大鼠頜下腺顆粒曲管神經(jīng)肽的分布

1、    大鼠頜下腺顆粒曲管神經(jīng)肽的分布         摘要：目的研究頜下腺內(nèi)神經(jīng)肽的性質(zhì)、分布。方法免疫組織化學ABC方法。結(jié)果大鼠頜下腺顆粒曲管和紋狀管上皮細胞呈SOM、SP、VIP和NPY免疫反應性，而腺泡細胞為陰性。結(jié)論大鼠頜下腺導管上皮細胞內(nèi)含有多種神經(jīng)肽，可能參與腺體的分泌活動、血液供應乃至消化道功能的調(diào)節(jié)。關(guān)鍵詞：神經(jīng)肽；頜下腺；顆粒曲管；免疫組織化學；大鼠分類號：R329.4文獻標識碼：A文章編號：0529-1356(2000)01-94LOCALIZATIO

2、N OF THE NEUROPEPTIDES IN THE GRANULARCONVOLUTED TUBULE OF RAT SUBMANDIBULAR GLANDJIA Xue-mei(Department of Histology and Embryology, Anhui Medical University, Hefei 230032, China)QI Wei-qing(Department of Histology and Embryology, Anhui Medical University, Hefei 230032, China)WANG Hui-zhu(Departmen

3、t of Histology and Embryology, Anhui Medical University, Hefei 230032, China)CAI Long-hu(Department of Histology and Embryology, Anhui Medical University, Hefei 230032, China)Abstract：ObjectiveTo study the localization of SOM, SP, VIP, and NPY in rat submandibular gland. MethodsImmunohistochemical A

4、BC method was used. ResultsGranular convoluted tubule (GCT) cells and striated duct cells showed SOM, SP, VIP, and NPY immunoreactivity while the acinar cells were negative. ConclusionThe neuropeptides in GCT cells might have closely relation to acinar secretion, local blood supply and physiologic r

5、egulation of degestive tract.Key words：Neuropeptides; Submandibular gland; Granular convoluted tubule; Immunohistochemistry; Rat自1936年在頜下腺中發(fā)現(xiàn)激肽釋放酶系以來，已從小鼠、大鼠等嚙齒類動物的頜下腺中發(fā)現(xiàn)或分離出近30種蛋白質(zhì)和肽類生物活性物質(zhì)1，它們主要定位于頜下腺顆粒曲管(GCT)細胞中。因此有人認為頜下腺具有內(nèi)分泌樣功能，可將其歸屬于消化道彌散性神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)。但頜下腺GCT細胞內(nèi)是否含有P物質(zhì)(SP)、血管活性腸肽(VIP)、神經(jīng)肽Y(NPY)等神經(jīng)肽

6、類物質(zhì)，尚未見系統(tǒng)報道。本實驗采用免疫組織化學ABC方法，對大鼠頜下腺上述物質(zhì)等進行觀察，為深入研究頜下腺復雜的內(nèi)分泌功能提供形態(tài)學依據(jù)。材料和方法1.動物和標本制備取正常雄性Wistar大鼠10只，體重100150克，用10%烏拉坦按1ml/100g體重的劑量腹腔內(nèi)注射，麻醉后剖開胸腹腔，用生理鹽水從左心室灌流，再用0.4%苯醌固定液灌注固定。石蠟包埋切片，分別作HE和免疫組織化學染色。2.免疫組織化學染色采用免疫組織化學ABC技術(shù)，所用抗體及稀釋度：第一抗體為兔抗生長抑素(SOM)抗血清，兔抗SP抗血清、兔抗VIP抗血清和兔抗NPY抗血清(前者購自華美生物工程公司，后三者購自Peninsu

7、la公司)；稀釋度前者為1200，后三者為12 000。第二抗體為生物素標記的羊抗兔IgG血清(購自華美生物工程公司)，稀釋度為1200。ABC復合物(購自華美生物工程公司)的稀釋度為：1200。標本用DAB顯色后，脫水，透明和封片。3.對照以正常兔血清代替第一抗體作為陰性對照。以小腸切片作為陽性對照。結(jié)果和討論1.陰性對照結(jié)果顯示為陰性。陽性對照結(jié)果顯示小腸壁內(nèi)有豐富的SOM、SP、VIP及NPY免疫反應纖維和細胞。在大鼠頜下腺的HE染色切片中，可見混合性腺泡和各級導管，其中GCT粗長而彎曲，構(gòu)成導管系統(tǒng)中重要組成部分。在免疫組織化學染色切片中，SOM、SP、VIP和NPY免疫反應性細胞呈淺

8、棕色至深棕色不等，背景幾乎無色。大鼠頜下腺GCT細胞分別呈SOM、SP、VIP和NPY免疫反應性，免疫染色產(chǎn)物分布于細胞質(zhì)內(nèi)，細胞核為陰性(16)。此外，紋狀管上皮細胞亦呈SOM、SP、VIP和NPY免疫反應性。    1示大鼠頜下腺顆粒曲管細胞（）呈SOM免疫染色陽性,腺泡細胞為陰性(*)。×200Fig1The GCT cells() showing SOM-immunoreactivity,acinar cells(*)negative.×200    2示大鼠頜下腺顆粒曲管細胞（）呈SP

9、免疫反應性,腺泡細胞為陰性(*)。×200Fig2The GCT cells() showing SP-immunoreactivity,acinar cells(*)negative.×200    3示大鼠頜下腺顆粒曲管細胞()和紋狀管細胞()呈VIP免疫反應性,腺泡細胞為陰性(*).×200Fig3The GCT cells() and striated duct ()cells showing VIP-immunoreactivity,acinar cells(*)negative.×200 &#

10、160;  4示大鼠頜下腺顆粒曲管細胞()和紋狀管細胞()呈NPY免疫反應性,腺泡細胞為陰性(*).×200Fig4The GCT cells() and striated duct ()cells showing NPY-immunoreactivity,acinar cells(*)negative.×200    5示顆粒曲管細胞()呈VIP免疫反應性.×400Fig 5 The GCT cells()showing VIP-immunoreactivity.×400  

11、;  6示顆粒曲管細胞()呈NPY免疫反應性.×400Fig6 The GCT cells()showing NPY-immunoreactivity.×4002.隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)頜下腺是含生物活性物質(zhì)最多的器官之一。最新研究發(fā)現(xiàn)頜下腺還含有轉(zhuǎn)化生長因子12、肝細胞生長因子3等生物活性物質(zhì)，可見頜下腺對機體功能意義越來越顯得重要。本實驗觀察到，大鼠頜下腺中含有SOM、SP、VIP和NPY，這些神經(jīng)肽的免疫染色強度不盡相同，主要分布于GCT細胞中。我們認為大鼠頜下腺GCT細胞含有上述多種神經(jīng)肽，它們可能以內(nèi)分泌方式釋放入血，或直接釋放入導管系統(tǒng)，構(gòu)

12、成唾液的一部分進入消化道，對相關(guān)器官和組織的生理活動起著一定的調(diào)節(jié)作用。有資料報道：NPY使動脈血管收縮，增加血流阻力，減少血流量4。而SP和VIP直接作用于血管平滑肌，使血管擴張5。我們推測，GCT細胞內(nèi)的SP、VIP和NPY還可能以旁分泌的方式釋放到組織間隙，通過調(diào)節(jié)局部血流量而影響腺泡的分泌活動。生長抑素是一種內(nèi)分泌激素，同時亦具有神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)質(zhì)的作用。GCT細胞中SOM的存在對上述各種神經(jīng)肽的釋放可能有調(diào)節(jié)作用。作者簡介：賈雪梅(1959)，女，浙江長興人，醫(yī)學碩士，教授作者單位：賈雪梅（安徽醫(yī)科大學組織學胚胎學教研室，合肥230032）齊威琴（安徽醫(yī)科大學組織學胚胎學教研室，合肥

13、230032）王惠珠（安徽醫(yī)科大學組織學胚胎學教研室，合肥230032）蔡龍虎（安徽醫(yī)科大學組織學胚胎學教研室，合肥230032）參考文獻：1Barka T. Biologically active polypeptides in submandibular glandJ. J Histochem, 1980, 28(8):836-859.2Mogi M, Matsuura S, Suzuki H. Differential expression of transforming growth factor-alpha and epidermal growth factor during postnatal development of rat submanibular glandJ. Biochem Biophys Res Commun, 1995,217(1):271-277.3Amano O, Matsumoto K, Nakamura T. Expression and localization o