口腔粘膜鱗狀細(xì)胞癌基底膜蛋白的免疫組化研究——Ⅳ型膠原和LN

1、    口腔粘膜鱗狀細(xì)胞癌基底膜蛋白的免疫組化研究 型膠原和LN的表達(dá)異常        摘要目的：了解層粘連蛋白(LN)和型膠原在口腔粘膜鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)情況。方法：采用免疫組化之SPTM法對30例口腔鱗狀細(xì)胞癌，10例正?？谇徽衬と旧?。結(jié)果：正?？谇徽衬せ啄N和型膠原染色密度高，呈連續(xù)線狀。鱗狀細(xì)胞癌LN和膠原的染色密度。基底膜的連續(xù)性與腫瘤的分化程度呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論：LN和型膠原的表達(dá)異常與腫瘤分化、浸潤和轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，可作為判斷腫瘤預(yù)后的一項(xiàng)指標(biāo)。關(guān)鍵

2、詞層粘連蛋白；型膠原；基底膜；鱗狀細(xì)胞癌 An immunological study of basement membrane protein expression in oral squamous cell carcinomaFan Ling, Hao Pengcheng, Yan Zhengbin,et al. Department of Dentistry, Daqing Petroleum Company Hospital, Daqing 163001AbstractObjective: To observe the expression of laminin(LN) and col

3、lagen expression in oral squamous cell carcinoma.Method:Samples from 30 cases of oral squamous cell carcinoma and 10 cases of normal mucosa were stained with immunohistochemical SPTm method. LN and collagen protein expression was observed.Result:Strong expressin and continuous linear distribution of

4、 LN and collagen were observed in normal mucosa; while weak expression and disturbed distribution in oral squamous cell carcinoma, weaker expression and more disturbed distribution in less differentiated cases. Conclusion:The expression and distribution of LN and collagen is correlated with the diff

5、erentiation of squamous cell carcinoma.Key wordsLaminin, Collagen; Basement membrane; Squamous cell carcinoma層粘連蛋白(laminin，LN)和型膠原(collagen )是基底膜(basement membrane,BM)的主要成分，它們對于細(xì)胞的生長、分化及運(yùn)動具有調(diào)節(jié)作用，與多種疾病有關(guān)。目前發(fā)現(xiàn)LN、型膠原與許多皮膚、粘膜疾病、腫瘤的發(fā)生及浸潤和轉(zhuǎn)移均有密切關(guān)系?？谇徽衬[狀細(xì)胞癌是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤，對人類生命健康危害極大。隨著免疫學(xué)的飛速發(fā)展，鱗癌組織中基底膜蛋白成

6、分的變化受到眾多學(xué)者的重視。本文采用免疫組化技術(shù)對不同分化程度的口腔粘膜鱗狀細(xì)胞癌基底膜中LN、型膠原進(jìn)行檢測，觀察其表達(dá)情況。1材料和方法1.1材料來源選擇我院19951997年間資料完整的存檔蠟塊，鱗狀細(xì)胞癌30例，組織分化程度為高度分化(G1)10例，中度分化(G2)9例和低度分化(G3)11例。另以10例正常粘膜組織石蠟標(biāo)本為對照組。1.2主要試劑LN多克隆抗體(130)，型膠原單克隆抗體(150)，生物素標(biāo)記二抗(1100)，SPTM試劑盒均由北京中山生物技術(shù)有限公司提供。1.3染色方法主要步驟如下：切片脫蠟至水；3%(體積分?jǐn)?shù))過氧化氫液去除內(nèi)源性過氧化物酶；4g/L%胃蛋白酶消化

7、，37，4min；滴加正常羊血清，37，20min；加第一抗體(LN，型膠原抗體)4過夜；滴加第二抗體(羊抗兔IgG，羊抗鼠IgG)37，30min；滴加三抗(過氧化酶標(biāo)記的鏈霉卵白素)37，30min；0.5g/LDAB顯色；蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封片。和步后均經(jīng)PBS洗3次，每次5min。用已知陽性片作對照，以PBS代替第一抗體作陰性對照。1.4評定標(biāo)準(zhǔn)以基底膜染色的密度和基底膜的連續(xù)性為基礎(chǔ)來評定。染色密度以DAB顯色(棕色)的深度為基礎(chǔ)分為：缺失(-)，染色密度低(+)、染色密度高(+)?；啄みB續(xù)性分為：連續(xù)()，輕度不連續(xù)(少數(shù)斷裂)()，重度不連續(xù)(多處基底膜斷裂()，基底膜缺

8、失()。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用秩和檢驗(yàn)法求Hc值，推斷P值范圍。2結(jié)果正?？谇徽衬せ啄N和型膠原染色密度高，呈連續(xù)線狀(1)；高分化鱗狀細(xì)胞癌可見癌巢周圍基底膜染色密度減弱，且基底膜變薄，部分基底膜斷裂(2)；中度分化鱗狀細(xì)胞癌基底膜染色密度較高分化鱗癌低，多處基底膜斷裂；低分化鱗狀細(xì)胞癌則顯示大部分病損基底膜嚴(yán)重破壞，甚至基底膜缺失。2種蛋白的染色密度與腫瘤的分化程度呈負(fù)相關(guān)；基底膜的破壞程度與腫瘤的分化程度呈平行增加趨勢。1正?？谇徽衬ば湍z原2高分化鱗癌型膠原基基底膜染色10×3.3底膜染色10×3.3正常粘膜上皮與不同分化程度鱗癌組織的基底膜LN和型膠原染色密度及基

9、底膜連續(xù)性見表1、2，經(jīng)秩和檢驗(yàn)P?.05，有差異。表1LN、型膠原基底膜染色密度染色強(qiáng)度LN型膠原正常G1G2G3正常G1G2G3+10321022+7611855-126表2LN、型膠原基底膜的連續(xù)性連續(xù)性LN型膠原正常G1G2G3正常G1G2G3102101636243114451263討論 基底膜是一種細(xì)胞外蛋白，它聯(lián)結(jié)上皮及其下方的結(jié)締組織，光鏡下可見3層構(gòu)造：透明層、致密層和纖維網(wǎng)狀層，為連續(xù)的、厚度均一的線狀結(jié)構(gòu)1?；啄ず卸喾N成分，主要為型膠原(collagen)和層粘連蛋白(LN)。基底膜為腫瘤細(xì)胞侵襲過程中穿透的主要屏障之一。近年來人們注意到腫瘤的浸潤不僅破壞基底膜的組織

10、結(jié)構(gòu)，基底膜中的蛋白成分亦隨之發(fā)生改變。觀察分析正常粘膜上皮與不同分化程度的鱗癌基底膜中型膠原和LN的分布與變化，對于認(rèn)識和揭示口腔癌的浸潤是有特殊意義的。Catter等2對咽喉部位腫瘤的研究證明，基底膜蛋白的表達(dá)與腫瘤的分化程度有關(guān)。本研究結(jié)果顯示腫瘤的分化程度與上皮基底膜型膠原和LN的表達(dá)有關(guān)，低分化病損較高分化病損更易出現(xiàn)型膠原和LN的異常表達(dá)并顯示出明顯的基底膜破壞。此結(jié)果與Kannan等3的研究相一致。Forster等4根據(jù)不同分化程度癌中基底膜糖蛋白含量的差異，進(jìn)一步提出分化好的細(xì)胞較分化差的細(xì)胞會更快地分泌基底膜糖蛋白的假設(shè)。Varani等5在實(shí)驗(yàn)中證明鱗狀細(xì)胞癌及黑色素瘤均能產(chǎn)

11、生血纖維蛋白溶解酶原激活物(plasminogenactivator,PAS)，PAS可將血纖維蛋白酶原激活為血纖維蛋白酶，血纖維蛋白酶活化型膠原酶從而溶解型膠原的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，降解非膠原成分如LN，粘蛋白中心蛋白等。本實(shí)驗(yàn)觀察到癌巢周圍的基底膜多數(shù)很薄弱，并有多處斷裂或消失，癌細(xì)胞從這些缺少基底膜的部位侵入間質(zhì)，表明由于基底膜的蛋白成分被活躍浸潤的癌細(xì)胞分泌的蛋白水解酶消化的結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，不同分化程度鱗狀細(xì)胞癌上皮基底膜型膠原、LN可顯示特征性表達(dá)。上皮基底膜蛋白的表達(dá)形式可能作為監(jiān)測腫瘤生物學(xué)行為的一種標(biāo)志，作者認(rèn)為深入對基底膜細(xì)胞外蛋白的免疫組化研究，不僅為腫瘤的早期診斷提供有利依據(jù)

12、，而且對臨床上判斷腫瘤的預(yù)后具有重要參考價(jià)值。作者單位：方玲郝鵬程閆征斌何成群付君黑龍江大慶油田總醫(yī)院口腔科110000劉建林黑龍江省郵電醫(yī)院參考文獻(xiàn)1 藤田佑一，坂倉照好. “基底膜細(xì)胞外”. 醫(yī)學(xué), 1996,117(1):32 Carter RL, Burman JF, Barr L, et al. Immunohistochemical localization of basement membrane type collagen invasive and metastatic squamous carcinomas of the head and neck. J Pathol, 19

13、85,147:1593 Kannany S, Balarm P, Chandran GJ, et al. Alterations in expression of basement membrane proteins during tumor progress in oral mucosa. Histopathology, 1994,24:5314 Forster SJ, Talbot IC, Ckayton DG, et al. Tumor basement membrane laminin in adenocarcinoma of rectum: An immunohistochemical study of biological and clinical signific