口腔粘膜鱗狀細胞癌基底膜蛋白的免疫組化研究——Ⅳ型膠原和LN

1、    口腔粘膜鱗狀細胞癌基底膜蛋白的免疫組化研究 型膠原和LN的表達異常        摘要目的：了解層粘連蛋白(LN)和型膠原在口腔粘膜鱗狀細胞癌中的表達情況。方法：采用免疫組化之SPTM法對30例口腔鱗狀細胞癌，10例正?？谇徽衬と旧＝Y果：正?？谇徽衬せ啄N和型膠原染色密度高，呈連續(xù)線狀。鱗狀細胞癌LN和膠原的染色密度?；啄さ倪B續(xù)性與腫瘤的分化程度呈負相關。結論：LN和型膠原的表達異常與腫瘤分化、浸潤和轉移有密切關系，可作為判斷腫瘤預后的一項指標。關鍵

2、詞層粘連蛋白；型膠原；基底膜；鱗狀細胞癌 An immunological study of basement membrane protein expression in oral squamous cell carcinomaFan Ling, Hao Pengcheng, Yan Zhengbin,et al. Department of Dentistry, Daqing Petroleum Company Hospital, Daqing 163001AbstractObjective: To observe the expression of laminin(LN) and col

3、lagen expression in oral squamous cell carcinoma.Method:Samples from 30 cases of oral squamous cell carcinoma and 10 cases of normal mucosa were stained with immunohistochemical SPTm method. LN and collagen protein expression was observed.Result:Strong expressin and continuous linear distribution of

4、 LN and collagen were observed in normal mucosa; while weak expression and disturbed distribution in oral squamous cell carcinoma, weaker expression and more disturbed distribution in less differentiated cases. Conclusion:The expression and distribution of LN and collagen is correlated with the diff

5、erentiation of squamous cell carcinoma.Key wordsLaminin, Collagen; Basement membrane; Squamous cell carcinoma層粘連蛋白(laminin，LN)和型膠原(collagen )是基底膜(basement membrane,BM)的主要成分，它們對于細胞的生長、分化及運動具有調節(jié)作用，與多種疾病有關。目前發(fā)現(xiàn)LN、型膠原與許多皮膚、粘膜疾病、腫瘤的發(fā)生及浸潤和轉移均有密切關系?？谇徽衬[狀細胞癌是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤，對人類生命健康危害極大。隨著免疫學的飛速發(fā)展，鱗癌組織中基底膜蛋白成

6、分的變化受到眾多學者的重視。本文采用免疫組化技術對不同分化程度的口腔粘膜鱗狀細胞癌基底膜中LN、型膠原進行檢測，觀察其表達情況。1材料和方法1.1材料來源選擇我院19951997年間資料完整的存檔蠟塊，鱗狀細胞癌30例，組織分化程度為高度分化(G1)10例，中度分化(G2)9例和低度分化(G3)11例。另以10例正常粘膜組織石蠟標本為對照組。1.2主要試劑LN多克隆抗體(130)，型膠原單克隆抗體(150)，生物素標記二抗(1100)，SPTM試劑盒均由北京中山生物技術有限公司提供。1.3染色方法主要步驟如下：切片脫蠟至水；3%(體積分數(shù))過氧化氫液去除內源性過氧化物酶；4g/L%胃蛋白酶消化

7、，37，4min；滴加正常羊血清，37，20min；加第一抗體(LN，型膠原抗體)4過夜；滴加第二抗體(羊抗兔IgG，羊抗鼠IgG)37，30min；滴加三抗(過氧化酶標記的鏈霉卵白素)37，30min；0.5g/LDAB顯色；蘇木素復染，脫水、透明、封片。和步后均經PBS洗3次，每次5min。用已知陽性片作對照，以PBS代替第一抗體作陰性對照。1.4評定標準以基底膜染色的密度和基底膜的連續(xù)性為基礎來評定。染色密度以DAB顯色(棕色)的深度為基礎分為：缺失(-)，染色密度低(+)、染色密度高(+)?；啄みB續(xù)性分為：連續(xù)()，輕度不連續(xù)(少數(shù)斷裂)()，重度不連續(xù)(多處基底膜斷裂()，基底膜缺

8、失()。1.5統(tǒng)計學處理采用秩和檢驗法求Hc值，推斷P值范圍。2結果正?？谇徽衬せ啄N和型膠原染色密度高，呈連續(xù)線狀(1)；高分化鱗狀細胞癌可見癌巢周圍基底膜染色密度減弱，且基底膜變薄，部分基底膜斷裂(2)；中度分化鱗狀細胞癌基底膜染色密度較高分化鱗癌低，多處基底膜斷裂；低分化鱗狀細胞癌則顯示大部分病損基底膜嚴重破壞，甚至基底膜缺失。2種蛋白的染色密度與腫瘤的分化程度呈負相關；基底膜的破壞程度與腫瘤的分化程度呈平行增加趨勢。1正?？谇徽衬ば湍z原2高分化鱗癌型膠原基基底膜染色10×3.3底膜染色10×3.3正常粘膜上皮與不同分化程度鱗癌組織的基底膜LN和型膠原染色密度及基

9、底膜連續(xù)性見表1、2，經秩和檢驗P?.05，有差異。表1LN、型膠原基底膜染色密度染色強度LN型膠原正常G1G2G3正常G1G2G3+10321022+7611855-126表2LN、型膠原基底膜的連續(xù)性連續(xù)性LN型膠原正常G1G2G3正常G1G2G3102101636243114451263討論 基底膜是一種細胞外蛋白，它聯(lián)結上皮及其下方的結締組織，光鏡下可見3層構造：透明層、致密層和纖維網狀層，為連續(xù)的、厚度均一的線狀結構1?；啄ず卸喾N成分，主要為型膠原(collagen)和層粘連蛋白(LN)?；啄槟[瘤細胞侵襲過程中穿透的主要屏障之一。近年來人們注意到腫瘤的浸潤不僅破壞基底膜的組織

10、結構，基底膜中的蛋白成分亦隨之發(fā)生改變。觀察分析正常粘膜上皮與不同分化程度的鱗癌基底膜中型膠原和LN的分布與變化，對于認識和揭示口腔癌的浸潤是有特殊意義的。Catter等2對咽喉部位腫瘤的研究證明，基底膜蛋白的表達與腫瘤的分化程度有關。本研究結果顯示腫瘤的分化程度與上皮基底膜型膠原和LN的表達有關，低分化病損較高分化病損更易出現(xiàn)型膠原和LN的異常表達并顯示出明顯的基底膜破壞。此結果與Kannan等3的研究相一致。Forster等4根據不同分化程度癌中基底膜糖蛋白含量的差異，進一步提出分化好的細胞較分化差的細胞會更快地分泌基底膜糖蛋白的假設。Varani等5在實驗中證明鱗狀細胞癌及黑色素瘤均能產

11、生血纖維蛋白溶解酶原激活物(plasminogenactivator,PAS)，PAS可將血纖維蛋白酶原激活為血纖維蛋白酶，血纖維蛋白酶活化型膠原酶從而溶解型膠原的網狀結構，降解非膠原成分如LN，粘蛋白中心蛋白等。本實驗觀察到癌巢周圍的基底膜多數(shù)很薄弱，并有多處斷裂或消失，癌細胞從這些缺少基底膜的部位侵入間質，表明由于基底膜的蛋白成分被活躍浸潤的癌細胞分泌的蛋白水解酶消化的結果。本實驗結果提示，不同分化程度鱗狀細胞癌上皮基底膜型膠原、LN可顯示特征性表達。上皮基底膜蛋白的表達形式可能作為監(jiān)測腫瘤生物學行為的一種標志，作者認為深入對基底膜細胞外蛋白的免疫組化研究，不僅為腫瘤的早期診斷提供有利依據

12、，而且對臨床上判斷腫瘤的預后具有重要參考價值。作者單位：方玲郝鵬程閆征斌何成群付君黑龍江大慶油田總醫(yī)院口腔科110000劉建林黑龍江省郵電醫(yī)院參考文獻1 藤田佑一，坂倉照好. “基底膜細胞外”. 醫(yī)學, 1996,117(1):32 Carter RL, Burman JF, Barr L, et al. Immunohistochemical localization of basement membrane type collagen invasive and metastatic squamous carcinomas of the head and neck. J Pathol, 19

13、85,147:1593 Kannany S, Balarm P, Chandran GJ, et al. Alterations in expression of basement membrane proteins during tumor progress in oral mucosa. Histopathology, 1994,24:5314 Forster SJ, Talbot IC, Ckayton DG, et al. Tumor basement membrane laminin in adenocarcinoma of rectum: An immunohistochemical study of biological and clinical signific