮培養(yǎng)懸浮培養(yǎng)也稱假懸浮培養(yǎng) 是將貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)二者結(jié)合，優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，形成更是將貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)二者結(jié)合，優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，形成更理想、更適應(yīng)于工業(yè)化消費(fèi)的培養(yǎng)方法。理想、更適應(yīng)于工業(yè)化消費(fèi)的培養(yǎng)方法。1 1微載體培養(yǎng)微載體培養(yǎng) 采用葡聚糖采用葡聚糖SephadexA50SephadexA50微顆小粒培養(yǎng)貼壁細(xì)胞。微顆小粒培養(yǎng)貼壁細(xì)胞。 優(yōu)點(diǎn)：可創(chuàng)造相當(dāng)大的貼附面積，

25、供細(xì)胞貼附生長(zhǎng)增殖。優(yōu)點(diǎn)：可創(chuàng)造相當(dāng)大的貼附面積，供細(xì)胞貼附生長(zhǎng)增殖。由于載體體積小，比重輕，可經(jīng)輕度攪拌即可微小顆粒攜帶由于載體體積小，比重輕，可經(jīng)輕度攪拌即可微小顆粒攜帶細(xì)胞自由地懸浮在培養(yǎng)基內(nèi)，充分發(fā)揮懸浮培養(yǎng)的一切優(yōu)點(diǎn)。細(xì)胞自由地懸浮在培養(yǎng)基內(nèi)，充分發(fā)揮懸浮培養(yǎng)的一切優(yōu)點(diǎn)。 葡葡聚聚糖糖凝凝膠膠專專用用柱柱 理想的微載體應(yīng)該具備的條件：理想的微載體應(yīng)該具備的條件：A A、微載體外表性質(zhì)與細(xì)胞有良好的相容性，適于細(xì)胞附著、伸、微載體外表性質(zhì)與細(xì)胞有良好的相容性，適于細(xì)胞附著、伸展和增殖；展和增殖；B B、微載體的材料無(wú)毒性。對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞無(wú)毒性，還要不會(huì)產(chǎn)生影、微載體的材料無(wú)毒性。對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞

26、無(wú)毒性，還要不會(huì)產(chǎn)生影響產(chǎn)品和人體安康的有害因子；響產(chǎn)品和人體安康的有害因子；C C、微載體的材料是惰性的，不與培養(yǎng)基成分發(fā)生化學(xué)反響，也、微載體的材料是惰性的，不與培養(yǎng)基成分發(fā)生化學(xué)反響，也不會(huì)吸收培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分；不會(huì)吸收培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分；D D、微載體的比重在、微載體的比重在1.0301.045g/ml1.0301.045g/ml，使載體在低速攪拌下可，使載體在低速攪拌下可以懸浮，而靜止時(shí)又可很快沉淀，便于換液和搜集；以懸浮，而靜止時(shí)又可很快沉淀，便于換液和搜集；E E、粒徑在、粒徑在60-250m60-250m溶脹后之間為好，且要盡可能均一，溶脹后之間為好，且要盡可能均一，差異不大

27、于差異不大于20m20m。有利于細(xì)胞均勻分布在各微載體外表；。有利于細(xì)胞均勻分布在各微載體外表；F F、具有良好的光學(xué)透明性，適于在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞在載、具有良好的光學(xué)透明性，適于在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞在載體上的生長(zhǎng)情況；體上的生長(zhǎng)情況；G G、基質(zhì)是軟的，防止在攪拌中載體互相摩擦而損傷細(xì)胞；、基質(zhì)是軟的，防止在攪拌中載體互相摩擦而損傷細(xì)胞；H H、可耐、可耐120120高溫。便于采用高壓蒸汽滅菌；高溫。便于采用高壓蒸汽滅菌；I I、經(jīng)簡(jiǎn)單的適當(dāng)處理后，可以反復(fù)屢次使用；、經(jīng)簡(jiǎn)單的適當(dāng)處理后，可以反復(fù)屢次使用；J J、原料充分。制作簡(jiǎn)便，廉價(jià)。、原料充分。制作簡(jiǎn)便，廉價(jià)。 目前微載體的材料

28、有兩類：目前微載體的材料有兩類： 一類在載體中參加鈦，增加比重，適用于流化床反響器。一類在載體中參加鈦，增加比重，適用于流化床反響器。 一類不加鈦，比重較輕，可與固體微載體一樣，用于攪一類不加鈦，比重較輕，可與固體微載體一樣，用于攪拌罐式生物反響器或氣升式生物反響器。拌罐式生物反響器或氣升式生物反響器。2 2包埋和微囊培養(yǎng)包埋和微囊培養(yǎng) 細(xì)胞不是貼附在載體外表。而是包裹在或包埋在凝膠載細(xì)胞不是貼附在載體外表。而是包裹在或包埋在凝膠載體或微囊內(nèi)。假如包埋的凝膠載體較大，就稱為巨載體培養(yǎng)。體或微囊內(nèi)。假如包埋的凝膠載體較大，就稱為巨載體培養(yǎng)。 微囊培養(yǎng)是在包埋培養(yǎng)的根底上衍生而來(lái)的，即將包埋微囊培

29、養(yǎng)是在包埋培養(yǎng)的根底上衍生而來(lái)的，即將包埋的顆粒經(jīng)液化處理而成為微囊。的顆粒經(jīng)液化處理而成為微囊。 包埋材料的類型：包埋材料的類型：A A、人工合成的高分子聚合物：、人工合成的高分子聚合物： 聚丙烯酰胺、環(huán)氧樹(shù)脂、聚氨基甲酸酯、聚乙烯醇等。聚丙烯酰胺、環(huán)氧樹(shù)脂、聚氨基甲酸酯、聚乙烯醇等。B B、糖類：、糖類： 纖維素、瓊脂、瓊脂糖、纖維素、瓊脂、瓊脂糖、KK卡拉膠、海藻酸鈣、脫乙酰卡拉膠、海藻酸鈣、脫乙酰幾丁質(zhì)等。幾丁質(zhì)等。C C、蛋白質(zhì)：、蛋白質(zhì)： 膠原、明膠、纖維蛋白等。膠原、明膠、纖維蛋白等。 這些材料是靠溫度的變化來(lái)變相的，如海藻酸鈣，在鈉鹽這些材料是靠溫度的變化來(lái)變相的，如海藻酸鈣，

30、在鈉鹽時(shí)是液態(tài)。形成鈣鹽時(shí)那么形成凝膠。時(shí)是液態(tài)。形成鈣鹽時(shí)那么形成凝膠。 凝膠的制備常常是在形成凝膠后，再用另外一種電荷相反凝膠的制備常常是在形成凝膠后，再用另外一種電荷相反的材料與之作用，使載體外形成一層聚合膜，然后再使膜內(nèi)的材料與之作用，使載體外形成一層聚合膜，然后再使膜內(nèi)的載體液化。的載體液化。 包埋和微囊培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：包埋和微囊培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：A A、包埋或包裹在載體或微囊內(nèi)的細(xì)胞可獲得保護(hù)，防止了、包埋或包裹在載體或微囊內(nèi)的細(xì)胞可獲得保護(hù)，防止了剪切力的損害；剪切力的損害；B B、可獲得較高的細(xì)胞密度。一般在、可獲得較高的細(xì)胞密度。一般在107108107108細(xì)胞細(xì)胞/ml/ml；C

31、C、控制微囊膜的孔徑，可使產(chǎn)物濃縮在微囊內(nèi)，有利于下、控制微囊膜的孔徑，可使產(chǎn)物濃縮在微囊內(nèi)，有利于下游產(chǎn)物的純化；游產(chǎn)物的純化；D D、可采用多種上午反響器進(jìn)展大規(guī)模培養(yǎng)，如、可采用多種上午反響器進(jìn)展大規(guī)模培養(yǎng)，如攪拌罐式生攪拌罐式生物反響器物反響器、氣升式生物反響器氣升式生物反響器。用包埋法，當(dāng)顆粒直徑較大。用包埋法，當(dāng)顆粒直徑較大時(shí)，可采用時(shí)，可采用固定床式生物反響器固定床式生物反響器。 3 3結(jié)團(tuán)培養(yǎng)結(jié)團(tuán)培養(yǎng) 利用貼壁細(xì)胞有結(jié)團(tuán)的特點(diǎn)，用攪拌反響器和罐流利用貼壁細(xì)胞有結(jié)團(tuán)的特點(diǎn)，用攪拌反響器和罐流培養(yǎng)的方式獲得高密度的細(xì)胞，創(chuàng)始了細(xì)胞結(jié)團(tuán)培養(yǎng)的培養(yǎng)的方式獲得高密度的細(xì)胞，創(chuàng)始了細(xì)胞結(jié)團(tuán)

32、培養(yǎng)的新方法。新方法。 其本質(zhì)是用細(xì)胞本身作為基質(zhì)，互相貼附后，再用其本質(zhì)是用細(xì)胞本身作為基質(zhì)，互相貼附后，再用懸浮的方法進(jìn)展培養(yǎng)，也是一種貼附懸浮的方法進(jìn)展培養(yǎng)，也是一種貼附懸浮培養(yǎng)。為了懸浮培養(yǎng)。為了加速細(xì)胞結(jié)團(tuán)，往往參加一些直接較小的微粒，促使細(xì)加速細(xì)胞結(jié)團(tuán)，往往參加一些直接較小的微粒，促使細(xì)胞先附著其上，再互相附著。胞先附著其上，再互相附著。 優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，節(jié)省了用于微載體的本錢。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，節(jié)省了用于微載體的本錢。 二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的操作方式二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的操作方式1 1、分批式操作、分批式操作 有兩種情況：有兩種情況： 一是將細(xì)胞和培養(yǎng)基一次性參加反響器內(nèi)進(jìn)展培養(yǎng)，使細(xì)一是

33、將細(xì)胞和培養(yǎng)基一次性參加反響器內(nèi)進(jìn)展培養(yǎng)，使細(xì)胞增殖到一定密度，產(chǎn)物到達(dá)一定量后將培養(yǎng)基和細(xì)胞一并取胞增殖到一定密度，產(chǎn)物到達(dá)一定量后將培養(yǎng)基和細(xì)胞一并取出。出。 另一種方式是先將細(xì)胞和培養(yǎng)基參加反響器，待細(xì)胞生長(zhǎng)另一種方式是先將細(xì)胞和培養(yǎng)基參加反響器，待細(xì)胞生長(zhǎng)至一定密度后，向反響器內(nèi)參加誘導(dǎo)劑或病毒，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間至一定密度后，向反響器內(nèi)參加誘導(dǎo)劑或病毒，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間作用后，取出反響物。作用后，取出反響物。2 2、半連續(xù)式操作、半連續(xù)式操作 將細(xì)胞和培養(yǎng)基一起參加反響器后，在細(xì)胞增長(zhǎng)和產(chǎn)物形將細(xì)胞和培養(yǎng)基一起參加反響器后，在細(xì)胞增長(zhǎng)和產(chǎn)物形成過(guò)程中，每間隔一段時(shí)間，取出部分培養(yǎng)物，然后補(bǔ)充同

34、樣成過(guò)程中，每間隔一段時(shí)間，取出部分培養(yǎng)物，然后補(bǔ)充同樣數(shù)量的新穎培養(yǎng)基，或另加新穎載體，繼續(xù)培養(yǎng)。該方法被廣數(shù)量的新穎培養(yǎng)基，或另加新穎載體，繼續(xù)培養(yǎng)。該方法被廣泛采用，優(yōu)點(diǎn)是：泛采用，優(yōu)點(diǎn)是： 操作簡(jiǎn)單、消費(fèi)效率高，可長(zhǎng)期進(jìn)展消費(fèi)，反復(fù)收獲產(chǎn)品，操作簡(jiǎn)單、消費(fèi)效率高，可長(zhǎng)期進(jìn)展消費(fèi)，反復(fù)收獲產(chǎn)品，能使細(xì)胞密度和產(chǎn)品產(chǎn)量一直保持在較高的程度能使細(xì)胞密度和產(chǎn)品產(chǎn)量一直保持在較高的程度 3 3、灌流式操作、灌流式操作 將細(xì)胞和培養(yǎng)基一起參加反響器后，在細(xì)胞增將細(xì)胞和培養(yǎng)基一起參加反響器后，在細(xì)胞增長(zhǎng)和產(chǎn)物形成過(guò)程中，不斷將條件培養(yǎng)基取出，同時(shí)長(zhǎng)和產(chǎn)物形成過(guò)程中，不斷將條件培養(yǎng)基取出，同時(shí)不斷補(bǔ)充

35、新穎培養(yǎng)基。它與連續(xù)式操作不同之處是取不斷補(bǔ)充新穎培養(yǎng)基。它與連續(xù)式操作不同之處是取出部分條件培養(yǎng)基時(shí)，絕大部分細(xì)胞仍保存在反響器出部分條件培養(yǎng)基時(shí)，絕大部分細(xì)胞仍保存在反響器內(nèi)，而連續(xù)式培養(yǎng)那么同時(shí)也取出了部分細(xì)胞。內(nèi)，而連續(xù)式培養(yǎng)那么同時(shí)也取出了部分細(xì)胞。 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：A、細(xì)胞可處在較穩(wěn)定的良好環(huán)境中，培養(yǎng)條件較好，、細(xì)胞可處在較穩(wěn)定的良好環(huán)境中，培養(yǎng)條件較好，有害代謝廢物濃度低；有害代謝廢物濃度低；B、可極大地進(jìn)步細(xì)胞密度，使產(chǎn)量大大進(jìn)步；、可極大地進(jìn)步細(xì)胞密度，使產(chǎn)量大大進(jìn)步；C、產(chǎn)品在罐內(nèi)停留時(shí)間縮短可及時(shí)收容在低溫下保、產(chǎn)品在罐內(nèi)停留時(shí)間縮短可及時(shí)收容在低溫下保存，有利于產(chǎn)品質(zhì)量的

36、進(jìn)步；存，有利于產(chǎn)品質(zhì)量的進(jìn)步；D、培養(yǎng)基的比消耗率較低，且產(chǎn)量質(zhì)量進(jìn)步，消費(fèi)、培養(yǎng)基的比消耗率較低，且產(chǎn)量質(zhì)量進(jìn)步，消費(fèi)本錢明顯降低。本錢明顯降低。一、理想的動(dòng)物細(xì)胞反響器必須具備的要求一、理想的動(dòng)物細(xì)胞反響器必須具備的要求1 1、制造生物反響器所采用的一切材料，尤其是與培養(yǎng)基、細(xì)、制造生物反響器所采用的一切材料，尤其是與培養(yǎng)基、細(xì)胞直接接觸的材料必須無(wú)毒性；胞直接接觸的材料必須無(wú)毒性；2 2、生物反響器的構(gòu)造必須使之具有良好的傳熱、傳質(zhì)和混合、生物反響器的構(gòu)造必須使之具有良好的傳熱、傳質(zhì)和混合性能；性能；3 3、密封性能良好，可防止一切外來(lái)微生物的污染；、密封性能良好，可防止一切外來(lái)微生物

37、的污染；4 4、對(duì)培養(yǎng)環(huán)境中多種物理化學(xué)參數(shù)能自動(dòng)檢測(cè)和調(diào)控；、對(duì)培養(yǎng)環(huán)境中多種物理化學(xué)參數(shù)能自動(dòng)檢測(cè)和調(diào)控；5 5、可長(zhǎng)期連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)；、可長(zhǎng)期連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)；6 6、容器內(nèi)外表要求光滑，無(wú)死角，以減少細(xì)胞或微生物的沉、容器內(nèi)外表要求光滑，無(wú)死角，以減少細(xì)胞或微生物的沉積；積；7 7、拆裝、連接和清潔方便，能耐高壓蒸汽消毒，便于操作維、拆裝、連接和清潔方便，能耐高壓蒸汽消毒，便于操作維修；修；8 8、設(shè)備本錢低、設(shè)備本錢低 。第五節(jié)第五節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞生物反響器及其檢測(cè)控制系統(tǒng)動(dòng)物細(xì)胞生物反響器及其檢測(cè)控制系統(tǒng)二、動(dòng)物細(xì)胞生物反響器的類型二、動(dòng)物細(xì)胞生物反響器的類型1 1、攪拌罐式反響器：是借鑒細(xì)菌發(fā)酵罐

38、改造而來(lái)，是最早的動(dòng)、攪拌罐式反響器：是借鑒細(xì)菌發(fā)酵罐改造而來(lái)，是最早的動(dòng)物細(xì)胞生物反響器。特點(diǎn)：能供氧、攪拌速度慢、采用無(wú)氣泡系物細(xì)胞生物反響器。特點(diǎn)：能供氧、攪拌速度慢、采用無(wú)氣泡系統(tǒng)、配置有進(jìn)出料系統(tǒng)。統(tǒng)、配置有進(jìn)出料系統(tǒng)。2 2、氣升式生物反響器、氣升式生物反響器 特點(diǎn)：氣體從罐底的導(dǎo)流管進(jìn)入，使液體形成循環(huán)流。具有特點(diǎn)：氣體從罐底的導(dǎo)流管進(jìn)入，使液體形成循環(huán)流。具有剪切力小、混合均勻、氧和營(yíng)養(yǎng)的傳遞好、利于密封等優(yōu)點(diǎn)。剪切力小、混合均勻、氧和營(yíng)養(yǎng)的傳遞好、利于密封等優(yōu)點(diǎn)。3 3、中空纖維式生物反響器、中空纖維式生物反響器 該反響器由數(shù)百至數(shù)千根中空纖維集束組成。材料為聚砜或該反響器由

39、數(shù)百至數(shù)千根中空纖維集束組成。材料為聚砜或丙烯共聚物。丙烯共聚物。4 4、透析袋或透析膜式生物反響器、透析袋或透析膜式生物反響器 主要是可以將分子量小而對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和產(chǎn)物的產(chǎn)生有抑制作主要是可以將分子量小而對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和產(chǎn)物的產(chǎn)生有抑制作用的乳酸、氨等透析或?yàn)V掉。用的乳酸、氨等透析或?yàn)V掉。5 5、固定床或流化床式生物反響器、固定床或流化床式生物反響器 特點(diǎn)：構(gòu)造簡(jiǎn)單，添裝材料是對(duì)細(xì)胞無(wú)毒、又有利于細(xì)胞貼特點(diǎn)：構(gòu)造簡(jiǎn)單，添裝材料是對(duì)細(xì)胞無(wú)毒、又有利于細(xì)胞貼附的材料?，F(xiàn)用于大量消費(fèi)疫苗和基因工程產(chǎn)品。附的材料?，F(xiàn)用于大量消費(fèi)疫苗和基因工程產(chǎn)品。 一、改進(jìn)表達(dá)載體，進(jìn)步表達(dá)程度和產(chǎn)量一、改進(jìn)表達(dá)載體，進(jìn)步表達(dá)程度和產(chǎn)量1 1、采用雜交瘤技術(shù)，進(jìn)步細(xì)胞表達(dá)量。、采用雜交瘤技術(shù)，進(jìn)步細(xì)胞表達(dá)量。2 2、采用更強(qiáng)的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子。、采用更強(qiáng)的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子。3 3、更好地利用擴(kuò)增系統(tǒng)或?qū)ふ腋弑磉_(dá)位點(diǎn)。、更好地利用擴(kuò)增系統(tǒng)或?qū)ふ腋弑磉_(dá)位