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1、第三章 消毒與滅菌_總結(jié)介紹幾個(gè)基本概念1滅菌:應(yīng)用物理或化學(xué)方法殺滅物體中所有的病原微生物、非病原微生物以及芽胞和霉菌孢子的方法。2消毒:應(yīng)用物理或化學(xué)方法殺滅物體中的病原微生物,而對(duì)非病原微生物及芽胞,孢子不要求全部殺死。3防腐:應(yīng)用物理或化學(xué)方法阻止和抑制微生物的生長(zhǎng)繁殖的方法。 4無(wú)菌操作法:防止或杜絕一切細(xì)菌進(jìn)入動(dòng)物體或其他物體的方法。5濾過(guò)除菌:液體或氣體通過(guò)濾過(guò)作用除去其中所存在的細(xì)菌。一般用0.22微米濾膜,但不能除去病毒,霉形體及L 型細(xì)菌。 第一節(jié) 物理因素 溫度 干燥 滲透壓 輻射 過(guò)濾 其他物理因素 一、溫度(一)高溫對(duì)微生物的影響 高溫對(duì)微生物有明顯的致死作用,其主要
2、原因是高溫能使菌體蛋白質(zhì)變性或凝固,酶失去活性,核酸結(jié)構(gòu)遭到破壞等,從而導(dǎo)致其死亡。 多數(shù)細(xì)菌,酵母菌和霉菌的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和病毒在50-65 º10 min可以致死。 細(xì)菌芽孢,在121 º下20min 才能致死, 同種微生物老齡菌比幼菌耐熱。 干熱滅菌(dry heat sterilization 烘烤滅菌法;實(shí)驗(yàn)室用干燥箱烘。一般是1602小時(shí)即可達(dá)到滅菌目的。 濕熱滅菌(mosist heatsterilization在同溫度下,濕熱滅菌的效果比干熱滅菌好;因?yàn)椋篴 比干熱更易使菌體蛋白凝固。 b 濕熱穿透力強(qiáng);c 濕熱可以釋放大量潛熱。 濕熱滅菌法 A. 高壓蒸汽滅菌法
3、 B. 煮沸消毒法 C. 流通蒸汽消毒法 D. 間歇蒸汽滅菌法 E. 巴氏消毒法 A 、高壓蒸汽滅菌法是濕熱滅菌中最好的方法,通常1.05kg/cm2,的壓力下面(此時(shí)溫度121º)處理1530min 。要排冷空氣,否則會(huì)形成假壓力,雖然壓力達(dá)到要求,溫度卻達(dá)不到相應(yīng)溫度,而影響滅菌效果。B 、煮沸消毒法物品在水中煮沸 15min ,可殺死所有營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢。 在水中加入的a2CO3 或的石碳酸效果更好。此法適合注射器和解剖用具的消毒。C 、間歇滅菌法(fractional sterilization)a 是用常壓蒸汽反復(fù)幾次進(jìn)行滅菌的方法。b 主要用于不宜高壓滅菌的培養(yǎng)基,不
4、耐熱的藥物和營(yíng)養(yǎng)物等c 方法是將待滅菌物品置于蒸鍋內(nèi)加熱到沸騰維持15-30min 殺死營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞,取出冷卻后在37恒溫培養(yǎng)24小時(shí),使芽孢萌發(fā),再用此法滅菌,反復(fù)三次,即可達(dá)到滅菌目的。D 、巴氏消毒法(pasteurizationa 是食品(牛奶)釀造(啤酒)工業(yè)中常用的方法。b 具體做法是6365處理30min 或7172度處理15 s,速冷卻至10下。 c 這樣即可殺死病原微生物。又不致?lián)p壞營(yíng)養(yǎng),可保留食品飲料原有風(fēng)味。 d 為節(jié)省時(shí)間,又達(dá)到巴氏消毒的效果,現(xiàn)多用高溫瞬時(shí)滅菌132下1-2 s。(二)低溫對(duì)微生物的影響 常溫冰箱保存細(xì)菌和病毒:(細(xì)菌40;病毒2070)。 低溫保存食品
5、應(yīng)迅速冷凍,否則擾亂細(xì)胞膠體狀態(tài),使水分形成結(jié)晶,冰結(jié)晶還能機(jī)械地刺傷菌體胞膜,胞壁。 冷凍真空干燥法:采取迅速冷凍和抽真空除水原理;如凍干疫苗和凍干菌種。二、干燥水分是微生物的正常生命活動(dòng)必不可少的。干燥會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞失水而造成代謝停止以致死亡。微生物的種類,環(huán)境條件,干燥的程度等均影響對(duì)微生物殺滅的效果。休眠孢子抗干燥能力也很強(qiáng),在干燥條件下可長(zhǎng)期不死,這一特性已用于菌種保藏,如用砂土管來(lái)保藏有孢子的菌種。在日常生活中也常用烘干、曬干和熏干等方法來(lái)保存食物。三、滲透壓細(xì)菌處于低滲液中,細(xì)胞會(huì)吸水膨脹乃至破裂,稱胞漿壓出。細(xì)胞處于高滲液中會(huì)脫水,引起細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞壁分離,稱質(zhì)壁分離,導(dǎo)致死亡。 等
6、滲溶液對(duì)微生物生長(zhǎng)有利 四、輻射輻射是能量通過(guò)空間傳遞的一種物理現(xiàn)象。 可見(jiàn)光線肉眼可見(jiàn)的光線是在紅外線和紫外線之間,波長(zhǎng)為400800nm 。 日光利用日光暴曬是常用的簡(jiǎn)易消毒方法,許多細(xì)菌繁殖體在日光直射下2h 很易死亡。 紫外線:波長(zhǎng)200300m 的紫外線具有殺菌作用殺菌機(jī)理:干擾DNA 的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄 特點(diǎn):紫外線穿透力較弱應(yīng)用范圍:不耐熱物品的表面消毒電離輻射:包括高速電子、x 射線和 射線。殺菌機(jī)理:產(chǎn)生游離基, 破壞DNA 。應(yīng)用范圍:一次性醫(yī)用塑料制品的消毒,食品的消毒不破壞其營(yíng)養(yǎng)成分。 五、濾過(guò)除菌法 濾菌器:用物理阻留的方法,將液體或空氣中的 細(xì)菌除去, 以達(dá)到除菌目的。含
7、有微細(xì)小孔<0.22微米, 只允許液體或氣體通過(guò),而大于孔徑的細(xì)菌等顆粒不能通過(guò)。 適用范圍:血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌。六 、其他物理因素 超聲波超聲波是由超聲波發(fā)生器產(chǎn)生的,對(duì)細(xì)胞有破壞作用,能使大多數(shù)細(xì)胞裂解死亡。 微波微波是一種波長(zhǎng)短而頻率較高的電磁波。微波對(duì)微生物的殺菌作用,主要是由于微生物在微波電磁場(chǎng)作用下,吸收微波的能量而產(chǎn)生熱效應(yīng)所致。第二節(jié) 化學(xué)因素 各種消毒劑可按其作用水平分為3類:(1)高效消毒劑:可以殺滅一切微生物,包括細(xì)菌繁殖體、細(xì)菌芽孢、結(jié)核桿菌、真菌和病毒等。這類消毒劑又稱為滅菌劑。 如甲醛、戊二醛、過(guò)氧乙酸和環(huán)氧乙烷等。 (2)中效消毒劑 除細(xì)菌芽
8、孢外,可殺滅各種微生物。如乙醇、酚、含氯消毒劑和碘消毒劑等。(3)低效消毒劑 可殺滅細(xì)菌繁殖體、真菌和有囊膜病毒,但不能殺滅細(xì)菌芽孢、結(jié)核桿菌和無(wú)囊膜病毒。如新潔爾滅、洗必太等。 一、常用消毒劑的實(shí)用性能 見(jiàn)下表消毒劑類別 名稱 濃度(% 用途重金屬鹽紅汞 2 皮膚、粘膜、小創(chuàng)面消毒 硫柳汞 0.01 生物制品防腐氧化劑高錳酸鉀 0.1 皮膚、尿道、水果、蔬菜消毒 過(guò)氧化氫 3 皮膚、粘膜、創(chuàng)傷消毒 過(guò)氧乙酸0.20.5 塑料、玻璃、人造纖維消毒 鹵素類 碘液 2.5 皮膚消毒醇類 乙醇 7075 皮膚、體溫計(jì)消毒酚類石炭酸 35 地面、器皿表面和排泄物消毒 來(lái)蘇爾35 同上、也常用于手及皮膚
9、消毒表面活性劑 新潔爾滅 0.1 手術(shù)器械消毒 酸堿類 生石灰 1020 排泄物、地面消毒 染料龍膽紫24表淺創(chuàng)傷消毒二、影響消毒劑作用的因素 消毒劑的性質(zhì) 消毒劑的濃度與作用時(shí)間 微生物的類型及數(shù)量 環(huán)境中有機(jī)物的存在 三、選擇適當(dāng)?shù)南緞?殺菌譜廣、有效濃度低、作用快。 性質(zhì)穩(wěn)定、易溶于水、不易受酸堿影響。 無(wú)腐蝕性、無(wú)毒;不易殘留。 價(jià)格低、便于運(yùn)輸,可長(zhǎng)期保存。第三節(jié) 生物因素 共生:兩種或多種生物生活在一起時(shí),彼此并不損害而相互有利,稱為共生。 寄生:一種生物從另一種生物獲得所需的營(yíng)養(yǎng),賴以為生,并對(duì)后者呈現(xiàn)傷害作用者,稱為寄生。 拮抗:當(dāng)兩種微生物生活在一起時(shí),一種微生物能抑制或殺
10、死另一種微生物,此現(xiàn)象稱為拮抗。 協(xié)同:兩種或多種生物在同一環(huán)境中,互相協(xié)助,共同完成某種作用,而為其任何一種所不能單獨(dú)達(dá)到。一、抗生素與細(xì)菌素 (一)抗生素是某些微生物在代謝過(guò)程中產(chǎn)生的能抑制或殺滅其他微生物的一種化學(xué)物質(zhì)。它主要來(lái)源于放線菌、某些真菌和細(xì)菌等。 抗生素的作用機(jī)理: a. 干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成 b. 影響細(xì)胞膜的通透性 c. 阻礙菌體蛋白質(zhì)的合成 d. 改變核酸代謝 (二)細(xì)菌素大腸桿菌產(chǎn)生的細(xì)菌素稱大腸菌素;葡萄球菌產(chǎn)生的稱葡萄球菌素;霍亂弧菌產(chǎn)生的稱弧菌素等,每類細(xì)菌素又可分為不同的型別;細(xì)菌素僅對(duì)近緣細(xì)菌有作用。 1928年A.Fleming 發(fā)現(xiàn)青霉素澳大利亞病理學(xué)家
11、霍華德. 弗羅里與弗萊明1940提純出青霉素。 共同獲得1945年諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng). 三、 噬菌體病毒種類很多,根據(jù)病毒寄生的對(duì)象來(lái)分,有植物病毒、動(dòng)物病毒和微生物病毒。 噬菌體:是病毒中的一種,一般把侵染細(xì)菌、放線菌的病毒叫噬菌體。(把侵染真菌的病毒叫噬真菌體)噬菌體在自然界廣泛存在,在1995年發(fā)表的ICTV 的病毒分類與命名第六次報(bào)告中共報(bào)道了4000余種,分別劃歸為49個(gè)病毒科.據(jù)Bradley(1967歸納,噬菌體共有六類形態(tài)。 (一)噬菌體的形態(tài)結(jié)構(gòu)與組成1、組成:主要由蛋白質(zhì)和核酸組成。2、基本形態(tài):蝌蚪形、微球形和纖絲形。3、蝌蚪形噬菌體的構(gòu)造 以大腸桿菌T4噬菌體為例頭部:廿面體對(duì)稱結(jié)構(gòu),由蛋白質(zhì)衣殼構(gòu)成,內(nèi)含一條DNA 。 頸部:薄盤狀,附頸須。尾鞘:長(zhǎng)95nm, 衣殼粒螺旋對(duì)稱;可伸縮。 尾髓:中空,DNA 可由此進(jìn)入細(xì)胞?;? 六角形盤狀物,其上有刺突、尾絲。 刺突: 有吸附功能。尾絲: 有識(shí)別吸附功能。 大腸桿菌T4噬菌體構(gòu)造 (二)、噬菌體(phage的繁殖噬菌體并沒(méi)有個(gè)體的生長(zhǎng)過(guò)程,而只有其基本成分的合成和裝配,即首先將各個(gè)部件合成出來(lái),然后裝配,所以一般將噬菌體的
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