康敏元專利唾液乳酸桿菌PM-A0006治療兒童過(guò)敏性疾病臨床試驗(yàn)

1、唾液乳酸桿菌PM-AOOO加低聚果糖治療兒童中重度特異性皮炎濕疹的有效性和安全性優(yōu)于單純低聚果糖：雙盲隨機(jī)臨床試驗(yàn)K.-G. Wu,臺(tái)北榮軍醫(yī)院兒科T.-H. Li花蓮三軍總醫(yī)院兒科H.-J. Peng_國(guó)立陽(yáng)明大學(xué)醫(yī)學(xué)研究與教育部摘要背景：部分益生菌和益生元可改善兒童特異性皮炎（AD），如果兩者協(xié)同作用效果 可能增強(qiáng)。目的：比較唾液乳酸桿菌+低聚果糖和低聚果糖在中重度特異性皮炎兒童中的作 用。方法：共納入60例2-14歲中重度特異性皮炎兒童（SCORAD25）隨機(jī)分為2組， 每組30例，均給予膠囊1顆/次，2次/天，共8周。實(shí)驗(yàn)組予唾液乳酸桿菌+低聚果 糖（合生元組）；對(duì)照組予低聚果糖（益生

2、元組）。治療前及治療后4周、8周、10周分別記錄SCORA分。同時(shí)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果及AD臺(tái)療方法。結(jié)果：兩組年齡、性別、病程等及臨床特點(diǎn)、SCORA評(píng)分無(wú)顯著性差異，治療8周時(shí)治療組 SCORA分（27.4 12.7）明顯低于對(duì)照組（36.3 4.9） （P = 0.022）。10 周時(shí)2組亦有顯著性差異。8周時(shí)治療組AE嚴(yán)重度明顯低于對(duì)照組（P =0.013）,52% 治療組兒童為輕度AD而對(duì)照組為30% （P = 0.024）。治療組兒童藥物治療頻率 和嗜酸細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白水平在8周時(shí)明顯低于4周時(shí)。結(jié)論：唾液乳酸桿菌+低聚果糖在治療中重度AD寸效果好于單獨(dú)使用低聚果糖。 但需要隨訪確定長(zhǎng)期效

3、果。兒童AC發(fā)病率近十余年來(lái)明顯增加，尤其在西方國(guó)家，在亞洲如臺(tái)灣隨著經(jīng)濟(jì)水 平的增長(zhǎng)和都市化進(jìn)程，這種趨勢(shì)也愈來(lái)愈明顯。根據(jù)衛(wèi)生學(xué)說(shuō)，隨著環(huán)境和生 活條件的改變，免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)機(jī)制和/或反應(yīng)受到影響，尤其在生命早期，免疫 系統(tǒng)變化可導(dǎo)致對(duì)抗原刺激的免疫反應(yīng)異常，從而導(dǎo)致特應(yīng)性疾?。òˋD的 增加。進(jìn)來(lái)的研究顯示腸道微生態(tài)的變化導(dǎo)致免疫系統(tǒng)發(fā)育異常及出現(xiàn)特應(yīng)性疾病的 傾向。已有研究調(diào)查是否能通過(guò)改善腸道微生態(tài)， 預(yù)防或改善AD兩種途徑：（1） 益生元經(jīng)食物攝入；（2）攝入腸道正常細(xì)菌如益生菌。益生元如乳果糖、長(zhǎng)鏈 低聚果糖是不能被消化的飲食成分，可選擇性刺激一種或多種腸道菌群的生長(zhǎng)和 /或活性

4、。在飲食中添加益生元對(duì)抑制特應(yīng)性疾病有部分效果，但無(wú)肯定的結(jié)果。根據(jù)聯(lián)合國(guó)糧食及農(nóng)業(yè)組織意見，益生菌是活菌，如果攝入適當(dāng)?shù)牧繉?duì)宿主健康 有益。益生菌尤其是乳桿菌可預(yù)防或治療兒童AD但存在爭(zhēng)議，因這一作用受菌 種的影響。最近提出第三種方案即聯(lián)合使用益生元與益生菌，即所謂合生元。雖然僅有數(shù)個(gè)研究報(bào)道，但在治療AD寸合生元較單用益生元更好，在改善特應(yīng)性疾 病時(shí)較安慰劑更好。而在一項(xiàng)隨機(jī)、對(duì)照研究中，AD嬰兒接受含混有短雙歧桿菌 M-16V和乳果糖/低聚果糖的深度水解配方奶或不含合生元的深度水解配方奶共 12周，合生元未改變嬰兒腸道菌群，亦未改變 AD重程度（與對(duì)照組相比較）。 所以益生菌與益生元可能

5、有協(xié)同作用但需要特異性菌株。該特異性菌株有免疫刺 激特性，該特性可見于唾液乳桿菌，但既往未用于兒童 AD勺研究。因此本研究的目的在于了解唾液乳桿菌和低聚果糖聯(lián)合使用較單用低聚果糖是否對(duì)中重度aol童更有效。方法：研究對(duì)象及方法納入60例2-14歲在臺(tái)北榮軍醫(yī)院就診兒童，符合 Hanifin and Rajka 關(guān)于AD勺診 斷標(biāo)準(zhǔn)，有中重度AD（SCORA分25）,且AD癥狀持續(xù)至少4天。應(yīng)用計(jì)算機(jī)產(chǎn) 生的隨機(jī)序列（ProMD Biotech Co., Ltd）將納入對(duì)象隨機(jī)分成2組，治療組（合 生元組）和對(duì)照組（益生元組）各30例。首先根據(jù)性別、年齡和中重度AD診斷進(jìn) 行分成層。為確保一致性

6、，同一個(gè)調(diào)查者（K.G.W.）（并不清楚分組）納入病人， 并在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的0周（納入時(shí)）、4周、8周、10周進(jìn)行SCORA分。對(duì)于合生元組，每一個(gè)膠囊包括475mg氐聚果糖+25m活益生菌2 X 109 （CFU） /L 唾液乳桿菌，對(duì)照組每個(gè)膠囊中含有475mg氐聚果糖+25m（玉米淀粉，每個(gè)納入 者口服包含合生元或益生元的膠囊1顆/次，2次/天，共8周。兩種膠囊在外形、 氣味、口感上一致，將膠囊分裝后根據(jù)隨機(jī)分類表直接下發(fā)給病人。當(dāng)所有數(shù)據(jù)分析完成后解密分組。供應(yīng)商定期檢查膠囊內(nèi)細(xì)菌活力，告知父母將剩余的膠囊 交予研究小組，同時(shí)實(shí)驗(yàn)期間不給孩子服用其他益生菌。孩子未預(yù)選，在研究的前2周中，給

7、每個(gè)納入者抽血并提取血清，發(fā)現(xiàn)所有納入者對(duì)六種常見過(guò)敏原中 至少一種敏感（sIgE 0.35 kU/L）。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，維持AD患兒常規(guī)治療，包括 局部使用糖皮質(zhì)激素和神經(jīng)鈣蛋白抑制劑。戊酸二氟米松軟膏（0.1%）（每g含1mgr氟米松戊酸鹽）（Intendis Manufacturing S.p.A., Via E. Schering, Milan,Italy），神經(jīng)鈣蛋白抑制劑（1%比美莫司軟膏）用于面部和腹股溝區(qū)域皮損。 兩組研究期間使用糖皮質(zhì)激素量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。接受全身使用糖皮質(zhì)激素（如口服激素）或SCORA分W 25者推出實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)臺(tái)灣榮軍醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，了解患兒病史的

8、家長(zhǎng)或監(jiān)護(hù)人簽署書 面同意書。乳酸桿菌和安慰劑膠囊的準(zhǔn)備我們使用唾液乳桿菌PM-A0006其可調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，由臺(tái)灣Bioresourse Collection and Research Center,食品工業(yè)研究發(fā)展協(xié)會(huì)，Ministry of Economic Affairs 提供（.tw/index.do ）。唾液乳桿菌 PM-A0006經(jīng)IHTD 系統(tǒng) in terfero n （IFN） High Through put Detecti ng System; P roMD Biotech Co., Ltd由正 常健康人群腸道中分離出來(lái)，具

9、有益生菌特性，高密度培養(yǎng)系統(tǒng)用于產(chǎn)生包11含10 CFU /g唾液乳桿菌PM-A0006凍干粉，每一個(gè)膠囊（500 mg）包含 2 X 109 CFU唾液乳桿菌+低聚果糖。益生元膠囊僅有低聚果糖。所有膠囊由 P roMDBiotech Co.儲(chǔ)存于 4 C 環(huán)境中，該公司為臺(tái)南 Current Good Manufactur-ing Practices （cGMP） facilities。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)菌活力在室溫下可保持至少 3個(gè)月。 小鼠（FR-AC00235）的急性口服毒性實(shí)驗(yàn)由臺(tái)北 Develo pment Cen ter forBiotechnology進(jìn)行，使用唾液乳桿菌PM-A

10、000最大劑量5000 mg/kg喂養(yǎng)小鼠14天 未顯示副作用。效果評(píng)估在試驗(yàn)前1周收集納入者一般資料。本研究的主要結(jié)論為臨床有效性，并以試驗(yàn) 0周、4周、8周及10周（即試驗(yàn)結(jié)束 后2周）的SCORA分進(jìn)行評(píng)判。SCORA分為體表受累面積（0%-100%，將紅 斑、水腫/丘疹、滲出/結(jié)痂、表皮脫落、苔蘚化、皮膚干燥分別評(píng)分，計(jì)算總數(shù) （每項(xiàng)0-3;總分18）。主觀癥狀包括瘙癢和睡眠障礙（病人自身通過(guò)直觀模擬標(biāo) 度尺進(jìn)行評(píng)分，每項(xiàng)0-10分，總分20）。SCORA分為0-103分，AD重度則根 據(jù) SCORAD分分為輕（ 25）、中（25-0）、重度（50）。生活質(zhì)量作為繼發(fā)變化以13項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)

11、行評(píng)估，包括皮膚癥狀（瘙癢或水腫，特定 時(shí)間或季節(jié)出現(xiàn)的皮膚瘙癢，顏面部及肘窩、腘窩處濕疹樣表現(xiàn)，進(jìn)食某種食物 后瘙癢及不適）；活動(dòng)受限（不能進(jìn)行一般運(yùn)動(dòng)、活動(dòng)）；睡眠障礙（因瘙癢難 以入睡，因瘙癢夜間醒來(lái)，難以維持睡眠）；白天活動(dòng)障礙（影響日常工作、學(xué) 習(xí)，不能集中精力工作或?qū)W習(xí)，影響社會(huì)活動(dòng)，日常生活受累）；局部藥物使用（局部使用糖皮質(zhì)激素和神經(jīng)鈣蛋白抑制劑）。上述每一項(xiàng)均進(jìn)行評(píng)分：0,不存在；1,極少出現(xiàn)（3次/月）；2,有時(shí)出現(xiàn)；3,經(jīng)常出現(xiàn)；4,每天出現(xiàn)。 每一項(xiàng)由父母在日記中每日記錄，在實(shí)驗(yàn)的 0周、4周和8周由調(diào)查者檢查。 為確定治療結(jié)束是否A復(fù)發(fā)，治療結(jié)束后2周即第10周患兒復(fù)

12、診進(jìn)行SCORAD分 及實(shí)驗(yàn)室檢查。實(shí)驗(yàn)室檢查實(shí)驗(yàn)前抽血，應(yīng)用 Pharmacia CAP系統(tǒng)（Pharmacia Diagnostics AB, Uppsala. Sweden） 評(píng)估6種常見過(guò)敏原sIgE :房塵螨（屋塵螨和粉塵螨）、貓毛、狗毛、牛奶、雞 蛋白。在0周、8周應(yīng)用UniCAP FEIA （Pharmacia Diagnostics AB）評(píng)估嗜酸細(xì)胞陽(yáng) 離子蛋白（ECP）和T IgEo在0周、8周、10周檢測(cè)血常規(guī)（FBC QC）,應(yīng)用Coulter LH 750血液分析儀（Beckman Coulter, Fullerton, CA, U.S.A.）檢測(cè)血嗜酸性粒細(xì)胞。實(shí)

13、驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果也作為繼發(fā)的結(jié)果?？赡艿母弊饔糜涗泴?shí)驗(yàn)期間任何副作用如腹瀉、腹痛、皮疹等。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本研究為隨機(jī)、雙盲研究，實(shí)驗(yàn)前不存在相應(yīng)數(shù)據(jù)，我們納入60例患兒后不再添 加新的研究對(duì)象，僅以此60例患兒為研究對(duì)象。本研究基礎(chǔ)在于假設(shè)治療組8周時(shí)SCORA分下降50泌兒的百分?jǐn)?shù)高于對(duì)照組。治療組和對(duì)照組觀察到的百分 率分別為70% 26%結(jié)果以平均數(shù) 琳準(zhǔn)差或用中位數(shù)并可信區(qū)間表示，絕對(duì)變量以 門和表示。組間比較應(yīng)用兩樣本t檢驗(yàn)、Mann -Whitney U檢驗(yàn)、Pearson v2檢驗(yàn)，組內(nèi)變化采用 配對(duì)t檢驗(yàn)。兩組SCORA分變化以平均數(shù)表示并以線性模型區(qū)別兩組及時(shí)間效 應(yīng)。所有統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)估

14、采用雙向檢驗(yàn)，以a 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。使用SPSS 15.0 軟件（SPSS In c., Chicago, IL, U.S.A.進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。患兒一般情況2-14歲AE兒童60例被納入，隨機(jī)分為2組，30例為治療組（合生元組），30例為 對(duì)照組（益生元組），所有納入者血漿標(biāo)本中至少有一項(xiàng) s IgE 0.35 kU /L。治 療組有3例患兒因急性發(fā)作使用糖皮質(zhì)激素，對(duì)照組中1例不符合SCORAD分標(biāo)準(zhǔn)（評(píng)分 25）, 1例拒絕繼續(xù)試驗(yàn)，1例因急性發(fā)作使用糖皮質(zhì)激素，這些病人的 退出在試驗(yàn)開始前。因此每組有27例參與試驗(yàn)。表1為2組患兒一般特征、納入前的臨床及實(shí)驗(yàn)室結(jié)果，提示0周時(shí)

15、兩組患兒一般 特征、臨床表現(xiàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療組有17例男性，10例女性，對(duì)照組有12 例男性，15例女性，平均年齡（7.8 3.5 ）歲和（6.9 3.4 ）歲。AE嚴(yán)重度評(píng)分 SCORA分 0周時(shí)治療組和對(duì)照組分別為（60.2 12.0 ）和（50.2 14.5 ）。治 療組中7人（26% 中度ADffi20人（ 74% 重度AD對(duì)照組中11人（41% 中度AD 16人（59% 重度AD表1患兒一般特征及基礎(chǔ)情況TrciinicnL group (E = 27)當(dāng)耳inrri + 0/-8 +Iv? + 3+0-366做兀ri!/(ll/IS0-7iAIK-ryin- rthicLiL

16、is yv J niJ (A5)21 (7S)Q-+ft+liiJHy ygb n4 (IM 0*)WD丁|普rTriid賀 J d (%)24 (A9)()1 伽WBC(X 10mirtiin flQF)(7-6-lCM)y-l (7 S-I0-J)D-+3FPC- (K L滬學(xué) rnrfjifh (IQK)+ SI4-660伽merlpFiil (IQW)冷（門41勺ti-9 n M-冷-町0卷汀Pki心hJ(X (41.(IQR)34Z (JOJ-tii)3$+ 005-1* 刃0-JsvTTC (celE pl.nil詛門(IQK)/lO (304】mO)fr22 (+00-8 i*h

17、)U-S2SEb (丹 17h median (ECJF)ZS-S fl3-3Z-7)(311-+)0-31Total IgF (lU mmedian (IQR)1 Z37 (5IZ-3fl.Z7)D-fi + ZStORAD parancUT. mcart (IQR)為L(zhǎng)v山11-6 1 |-11(對(duì)15-1 (y-li-+) 】曬IS I2-6)1+ (ItHI S)0W +SnbjivLLve - pnirinis斗卩-力+ fW)D-1H+Subjeedve - Tt叩 Lk2 fl-4)1 f-3)D-za3SCORAD itdc? mem + SDto Z + 12054 Z +

18、14 50-104Moderate? n (%)? (36)II (+1)D記+艮ScsTTTn (%)20 f74IS丁電J :won:QO./ mean + 5D22-0 + 117in + 113D7?HTEC耆酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，ECP嗜酸細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白，QOL生活質(zhì)量，a兩樣本t 檢驗(yàn)，bPearson x2 檢驗(yàn)，c Mann- Whitney U 檢驗(yàn)。AD嚴(yán)重度變化治療組52%147),對(duì)照組30%(8/27) (P表1顯示2組患兒AD臨床嚴(yán)重度（通過(guò)SCORA分表示）。圖1a顯示4周、8周、 10周時(shí)的SCORAD圖1b顯示SCORA分從納入時(shí)（0周）到4周、8周、10周的變 化

19、趨勢(shì)。治療組SCORA分在4周、8周時(shí)變化較大。治療組8周時(shí)SCORA分明 顯低于對(duì)照組（P 0.05）。圖1c顯示0周、4周、8周輕中重度AD患兒的百分率。治 療組與對(duì)照組比較，AD缶床嚴(yán)重性明顯降低，而且，雖然納入時(shí)兩組均有中重度 AD,8周時(shí)輕度AD勺百分率兩組明顯不同， =0.024）（數(shù)據(jù)未提供）。w- - - - a J bICW-tQ-II1JIWk !十 4圖1 SCORA評(píng)分的變化兩組患兒SCORAD化的線圖， 本t檢驗(yàn)，未見顯著性差異。研究期間兩組患兒SCORA分的變化，以平均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示，以線圖評(píng) 估不同時(shí)段和組間SCORA分變化， Pv 0.001提示不同時(shí)段有顯著變化

20、。每種AD嚴(yán)重度百分比的直方圖，應(yīng)用 治療期間每一時(shí)點(diǎn)兩組無(wú)顯著性差異，組(P=0.024)。(C)以平均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用 2樣PvO.05提示組間有顯著性差異,Fisher檢驗(yàn)比較組間的嚴(yán)重度差別， 治療組輕度AD百分率明顯高于對(duì)照臨床與實(shí)驗(yàn)室結(jié)果表2顯示兩組治療8周后臨床SCORA分，與0周時(shí)情況比較，2組均有改善，8周 時(shí)，SCORA分指標(biāo)之一即AD雖度兩組間有顯著差異：治療組為6( 4-8)，對(duì)照 組危8(7-12 )(P = 0.013),且總的SCORAD分組間明顯不同：治療組為27.4 2.7, 對(duì)照組為 36.3 4.9 (P = 0.022)。表2 8周時(shí)SCORA

21、分TtCJUIllLU. L)Up (n - 17)Ccjnrol gruup 二P-vaJucSCDRAD pajzrncten. median (IQft)Esicnl+ 1 (2-2-11-2)7-i (+1-117)叭打liLLnSllyfl da (7-12)OOM jSuhjccrivc - pruriLui3 (l-t)2 (2-30713Subioctifvc = deep Jas1 (1-2)1 (1 = 1)0-65?SCOHAD stale. invan 帥3?-4 + 12-736 J + 葉9IQR, int匚叫迴Ttilc range (QL Q3). Rcsiil

22、bi were tucnpircd using Majna=WlBtncy U-to-t orsimple L-tcsI.兩組SCORA分明顯下降(均P 50% 者明顯多于對(duì)照組(P = 0.06 VSP = 0.068 )。8周時(shí)血清EC在實(shí)驗(yàn)組為5.2 (IQR 3.4-14.1)，對(duì)照組為12.4 (IQR 6.4 437.4)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其他臨床結(jié)果如 生活質(zhì)量評(píng)分和8周時(shí)藥物使用情況兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(結(jié)論未顯示)。表3顯示兩組4周、8周時(shí)藥物使用頻率、總QO評(píng)分和EC水平。治療組藥物使用 頻率(P = 0.007)和EC水平(P = 0.002胎療末明顯降低，對(duì)照組藥

23、物使用和總 QOL 評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。EC水平在8周時(shí)明顯降低(P = 0.01)。表3兩組患兒藥物使用頻率，生活質(zhì)量評(píng)分，血清嗜酸細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白變化VariablesTreatmentControlWeek 4Week KWell 斗Wetk SFrtqutiity()f inttiitine use (Linjes/m on di)Me ill + SD3 i&aU-S 19134-3 IS-fl31-Q 19-0P value0 007*0 035Stale of qua lily of lifeMe ill + SD】&9 lZ-414 2 12-417 0 7 917-9 10-

24、8P vilut/0-0860-964Stern ECPMt an + SD弭 3 3? fl17 2 + 2L44 20 + +2 1245 + 2& 7P-silueOOOZ*0010*通過(guò)組內(nèi)配對(duì)t檢驗(yàn)或Mann- Whitney U檢驗(yàn)得出P值，血清嗜酸細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白 不正常，*P0.05組內(nèi)顯著性差異（1月和2月比較） 副作用合生元正2例輕度腹瀉但能很好耐受治療。討論我們研究的主要發(fā)現(xiàn)是帶有益生菌如唾液乳桿菌+益生元如低聚果糖的合生元較但用益生元明顯減少2-14歲兒童AD重性，此結(jié)論基于SCORA分的變化，而非 AD兒童的天然變異。Sistek等定義穩(wěn)定AD勺正常范圍內(nèi)變異試驗(yàn)前監(jiān)測(cè)

25、SCORA 分變異 11分。Brouwer等認(rèn)為SCORA分僅有15分變化考慮是在不同觀察者及 同一觀察者的變異性。故此認(rèn)為15分為存在變化的臨界值，本研究中SCORA變 化15分，體外該菌群有免疫調(diào)節(jié)作用，本研究是首次將唾液乳桿菌用于治療兒 童AD同時(shí)提示益生元低聚果糖單獨(dú)使用亦可部分改善 AD嚴(yán)重度。我們觀察到僅 有適度的改變，同既往關(guān)于益生菌或益生元的研究結(jié)果。腸道菌群變化（尤其在生命早期）是特應(yīng)性疾病的易感因素。固推測(cè)：加入非傳染性菌種（益生菌）或 在食物中添加某些可選擇性刺激某些細(xì)菌的生長(zhǎng)和活性的成分（益生元），可能改善微生態(tài)變化。問(wèn)題是哪種菌體或食物成分可用？復(fù)習(xí)13個(gè)使用益生菌治療AD勺隨機(jī)對(duì)照研究（RCT，Betsi等發(fā)現(xiàn)某些益生菌如 鼠李屬GL桿菌對(duì)預(yù)防ADt效，但未顯著改變多數(shù)炎癥指標(biāo)。Boyle等系統(tǒng)回顧 發(fā)現(xiàn)益生菌不推薦治療濕疹，因菌株不同使得各試驗(yàn)結(jié)論有明顯異質(zhì)性， 在益生 菌治療兒童AD勺meta分析中，Michail等認(rèn)為益生菌治療AD僅有中等度作用，且 對(duì)中重度AD乍用好于輕度AD另一項(xiàng)mata分析中Lee等認(rèn)為益生菌預(yù)防AD乍用好 于治療AD同樣的，F(xiàn)anar（等在一項(xiàng)關(guān)于益生元包括短鏈乳糖寡聚體和長(zhǎng)鏈果糖 寡聚體的回顧性分析發(fā)現(xiàn)該類食物添加劑可選擇性刺激腸道微