乙型肝炎病毒抗體診斷膠體金法SOP準(zhǔn)則操作程序1

1、精心整理乙型肝炎病毒抗體診斷(膠體金法 SOP測定標(biāo)準(zhǔn)操作程序編寫者：宿金濤日期：2012年3月1日一. 原理：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗體、e抗原、e抗體、核心抗體檢測試劑盒(膠體金 法)采用膠體金免疫層析分析技術(shù)、將五個診斷意義相關(guān)的試劑通過一個包裝組合在一起，同時進行乙型肝炎病毒五項標(biāo)志物的檢測，在不影響各自性能的情況下，便于客戶的儲存和使用。HBsAg僉測試劑采用雙抗體夾心法，試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)(T)的抗體。測試時，標(biāo)本滴入試劑加樣處，標(biāo)本與預(yù)包被的膠體金顆粒結(jié)合的抗HBsAg抗體反應(yīng)。然后，混合物隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如是陽性，膠體金抗體在層析過程中先于標(biāo)本中的 H

2、BsAg吉合, 隨后家何物會被固定在膜上的抗 HBsAg抗體結(jié)合，在測試區(qū)內(nèi)(T)會出現(xiàn)一條紫紅色帶。這條帶 是HBsAg抗體-HBsAg-HBsAg抗體金標(biāo)粒子的復(fù)合物在膜上結(jié)合形成的。 如是陰性，則測試區(qū)內(nèi)(T) 將沒有紫紅色帶。無論HBsAg是否存在于標(biāo)本中，一條紫紅色帶都會出現(xiàn)在指控內(nèi)(C)。質(zhì)控區(qū)內(nèi)(C)所顯現(xiàn)的紫紅色條帶是判定是否有足夠標(biāo)本，層析過程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時也作為試劑 的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。HBsAt檢測試劑雙抗原夾心法，試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)(T)的乙肝表面抗體。測試時，標(biāo)本滴入試劑加樣處，標(biāo)本與預(yù)包被的膠體金顆粒結(jié)合的HBsAg反應(yīng)。然后，混合物隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層

3、析。如是陽性，膠體金抗體在層析過程中先于標(biāo)本中的 HBsAg吉合，隨后 結(jié)合物會被固定在膜上的HBsAg抗體結(jié)合，在測試區(qū)內(nèi)(T)會出現(xiàn)一條紫紅色條帶。這條帶是 HBsAg-HBsAb-HBsA金標(biāo)粒子的復(fù)合物在膜上結(jié)合形成的。如果陰性，貝U測試區(qū)內(nèi)(T)將沒有紫紅色條帶。無論HBsAg是否存在于標(biāo)本中，一條紫紅色條帶都會出現(xiàn)在質(zhì)控區(qū)內(nèi)(C)。質(zhì)控區(qū)內(nèi)(C)所顯現(xiàn)的紫紅色條帶是判定是否有足夠標(biāo)本，層析過程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時也作為試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。HBeAg僉測試劑采用雙抗體夾心法，試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)(T)的乙肝e抗體。測試時，標(biāo)本滴入試劑加樣處，標(biāo)本與預(yù)包被的膠體金顆粒結(jié)合的HBe

4、Ag抗體反應(yīng)。然后，混合物隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如是陽性，膠體金抗體在層析過程中先于標(biāo)本中的HBeAg吉合,隨后結(jié)合物會被固定在膜上的 HBeAg抗體結(jié)合，在測試區(qū)內(nèi)(T)會出現(xiàn)一條紫紅色條帶。這條帶是 HBeAg抗體-HBeAg-HBeAg抗體金標(biāo)粒子的復(fù)合物在膜上結(jié)合形成的。如果陰性，貝U測試區(qū)內(nèi)(T)將沒有紫紅色條帶。無論HBeAg抗體是否存在于標(biāo)本中，一條紫紅色條帶都會出現(xiàn)在質(zhì)控區(qū)內(nèi)(C)。質(zhì)控區(qū)內(nèi)(C)所顯現(xiàn)的紫紅色條帶是判定是否有足夠標(biāo)本，層析過程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時也作為 試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。HBeAb,HBcAb僉測試劑才有競爭抑制法，試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)(T)的抗體

5、。測試時，血清或血漿標(biāo)本滴入試劑加樣處，隨之標(biāo)本在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如標(biāo)本中含有相 應(yīng)的抗體，則同膜上測試區(qū)(T)的抗體競爭與預(yù)包被在金標(biāo)粒子的相應(yīng)抗體反應(yīng)。如果標(biāo)本中沒有 相應(yīng)抗體，預(yù)包被在金標(biāo)粒子的復(fù)合物的相應(yīng)抗原則同膜上測試區(qū)(T)的抗體全部結(jié)合。陽性標(biāo)本，測試區(qū)內(nèi)(T)將沒有紫紅色條帶，陰性標(biāo)本，測試區(qū)內(nèi)(T)將會出現(xiàn)明顯的紫紅色條帶。無論相應(yīng)的 抗體是否存在于標(biāo)本中，一條紫紅色條帶都會出現(xiàn)在質(zhì)控區(qū)內(nèi)(C)。質(zhì)控區(qū)內(nèi)(C)所顯現(xiàn)的紫紅色條 帶是判定是否有足夠標(biāo)本，層析過程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時也作為試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。精心整理二. 試劑：英科新創(chuàng)乙肝五項檢測卡（膠體金法）。規(guī)格為25人份/

6、盒。產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號：YZB/國 0378-2009。三. 操作步驟：1、將待測標(biāo)本從儲存條件下取出，平衡至室溫（18-25 C）并編號。2、 將膠體金測試卡從包裝盒中取出，打開鋁箔包裝袋，平置于臺面上。編號（與樣品相對應(yīng)）；3、用塑料滴管加2-3滴樣本血清或血漿，加入試劑板的五個加樣孔。4、 等待紫紅色條帶的出現(xiàn)，測試結(jié)果應(yīng)在測定開始后20分鐘開始讀取。30分鐘后判斷無效。四. 參考范圍：正常人為陰性。五. 結(jié)果判定HBsAgHBsAbHBeAg陽性：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)。一條位于測試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）。陽性結(jié)果表 明：標(biāo)本中含有待測物質(zhì)。陰性：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色條帶，在

7、測試區(qū)（T）內(nèi)無紫紅色條帶出現(xiàn)。陰性結(jié)果表 明：標(biāo)本中檢測不出待測物質(zhì)無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑已變質(zhì)損壞。在此情況 下，應(yīng)再次仔細(xì)閱讀說明書，并用新的試劑重新測試。如果問題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號 產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。注意：測試區(qū)（T）內(nèi)的紫紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。但是，在規(guī)定的觀察時間內(nèi)， 不論該色帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應(yīng)判定為陽性結(jié)果。HBeAbHBcAb陽性：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色條帶，在測試區(qū)（T）內(nèi)無紫紅色條帶出現(xiàn)。陽性結(jié)果表 明：標(biāo)本中含有待測物質(zhì)。陰性：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)，一條位于測試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位

8、于質(zhì)控區(qū)（C）。陰性結(jié)果表 明：標(biāo)本中檢測不出待測物質(zhì)。無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑已變質(zhì)損壞。在此情況下， 應(yīng)再次仔細(xì)閱讀說明書，并用新的試劑重新測試。如果問題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號產(chǎn)品,精心整理并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系序MB若KBeKbMBcAb岀時gt+一+急性HBV感染趨向恢復(fù)；慢1圭哄.菇帶者；傳染性弱.即幡薔的乙軒小三陽.510%2+一+*急性或慢性乙型肝炎感粢.提示HBV復(fù)制,轉(zhuǎn)染強.即俗踰的3一一過去和現(xiàn)在去翩過HBV10*4一一一既往巒染未能測出抗-黔；恢臭期廳塢已消，抗-毆肖未出現(xiàn)；無癥伏鹿£幅菇帶著，51015一（1）既往感染

9、過HB¥ ；急性HBV感染恢復(fù)期；（3）少數(shù)標(biāo)本仍有傳染性.HBW廳崔已過；抗展也出現(xiàn)前的窗口期6+1注射過乙肝苗有免遽；既往感舉：假陽性.7=+-資性HDV感后療復(fù).0.89+一+角性KBV®染；慢性晦洪帶者；傳染性翼lOISK+一一4既往感巣，仍有免疫力.砸¥感染,恢復(fù)期.計15»六.臨床意義:乙肝肝炎病毒引起的感染帶來了嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。母嬰傳播、性傳播和血液傳播是最主要的傳 播途徑。盡早的發(fā)現(xiàn)感染可以有效的減少疾病的傳播。乙肝五項檢測卡（膠體金法）定性檢測人血清、血漿中的乙肝表面抗原、表面抗體、e抗體、核心抗體、用于乙型肝炎病毒感染的輔助診斷。

10、七. 病人及樣本要求：1、本品適用于血清、血漿樣本，血漿樣本對臨床常用抗凝劑（ EDTA肝素、枸椽酸鈉）無要求； 樣本的采集須遵循常規(guī)的醫(yī)療樣本的采集方法并遵守相關(guān)的醫(yī)學(xué)規(guī)定。2、采集靜脈血樣本必須在無菌條件下操作，并避免樣品溶血。3、 如果血清和血漿樣品收集后7天內(nèi)檢測，樣品須放在2-8 C保存；大于7天須20C以下冷 凍保存。4、溶血、粘稠及高脂標(biāo)本不適于本試劑。含特珠物質(zhì)（如強氧化劑）的標(biāo)本可能會導(dǎo)致檢測結(jié) 果不穩(wěn)定，在檢測前須清除。八. 注意事項：1、 檢測必須符合實驗室管理規(guī)范和物物安全守則的規(guī)定，操作時必須戴手套、穿工作服、嚴(yán)格 健全和執(zhí)行消毒隔離制度。2、 乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗體、e抗原、e抗體、核心抗體檢測試劑盒（膠體金法）適 用于測試血清或血漿標(biāo)本，其他標(biāo)本或溶液進行檢測可能出現(xiàn)異常結(jié)果。3、由于在技術(shù)上和操作上可能出現(xiàn)的失誤， 同時也由于標(biāo)本中存在干擾物質(zhì)， 檢測結(jié)果有可能 錯誤。4、請保證適量的標(biāo)本用于檢測，過多或過少的標(biāo)本量都有可能導(dǎo)致結(jié)果的偏差。精心整理5、測試結(jié)果應(yīng)在測定開始后20分鐘讀取，30分鐘后判定無效。6、本產(chǎn)品為目視讀取結(jié)果，為保證判定結(jié)果的正確，請勿在光線昏暗處對結(jié)果進行判讀。7、試劑可在室溫下保