細胞內(nèi)酸性蛋白和堿性蛋白的原位顯示 , 細胞內(nèi)DNA和RNA的原位顯示

1、第二次實驗第二次實驗 細胞內(nèi)酸性蛋白和堿性蛋白的原位顯示細胞內(nèi)酸性蛋白和堿性蛋白的原位顯示 細胞內(nèi)細胞內(nèi)DNADNA和和RNARNA的原位顯示的原位顯示 實驗目的實驗目的 1.1.掌握酸、堿性蛋白以及掌握酸、堿性蛋白以及DNADNA和和RNARNA在細胞內(nèi)的在細胞內(nèi)的分布情況；分布情況；2.2.了解酸、堿性蛋白以及了解酸、堿性蛋白以及DNADNA和和RNARNA顯色反應的顯色反應的原理和方法。原理和方法。 實驗原理實驗原理 由于不同蛋白質(zhì)分子所帶酸性基團和堿性由于不同蛋白質(zhì)分子所帶酸性基團和堿性 基團數(shù)量不同，生理條件下，整個蛋白質(zhì)基團數(shù)量不同，生理條件下，整個蛋白質(zhì) 帶負電荷多則為酸性蛋白，

2、帶正電荷多則帶負電荷多則為酸性蛋白，帶正電荷多則 為堿性蛋白?？捎貌煌瑸閴A性蛋白?？捎貌煌琾HpH值的固綠染色，值的固綠染色， 即可顯示細胞內(nèi)酸性蛋白或堿性蛋白。即可顯示細胞內(nèi)酸性蛋白或堿性蛋白。 核酸的存在會影響實驗結果核酸的存在會影響實驗結果 用三氯醋酸處理用三氯醋酸處理 2.2. 甲基綠甲基綠和和派洛寧派洛寧是互不混淆、互不影響的是互不混淆、互不影響的兩種染色劑，由于其自身分子結構的特點，兩種染色劑，由于其自身分子結構的特點，它們可與兩種聚合程度不同的核酸競爭性它們可與兩種聚合程度不同的核酸競爭性結合，從而同時顯示細胞內(nèi)結合，從而同時顯示細胞內(nèi)DNADNA和和RNARNA的分的分布部位。

3、布部位。 實驗用品實驗用品 95%乙醇乙醇 三氯醋酸三氯醋酸 甲基綠甲基綠-派洛寧派洛寧 0.1%酸性固綠酸性固綠 0.1%堿性固綠堿性固綠 操作流程操作流程 暴露暴露 胸腔胸腔氯仿麻醉氯仿麻醉取心臟血取心臟血晾干晾干 制制 血涂片血涂片固定固定 20min洗滌洗滌 90 三氯醋酸三氯醋酸95%乙醇，乙醇，5-10min2張張1張張 (3張張) 0.1%酸性固綠酸性固綠 5min 0.1%堿性固綠堿性固綠 45min 晾干晾干鏡檢鏡檢洗滌洗滌晾晾干干洗洗滌滌甲基綠甲基綠-派洛寧派洛寧10min染染色色洗滌洗滌1min 兩人一組，每組制兩人一組，每組制3 3張血涂片張血涂片 其中只有其中只有2

4、2張血涂片需經(jīng)過三氯醋酸處張血涂片需經(jīng)過三氯醋酸處理（為什么？）理（為什么？） 注意事項注意事項 結果觀察結果觀察 酸性蛋白酸性蛋白堿性蛋白堿性蛋白DNADNA和和RNARNA的顯示的顯示 請回答細胞化學法在本次實驗中的應用。請回答細胞化學法在本次實驗中的應用。 通過本次實驗學到哪些基本操作技能？通過本次實驗學到哪些基本操作技能？ 請描述本次實驗的顯微觀察結果。請描述本次實驗的顯微觀察結果。 作業(yè)作業(yè) 評價本次實驗的得失評價本次實驗的得失 本次實驗需要鞏固的概念本次實驗需要鞏固的概念 細胞化學法細胞化學法 本次實驗需要掌握的實驗技能本次實驗需要掌握的實驗技能 1. 1. 血涂片制作方法血涂片制

5、作方法 2. 2. 染色的規(guī)范操作方法染色的規(guī)范操作方法 3. 3. 洗滌方法（流水沖洗）洗滌方法（流水沖洗） 4. 4. 正確的鏡檢方法（顯微觀察技術）正確的鏡檢方法（顯微觀察技術） 小結小結 1. 1. 完成實驗報告；完成實驗報告；2. 2. 將動物尸體送到實驗室門口動物尸體簍；將動物尸體送到實驗室門口動物尸體簍；3. 3. 清洗并檢查自己桌面上的器材（彎盤、鑷子等是否齊全）；清洗并檢查自己桌面上的器材（彎盤、鑷子等是否齊全）；4. 4. 做好顯微鏡使用登記，蓋好防塵罩；做好顯微鏡使用登記，蓋好防塵罩；5. 5. 將用過的載玻片刷洗干凈后放入回收盆中將用過的載玻片刷洗干凈后放入回收盆中; ;6. 6. 蓋玻片、吸水紙等扔到垃圾桶中。蓋玻片、吸水紙等扔到垃圾桶中。 （棄入水槽中會引起下水道堵塞）（棄入水槽中會引起下水道堵塞）鏡檢后作業(yè)與工作值日生工作：值日生工作： 1 1、檢查顯微鏡、檢查顯微鏡 2 2