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文檔簡介

SDS電泳 SDSPAGE 是在要走電泳的樣品中加入含有SDS和b-巰基乙 醇的樣品處理液,SDS即十二烷基磺酸鈉,是一種陰離子表面活性劑 即去污劑,它可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵,破壞蛋白質(zhì)分子的二 級和三級結(jié)構(gòu),強還原劑b-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的 二硫鍵,破壞蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)。電泳樣品加入樣品處理液后,要在 沸水浴中煮35 min,使SDS與蛋白質(zhì)充分結(jié)合,以使蛋白質(zhì)完全變 性和解聚,并形成棒狀結(jié)構(gòu)。SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合后使蛋白質(zhì)SDS復 合物上帶有大量的負電荷,平均每兩個氨基酸殘基結(jié)合一個SDS分子, 這時各種蛋白質(zhì)分子本身的電荷完全被SDS掩蓋。這樣就消除了各種 蛋白質(zhì)本身電荷上的差異。強陰離子去污劑SDS與某一還原劑并用, 通過加熱使蛋白質(zhì)解離,大量的SDS結(jié)合蛋白質(zhì),使其帶相同密度的 負電荷,在聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)上,不同蛋白質(zhì)的遷移率 僅取決于分子量。采用考馬斯亮蘭快速染色,可及時觀察電泳分離效 果。因而根據(jù)預計表達蛋白的分子量,可篩選陽性表達的重組體。 2013-10-8 北京同生時代生物技術有限公司 抗體活性 p p 流式細胞儀測定 帶入抗體檢測 選擇合適的抗原與抗體作免疫結(jié)合實驗,包被梯度濃 度的抗原與抗體結(jié)合,用發(fā)光儀測試,看最低抗原檢出濃 度考察抗體活性。 2013-10-8 北京同生時代生物技術有限公司 The End Tha

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