黃蛭口服液的制備工藝研究

1、【摘要】目的：探討黃蛭口服液的最佳制備工藝。方法：以總氮的含量為指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)提取純化工藝進(jìn)行優(yōu)化，考察提取溶媒、提取時(shí)間、提取次數(shù)、醇沉濃度對(duì)總氮含量的影響。結(jié)果：黃蛭口服液的的最佳提取純化工藝為：用水作為提取溶媒，煎煮2次，每次煎煮2 h，醇沉濃度為60%。藥液經(jīng)冷藏處理和調(diào)pH值為4.905.30，能使成品達(dá)到最佳澄明度與穩(wěn)定性。結(jié)論：優(yōu)選得到的工藝穩(wěn)定可行，適合工業(yè)大生產(chǎn)要求。 【關(guān)鍵詞】黃蛭口服液 制備工藝 正交試驗(yàn) Abstract Objective：To establish the optimal preparation procedure of Huan

2、gzhi oral liquid. Methods： 3 levels from each of the amount of four factors extracting solvent, extracting time, extracting number and alcohol precipitation concentration were subjected to the orthogonal design with the content of total nitrogen as an index. Results：The most favorable extraction was

3、 as follows: adding water into Chinese medical materials, and boiling for 2 h each time, extracting 2 times in all, 60% alcohol precipitation concentration.Conclusion： This technological process is stable, feasible, and suitable for the requirement of production on a large scale. Key wordsHuangzhi o

4、ral liquid; preparation technological process；orthogonal design黃蛭口服液系廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山中醫(yī)院研制的純中藥制劑，由大黃、水蛭、牛蒡子3味中藥組成，具有活血化瘀、行氣化濁的功效，能明顯改善患者的血液黏稠度及左室肥厚 1；也可明顯改善高脂血癥血瘀痰濁證候患者的血脂水平和臨床癥狀，作用優(yōu)于丹田降脂丸 2。臨床主要用于高脂血癥、高血壓、冠心病、腦血管意外等。 為確保制劑產(chǎn)品質(zhì)量，保證用藥的安全有效，筆者按照中藥新藥研究規(guī)范，根據(jù)以上幾味中藥的理化性質(zhì)，以水蛭中總氮的含量為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選了該口服液的提取與純化工藝條件，并通

5、過對(duì)藥液進(jìn)行冷藏處理和調(diào)節(jié)藥液pH值的方法來研究其對(duì)成品藥液澄明度與穩(wěn)定性的影響，從而確定該口服液的最佳制備工藝。 1 實(shí)驗(yàn)材料 1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 半微量凱氏蒸餾裝置（廣州玻璃儀器廠）；DF-808A高精度數(shù)字pH/離子計(jì)（廣州市登峰儀器廠）；JA1203電子天平（上海天平儀器廠）；電熱恒溫水浴鍋（上海衡平儀器儀表廠）。 1.2 藥品與試劑 大黃、水蛭、牛蒡子藥材購(gòu)自廣州致信中藥有限公司，水蛭經(jīng)本院梅全喜教授鑒定為水蛭科動(dòng)物螞蟥Whitmania pigra Whitman，其余藥材均符合2005年版中國(guó)藥典的要求。所用試劑均為分析純，水為重蒸餾水。 2 方法與結(jié)果 2.1 提取與純化工藝優(yōu)選

6、 2.1.1 正交因素水平確定 根據(jù)處方中各藥材理化性質(zhì)及常規(guī)口服液制備工藝特點(diǎn)，選擇提取溶媒（A）、提取時(shí)間（B）、提取次數(shù)（C）、醇沉濃度（D）4個(gè)因素，每個(gè)因素各取3個(gè)水平進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，以總氮含量為考察指標(biāo)。具體因素水平表見表1。 2.1.2 總氮含量的測(cè)定 2.1.2.1 消解 按中國(guó)藥典2005年版一部附錄氮測(cè)定法中半微量法測(cè)定總氮含量 3。精密量取樣品溶液各0.2 mL，無損失地轉(zhuǎn)入凱氏燒瓶中，加入0.3 g無水硫酸鈉與30的硫酸銅溶液5滴，再沿瓶壁滴加硫酸2.0 mL和數(shù)粒玻璃珠，充分混勻。將上述燒瓶置于通風(fēng)櫥內(nèi)的電爐上加熱，使溶液保持在沸點(diǎn)以下，不時(shí)振搖，炭化至泡沫

7、消失，然后加大火力，沸騰至溶液變成澄明的綠色后，繼續(xù)加熱10 min。 2.1.2.2 蒸餾 另取2硼酸溶液10 mL，置于100 mL錐形瓶中，加甲基紅溴甲酚綠混合指示液5滴，將冷凝管尖端插入液面下。然后將凱氏燒瓶中的內(nèi)容物經(jīng)漏斗轉(zhuǎn)入蒸餾瓶中，少量用水淋洗凱氏燒瓶和漏斗數(shù)次，再加入40氫氧化鈉溶液10 mL，用少量水洗滌漏斗數(shù)次，加熱進(jìn)行蒸汽蒸餾，使蒸汽通過冷凝管進(jìn)入收集瓶?jī)?nèi)，至硼酸溶液開始由酒紅色變?yōu)樗{(lán)綠色起，繼續(xù)蒸餾約10 min后（餾出液容積約為70 mL），將冷凝管尖端提出液面，蒸汽繼續(xù)沖洗約1 min，用水淋洗尖端后停止蒸餾。 2.1.2.3 滴定 餾出液用硫酸滴定液（0.005

8、molL-1）滴定至溶液由藍(lán)綠色變成灰紫色，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，記下所消耗硫酸滴定液的體積（V1）。 2.1.2.4 空白試驗(yàn) 精密量取同等體積的蒸餾水代替試樣，同前操作步驟進(jìn)行空白測(cè)定，記下所消耗硫酸滴定液的體積（V2）。 2.1.2.5 總氮含量計(jì)算 按所消耗每1 mL硫酸滴定液（0.005 molL-1）相當(dāng)于0.140 1 mg的氮計(jì)算，計(jì)算公式如下。 2.1.3 正交試驗(yàn)與結(jié)果分析 2.1.3.1 正交試驗(yàn) 按處方比例準(zhǔn)確稱取大黃、水蛭、牛蒡子藥材共18份（每次試驗(yàn)平行2次），分別按L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)。用水作為溶媒時(shí)直接加水煎煮，用乙醇作為溶媒時(shí)分別加相應(yīng)濃度乙醇回流

9、即可。提取液醇沉后，回收乙醇，浸膏加蒸餾水溶解至規(guī)定容量，備用。精密量取上述溶液0.2 mL，按2.1.2方法測(cè)定總氮含量。平行試驗(yàn)2次，取平均值，測(cè)定結(jié)果見表2。再用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3。 2.1.3.2 極差方差分析 由表2極差R值可知，RARBRC RD，影響因素大小順序?yàn)锳BCD，即提取溶媒是影響浸出物量的重要因素，醇沉濃度影響最小。由表3也可看出，A、B、C因素都有顯著性差異，而D因素對(duì)總氮含量的影響無顯著差異。 2.1.3.3 試驗(yàn)結(jié)果綜合分析 通過直觀分析和方差分析可以看出，A、B、C因素為主要影響因素，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果具有顯著影響，理論上應(yīng)各取其

10、好的水平，為A1、B3、C3。D因素即醇沉濃度為次要影響因素，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響無顯著差異，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際情況，可選取其適當(dāng)水平為D2；而C因素（提取次數(shù)）各水平雖有顯著性差異，理論上應(yīng)選擇3次提取，但通過分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，可以看出，提取2次與提取3次總氮提取率相差不大，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際情況，從縮短生產(chǎn)工藝和降低成本方面考慮，把提取次數(shù)確定為2次，即C2。所以確定本方的提取純化工藝條件為A1B3C2D2，即原方藥材用水作為提取溶媒，煎煮2次，每次煎煮2 h，將藥液濾過，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.20左右，加入乙醇使醇濃度達(dá)60進(jìn)行醇沉。 2.1.4 驗(yàn)證試驗(yàn) 為進(jìn)一步確定此工藝的合理性,按照正交試驗(yàn)優(yōu)

11、選的工藝條件A1B3C3D2進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，按前述方法測(cè)出總氮含量，其結(jié)果分別為：12.3 mg/mL，12.6 mg/mL，11.8 mg/mL。與正交試驗(yàn)各工藝結(jié)果比較總氮得率較高，表明本方水溶性有效成份基本提取完全，該工藝條件是可行的。由驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)一步確證此工藝為最佳提取純化工藝。 2.2 藥液澄明度穩(wěn)定性工藝研究 2.2.1 藥液的冷藏處理研究 取回收乙醇后的浸膏加足量蒸餾水溶解至規(guī)定量，將藥液平均分為兩份。一份直接過濾澄清，另一份置（48）冷庫(kù)中放置24 h，取上清液過濾澄清，對(duì)比兩種處理方式的藥液穩(wěn)定性，結(jié)果見表4。試驗(yàn)結(jié)果表明：藥液經(jīng)冷藏處理后，產(chǎn)生橡膠狀的沉淀，上清液經(jīng)過濾后澄明

12、度穩(wěn)定性得到提高。 2.2.2 成品pH值與藥液澄明度穩(wěn)定性的研究 藥液的pH值對(duì)成品的澄明度穩(wěn)定性有較大的影響，通過調(diào)節(jié)藥液的pH值并進(jìn)行觀察，從而確定成品較好的pH值范圍，結(jié)果見表5。試驗(yàn)結(jié)果提示：隨著藥液pH值的升高，有利于藥液的澄明度與穩(wěn)定性，但同時(shí)加深了藥液顏色并增加了藥液的腥味，所以，較好的pH值范圍是4.95.3。 3 討 論 黃蛭口服液主要有活血化瘀的功效，方中水蛭為君藥，其主要成分多為各種氨基酸和多肽，氨基酸在生物機(jī)體代謝中起著重要作用，直接參與合成各種酶、激素和調(diào)節(jié)人體內(nèi)代謝的平衡。氨基酸在水蛭活血化瘀的功效中起著重要的作用，提取液中總氮含量的多少可以反映氨基酸提取效果的優(yōu)劣。因此，采用凱氏定氮法測(cè)定總氮含量作為工藝研究的評(píng)價(jià)指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)表明，該方法操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、可行。 黃蛭口服液是在湯劑基礎(chǔ)上改進(jìn)而成，其提取純化工藝直接影響到制劑質(zhì)量和臨床應(yīng)用效果。通過以上實(shí)驗(yàn)確定其提取純化工藝為A1B3C2D2，即原方藥材用水作為提取溶媒，藥材加水煎煮2次，每次煎煮2 h，將藥液濾過，合并2次濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.20左右（50 60 ），加入乙醇使醇濃度達(dá)60，置冰箱內(nèi)放置24 h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，所得的浸膏加適量蒸餾水稀釋至足量。 澄明度是口服液質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)，本產(chǎn)品由于含生藥量較高，并且含動(dòng)物類藥材，筆者通過對(duì)