RP-HPLC法測(cè)定大鼠血漿中丹參酮IIA濃度及其藥代動(dòng)力學(xué)

1、368藥學(xué)學(xué)報(bào)ActaPharmaceuticaSinica2003,38(5):368-370RP2HPLC法測(cè)定大鼠血漿中丹參酮IIA濃度及其藥代動(dòng)力學(xué)研究喬晉萍,侯佩玲,李亞偉,再帕爾阿不力孜(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)藥物研究所,北京100050)3摘要:目的建立高效液相色譜法測(cè)定大鼠血漿中丹參酮IIA濃度的方法。方法血漿樣品經(jīng)液2液萃取后,用HPLC法進(jìn)行分析。色譜柱為YMCC18(5m,ID310mm×150mm);流動(dòng)相為乙腈2水2冰醋酸(74261);流速013mLmin-1;檢測(cè)波長270nm;內(nèi)標(biāo)為42氯聯(lián)苯。結(jié)果線性范圍為0105mgL-16140mgL-

2、1,最低檢測(cè)濃度為0105mgL-1。高、中、低3種濃度的平均方法回收率分別為9819%,10211%和10014%。日內(nèi)、日間精密度(RSD)均小于5%。結(jié)論本方法穩(wěn)定、簡便、可靠,可用于丹參酮IIA的血藥濃度分析及其藥代動(dòng)力學(xué)研究。關(guān)鍵詞:高效液相色譜法;丹參酮IIA;血藥濃度;藥代動(dòng)力學(xué)中圖分類號(hào):R917.101文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):0513-4870(2003)05-0368-03DeterminationoftanshinoneIIAinratplasmaandthepharmacokineticsbyRP2HPLCmethodQIAOJin2ping,HOUPei2ling,L

3、IYa2wei3,ABLIZZeper(InstituteofMateriaMedica,ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege,Beijing100050,China)Abstract:AimTodevelopasensitiveandrapidHPLCmethodforthedeterminationoftanshinoneIIA(TS)inratplasmaandtostudyitspharmacokineticsinrats.MethodsTSand42chlorodiphenyl(internalstan

4、dard)wereextractedfromplasmawithethylacetate.Afterliquid2liquidextraction,thesamplewasanalyzedbyHPLCwithYMCC18column(5m,150mm×310mmID).Themobilephaseconsistedofacetontrile2water2aceticacid(74261)attheflowrateof013mLmin-1,theUVdetectionwavelengthwas270nm.ResultsThecalibrationcurvewaslinear(r=019

5、981)intherangefrom0105to6140mgL-1.Thelowestdetectableconcentrationwas0105mgL-1.Therecoveriesattheconcentrationof0105,1160and6140-1mgLwere9819%,10211%and10014%,respectively.Theinter2andintra2dayRSDswerealllessthan5%.ConclusionThismethodisprovedtoberapid,preciseandreliableenoughtobeappliedtothe-1pharm

6、acokineticsstudiesofTSinratsafterasingledoseof15mgkgbyoraladministration.Keywords:HPLC;tanshinoneIIA;plasmadrugconcentration;pharmacokinetics丹參酮IIA(tanshinoneIIA,TS)是從唇形科植物丹參(SalviamiltiorrhizaBunge)的根中提取分離的二萜醌類化合物,為丹參中的有效成分,具有多種藥理活性,如抗菌,抗氧化,擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈,增加心肌血流量等1。中國藥典1995版以TS為定量指標(biāo)用高效液相色譜法進(jìn)行質(zhì)量控制2,此外還有用固相萃

7、取2收稿日期:2002207222.基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(39970861).3分光光度法3、薄層色譜2熒光法4、高效液相色譜法5和SFE2CGC法6測(cè)定丹參藥材中TS的含量。但用RP2HPLC法測(cè)定TS的血藥濃度及藥代動(dòng)力學(xué)研究至今未見報(bào)道。本研究建立了反相高效液相色譜法(RP2HPLC)測(cè)定大鼠血漿中TS的濃度,并研究了TS在大鼠的體內(nèi)過程及其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),為臨床前研究提供參考。丹參酮IIA(tanshinoneIIA)和內(nèi)標(biāo)42氯聯(lián)苯(42chlorodiphenyl)的結(jié)構(gòu)分別為:通訊作者Tel:86-10-63165218,Fax:86-10-63017757,E2m

8、ail:zeper喬晉萍等:RP2HPLC法測(cè)定大鼠血漿中丹參酮IIA濃度及其藥代動(dòng)力學(xué)研究369材料與方法儀器日本Jasco公司高效液相色譜儀(包括PU2980泵,UV2975檢測(cè)器);SRIMODEL203PeakSimpleChromatographyDataSystem;高速臺(tái)式離心機(jī);旋渦混合器。藥品與試劑TS對(duì)照品(含量>99%)購于DELTA天然有機(jī)化合物信息中心;42氯聯(lián)苯(內(nèi)標(biāo),分析純),上海試劑一廠;乙腈和甲醇均為色譜純,Merck公司;冰醋酸,乙酸乙酯,分析純,北京化工廠;水為重蒸水。試驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠,體重(210±20)g,北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司提供。

9、色譜條件色譜柱:YMCC18柱(5m,ID310mm×150mm);流動(dòng)相:乙腈2水2冰醋酸(74261),流速:013mLmin-1,檢測(cè)波長270nm。血漿樣品處理取大鼠血漿012mL,加入內(nèi)標(biāo)溶液(0105gL-142氯聯(lián)苯甲醇溶液)30L,混勻,加入乙酸乙酯3mL,渦流震蕩10min,離心10min(3000rmin-1),分取上層有機(jī)相,于40氮?dú)饬飨麓蹈?殘留物溶于200L流動(dòng)相中,渦流1min,離心后取上清液20L進(jìn)樣7。結(jié)果1色譜行為在上述色譜條件下,空白血漿、含藥血漿和實(shí)測(cè)血漿的色譜如圖1所示,色譜分離良好,不受內(nèi)源性雜質(zhì)峰干擾,內(nèi)標(biāo)保留時(shí)間為11168min,TS

10、的保留時(shí)間為13153min。2標(biāo)準(zhǔn)曲線取大鼠空白血漿012mL,加入TS系列標(biāo)準(zhǔn)溶液50L,配制成相當(dāng)于濃度為0105,011,012,014,018,1160,3120和6140mgL-1的血漿樣品,按照上述方法中“血漿樣品處理”項(xiàng)下操作。以血漿中待測(cè)物濃度(C)為橫坐標(biāo),待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比(Y)為縱坐標(biāo),回歸方程為Y=0102164C-01000771,r=019981,最低定量濃度為0105mgL-1(SN=3)。A:Blankplasmasample;B:Plasmasamplespikedwith3120mgL-1tanshinoneIIA(1)andinternalsta

11、ndard(2);C:Plasmasample0117hafteranoraladministrationofTS(15mgkg-1)toaSDrat;IS:42chlorodiphenylFigure1HPLCChromatogramsoftanshinoneIIA(TS)andinternalstandard(IS)3回收率與精密度用空白血漿配制含TS分別為0105,1160和6140mgL-1的標(biāo)準(zhǔn)血樣,按“血漿樣品處理”項(xiàng)下方法操作,每一濃度進(jìn)行5樣本分析,平均方法回收率分別為9819%,10211%和10014%。在1d內(nèi)不同時(shí)間進(jìn)樣,測(cè)得3種濃度標(biāo)準(zhǔn)血漿的日內(nèi)RSD分別為312%,

12、214%和116%(n=5)。相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)血漿在5d內(nèi)的日間RSD分別為417%,316%和219%(n=5)。4穩(wěn)定性考察本文初步考察了TS在不同保存條件下的穩(wěn)定性8。其血漿樣品在冷凍2融化循環(huán)3次實(shí)驗(yàn)中,測(cè)定TS的濃度無明顯降低(相對(duì)偏差在10%之內(nèi));4下,TS在甲醇溶液中至少可保存3個(gè)月;室溫條件下其在流動(dòng)相中至少可穩(wěn)定存在24h。5TS在大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究SD大鼠10只,按體重隨機(jī)分成2組,每組5只,每只大鼠間隔一定的時(shí)間取血,每個(gè)取血點(diǎn)有5個(gè)樣本,即第1組動(dòng)物取血時(shí)間點(diǎn)分別為0108,0125,015,110,310,610,1010,1610和2410h;第2組動(dòng)物取血時(shí)間

13、點(diǎn)分別為0,0117,0133,0167,210,410,810,1210和2010h。給藥前禁食12h,全程不禁飲水。用吐溫280和生理鹽水配制一定濃度的TS混懸液,ig15mgkg-1,于不同時(shí)間點(diǎn)由眼眶后靜脈叢取血約500L,置于肝素化離心試管中,離心分離血漿,按上述方法中“血漿樣品處理”項(xiàng)下操作,測(cè)定得大鼠單次igTS的平均血藥濃度2時(shí)間曲線,結(jié)果見圖2。370藥學(xué)學(xué)報(bào)ActaPharmaceuticaSinica2003,38(5):368-370Figure2Meanplasmaconcentration2timecurveoftanshinoneIIAaftersingleora

14、ldoseof15mgkg-1inrats用中國藥理學(xué)會(huì)3P87實(shí)用藥代計(jì)算程序處理,自動(dòng)進(jìn)行推算、模型、權(quán)重選擇,擬合的藥2時(shí)曲線符合po給藥二室模型,有關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表1。Table1PharmacokineticparametersoftanshinoneIIAaftersingleoraldoseof15mgkg-1inratsParameterValuesStandarderror(SE)AmgL-1301822157E+01BmgL-131871180E+0h-111273118E-01h-101197199E-02T12h0155T12h3163T12kah0141kah-1

15、11693117E-01Tmaxh0185CmaxmgL-15157VdmL1134AUCmghL-124109討論本實(shí)驗(yàn)建立了RP2HPLC測(cè)定丹參酮IIA在大鼠體內(nèi)的血藥濃度的方法,并進(jìn)行了藥代動(dòng)力學(xué)探討。為減少操作誤差,加入了內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)物。試驗(yàn)證明,本方法有內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾、出峰時(shí)間合適和重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn),對(duì)于該藥的體內(nèi)代謝研究具有一定的意義。由藥動(dòng)學(xué)參數(shù)可知,大鼠ig丹參酮IIA后,吸收相半衰期為0155h,消除相半衰期為3163h屬于短半衰期藥物。有關(guān)丹參酮IIA的體內(nèi)代謝情況將進(jìn)一步研究。References:1HandbookoftheCompositionandPharmacolog

16、yofCommonChineseDrugs(常用中藥成分與藥理手冊(cè))Z.Beijing:ChinaMedico2PharmaceuticalScienceandTechnologyPublishingHouse,1994.598.2TheStatePharmacopoeiaCommitteeofthePeoplesRepublicofChina.PharmacopoeiaofthePeoplesRepublicofChina(中華人民共和國藥典)S.Guangzhou:GuangdongScienceandTechnologyPress,1995.62-63.3ShunWJ,MengHB,Ga

17、oH.DeterminationoftanshinoneIIAinSalviamiltiorrhizaBungebysolidphaseextraction2HPLCJ.ChinJPharmAnal(藥物分析雜志),1996,16(3):199-200.4LiuWJ,WangBQ,LiXF.DeterminationoftanshinoneIIAbyTLC2fluorescencechromatographyJ.NorthwestPharmJ(西北藥學(xué)雜志),1996,11(6):224-226.5HuSY.ResearchofdeterminationoftanshinoneIIAbyultrasonicextraction2HPLCJ.ChinJModApplPharm(中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)),1993,10(4):18-20.6ChenB,ZhuM,XingWJ,etal.SFE2CGCDeterminationofTanshinoneIIAinSalviamiltiorrhizaBungeJ.ActaPharmSin(藥學(xué)學(xué)報(bào)