高效液相色譜法測定補(bǔ)中益氣口服液中黃芪甲苷的含量

1、HPLC-ELSD法測定補(bǔ)中益氣口服液中黃芪甲苷的含量潘渭樵1，陳珂2（1.湖州市食品藥品檢驗所，浙江 湖州 313000；2.湖州新農(nóng)農(nóng)業(yè)科技開發(fā)有限公司，浙江 湖州 313000）摘要：目的 建立高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測法測定補(bǔ)中益氣口服液中黃芪甲苷的含量測定方法。方法 采用色譜柱為SHIM PACK CLC-ODS C18 (6.0mm×150mm，5m；流動相為乙腈水（32:68）；流速為1.0ml·min-1，柱溫為30；蒸發(fā)光散射檢測器參數(shù)：漂移管溫度 100，氮氣流速：2.7 ml·min-1。結(jié)果 黃芪甲苷進(jìn)樣濃度在0.5044g20.176g范

2、圍內(nèi)的對數(shù)值與峰面積的對數(shù)值呈良好線性關(guān)系,r=0.9993；平均回收率為99.43%，RSD=1.26%(n=9。結(jié)論：本方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適用于補(bǔ)中益氣口服液的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞：高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測法；黃芪甲苷；補(bǔ)中益氣口服液Determination of Astragoloside in Buzhongyiqi Oral Liquid by HPLC-ELSDPan Wei-Qiao 1, Ke Chen 2 (1. Huzhou institute for food and drug control, Huzhou, Zhejiang 313000, China; 2.

3、 Huzhou Agriculture Agricultural Science and Technology Development Co., Ltd., Huzhou, Zhejiang 313000, China;Abstract: Objective: To establish an HPLC-ELSD method for determination of Astragaloside in Buzhongyiqi Oral Liquid .Methods: The column was SHIM PACK CLC-ODS C18 (6.0mm × 150mm, 5m; mo

4、bile phase of acetonitrile - water (32:68; the flow rate of 1.0ml min-1, the column temperature is 30 ; ELSD parameter: drift tube temperature of 100 , nitrogen flow rate: 2.7 ml min-1. Results: The sample astragaloside concentration range of 0.5044g20.176g logarithm of the logarithm of peak area wa

5、s linear; r=0.9993; average recovery, RSD =1.26% (n = 9. Conclusion: The method is simple, accurate, reproducible, and suitable for quality control of Buzhongyiqi Oral Liquid.Keywords: HPLC-ELSD; Astragaloside ; Buzhongyiqi Oral Liquid補(bǔ)中益氣口服液由黃芪（蜜炙）、黨參、甘草（蜜炙）、當(dāng)歸、白術(shù)（炒）、升麻、柴胡、陳皮、生姜、大棗等藥材經(jīng)加工制成的口服液。具有補(bǔ)中

6、益氣，升陽舉陷的功效1。黃芪是君藥，其主要成分為黃芪甲苷，控制黃芪質(zhì)量，即可控制本品的質(zhì)量。有關(guān)黃芪甲苷的分析方法報道，有薄層-紫外可見分光光度法、薄層掃描法等。但方法繁瑣，誤差大，重現(xiàn)性不好，采用高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測法，避免紫外末端吸收的影響，方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。1 儀器與試藥1.1 儀器 Agilent1200高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），Alltech2000-ELSD蒸發(fā)光散射檢測器（美國奧泰公司），RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠。1.2 試藥 黃芪甲苷對照品（供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所，批號：110781-200613

7、；規(guī)格20mg）；補(bǔ)中益氣口服液（浙江大東吳藥業(yè)有限公司，規(guī)格10ml/支，批號：090608、 091018、 091201）；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。2 方法與結(jié)果2.1 色譜條件色譜柱為SHIM PACK CLC-ODS C18 (6.0mm×150mm，5um；流動相為乙腈水（32:68）；流速為1.0ml·min-1，柱溫為30；蒸發(fā)光散射檢測器參數(shù)：漂移管溫度 100，氮氣流速：2.7 ml·min-1。2.2 溶液制備對照品溶液的制備：精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥24h的黃芪甲苷對照品12.61mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并

8、稀釋至刻度，搖勻，即得（濃度為0.5044mg/ml）。供試品溶液的制備：精密量取本品25ml，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，正丁醇液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀80蒸干，殘渣加用甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得2。圖1對照品色譜圖 圖2 供試品色譜圖 圖3 陰性對照色譜圖2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取黃芪甲苷對照品溶液（濃度為0.5044mg/ml）各1l、3l、5l、10l、20l、40l，分別注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，以峰面積的自然對數(shù)值為縱坐標(biāo)，黃芪甲苷進(jìn)樣量的自然對數(shù)值為

9、橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=1.2136X+5.6728，r=0.9993。結(jié)果表明，黃芪甲苷在0.5044g20.176g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.4精密的試驗精密吸取對照品溶液20ul，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果，RSD=0.53%。2.5 重復(fù)性試驗2.6 穩(wěn)定性試驗取同一份供試品溶液分別于2，8，16，24，48h注入液相色譜儀各20ul，以黃芪甲苷的峰面積計算，結(jié)果，RSD=0.96%。表明該方法穩(wěn)定性良好。2.6 加樣回收率試驗表1 回收率試驗結(jié)果編號 原含量 加入量 測定值 回收率 平均回收率 RSD（mg） （mg） （mg） （%） （%） （

10、%）1 1.0627 1.0088 2.0615 99.012 1.0627 1.0088 2.0764 100.493 1.0627 1.0088 2.0512 97.994 1.0627 1.2610 2.3041 98.445 1.0627 1.2610 2.2984 97.99 99.43 1.26 6 1.0627 1.2610 2.3065 98.647 1.0627 1.5132 2.5895 100.908 1.0627 1.5132 2.5913 101.029 1.0627 1.5132 2.5816 100.382.8 樣品含量測定分別取批號為090608、 091018

11、、 091201樣品，照“”項下方法制備供試品溶液，照“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，以黃芪甲苷峰面積按外標(biāo)兩點對數(shù)值進(jìn)行計算。結(jié)果見表2。表2樣品含量測定結(jié)果批號 黃芪甲苷含量/g·ml-1090608 79.28091018 82.13 091201 70.853 討論筆者對口服溶液中黃芪甲苷的提取條件進(jìn)行考察，參考了中國藥典2005年版一部黃芪含量測定項下提取方法，比較了將樣品用以水飽和的正丁醇液提取，氨試液洗脫，正丁醇液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)蒸干，加甲醇溶解進(jìn)樣；與樣品用以水飽和的正丁醇液提取，氨試液洗脫，正丁醇液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)蒸干，殘渣加水溶解，通過D101大孔柱樹脂吸附洗脫，洗脫液蒸干，加甲醇溶解進(jìn)樣。結(jié)果不經(jīng)D101大孔柱樹脂吸附洗脫的樣品在黃芪甲苷保留時間處無雜質(zhì)峰干擾，分離度好，而通過D101大孔柱樹脂吸附洗脫的樣品，受實驗操作影響較大，回收率較低。在樣品的蒸干過程中，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀較理想，即縮短實驗時間，而且熱穩(wěn)定性又好。本文中用于樣品含量測定的方法是外標(biāo)兩點對數(shù)法，本法適用于ELSD檢測方法的含量測定。即以高、低濃度對照品通過lgA=klgC+b（式中A為峰面積，C為質(zhì)量，k、b均為常數(shù)）計算出k和b的數(shù)值，再通過測得樣品的峰面積計算樣品含量。參考文獻(xiàn)1