染色體步移技術(shù)研究進(jìn)展_圖文

1、 年 第 期 梁 成 真 等 ： 色 體 步 移 技 術(shù) 研 究 進(jìn) 展 染 特 異 引 物 簡 并引 物 ： 蘭 利用 和為引物 進(jìn) 行 的第一 次 反應(yīng) 次高 特異 性循 環(huán) 次低特 異 性循 環(huán) 次較 低特 異 性循 環(huán) 次較低 特 異性 循環(huán) 次 循 環(huán)（ 超級 循環(huán) ） 高特異 性 循環(huán) 次 特 異性 產(chǎn) 物（ ） 一 一一一一 卜 非 特異 性產(chǎn) 物（ ） 非特 異性 產(chǎn)物 （ ） 亡 一 二 高 否 ； 釋 稀 倍 利 用 引物 進(jìn) 行第 次 反應(yīng)（ 次超級 循 環(huán)） 一 塹 生 亡二 墨 主 一 絲 高 （ 以檢測 到） 可 很低 （ 能檢測 到） 不 釋 稀 倍 利 用 引物

2、 進(jìn)行 第 和 次 反應(yīng)（ 超級 循 環(huán)或普 通 反應(yīng) ） 異性 產(chǎn)物 （ 二 一 特 ） 一 一 高 （ 以檢 測 到） 可 瓊脂 糖凝 膠 分析 直 接測 序或 用 作探針 圖 原 理 示 意 圖 討 論 和 展 望 以上介 紹 的幾種 方法 基本 上代 表 了現(xiàn)有 的染 色 體 步移 技術(shù) ， 根據(jù) 其特 點及 試驗 材 料 的要 求 ， 選擇 恰 當(dāng)?shù)姆椒?是 必須 考慮 的 ， 此對 以上 幾 種 方 法 進(jìn) 行 因 綜合 比較 （ 。 表 ） 結(jié)合基 因組文庫 的染 色體 步移 技術(shù) 是在 技 術(shù)發(fā) 明以前分離側(cè)翼 序列 的惟 一方 法 ， 目前 仍然 為廣 于需要 構(gòu)建基 因組

3、文庫 ， 過程 繁瑣 ， 工程浩 大 ， 時費 費 力， 且成本 較高 ， 因此 對 于近距 離 單 基 因 的染 色體 步 移， 人們更 傾 向于利 用 的方法 。 基于 的染 色 體 步 行 技 術(shù) 最 主 要 的 問題 在 于如 何從 序列 信息 未知 的條 件下 設(shè)計 兩個 特異 性引 物 來 擴(kuò) 增 未 知 區(qū) 域 。 連 接 成 環(huán) 、 源 接 頭 介 導(dǎo) 外 以及半 隨機(jī) 引物 代 表 了 種 不 同 的解 決 策略 。 是 最 早 應(yīng) 用 于 染 色 體 步 移 的一 種 方 大科研工 作者所采用 ， 其最突 出的優(yōu) 點在 于步移 距離 較長 、 速度 較快 ， 進(jìn) 行連 續(xù)

4、步移 弄 清跨 度 為 數(shù)百 個 可 法 ， 作 簡單 ， 操 一次 反應(yīng) 能 同時分 離 到 目的片段 兩側(cè) 的序列 ， 但對 于模板 的質(zhì) 量和 數(shù)量 要求 嚴(yán)格 ， 如果 存 在 合適 的酶 切 位 點 ， 優(yōu)化 自連 體 系 ， 片 段 相 在 對 較 小 時 仍 然 是 理 想 的 選 擇 。外 源 接 頭 介 導(dǎo) 的 策 略近年 來應(yīng) 用 比較 多 ， 其在 側(cè) 翼 序 尤 千堿基 （ 的連接 片段 ； ） 同時 ， 以一 次性 獲 得數(shù) 個 可 包 括 啟 動 區(qū) ， 控 區(qū)等 在 內(nèi) 的完 整 的基 因 的 核 苷 酸 序 調(diào) 列信息 ， 適用 于遺傳背景 不是很清 楚 的情況

5、 下通過 分 子標(biāo)記克 隆未知新 基 因以及 具有 高 度重 復(fù) 序列 或 具 有復(fù) 雜結(jié) 構(gòu) 的核苷 酸 片段 的染 色體 步 移 等 。但 是 由 列 分析 方面 ， 但是 該方 法操 作過 程 相對 復(fù)雜 ， 有時 還 生 物 技 術(shù) 通 報 年 第 期 物 理 剪 切 法 構(gòu) 建 亞 不 需 要 克 隆 文 庫 是 需 要 大 量 連 接 效 率 費 時 費 力 不 存 在 限 制 性 內(nèi) 切 酶 法 構(gòu) 建 亞 克隆 文 庫 需 要 是 需要 大 量 連接 效 率 合適 酶 切 位 點 不 存 在 需 要 需 要 是 是 自身連 接 效 率 連接 效 率 形 成 環(huán) 狀 的 條 件

6、連 接 條 件 費 時 費 力 方 向和 分 布 特 殊 的 重 復(fù)序 列 引 物設(shè) 計 需要 種 引 物 分 子 間連 接 低 低 來 自 特 異 性 的 單 引 物 擴(kuò)增 來 自 特 異 性 的 單 引 物 擴(kuò)增 來 自 間 的 擴(kuò) 增 中等 中等 需 要 是 中等 中 等 新 不需 要 無 高 中等 不 需 要 無 來 自 引 物 的 單 引 物 擴(kuò)增 來 自隨機(jī) 引物 的 單 引 物 擴(kuò) 增 高 高 不 需 要 無 復(fù) 性 溫 度 隨機(jī) 引 物 設(shè) 計 高 高 需 要末端 加尾 、 磷酸 化或磷 酸化 等處理 ， 去 并且 擴(kuò)增 長度 較短 ， 非特異 擴(kuò)增 的風(fēng) 險較大 ， 不適合

7、大規(guī)模 的 樣 品分析 ， 是對 于 同一 樣 品 進(jìn)行 連 續(xù) 步 移或 者 多 但 點 同時 步 移 時 ， 技 術(shù) 就 成 為 了 理想 的 選 擇 。 以 新 法 、 和 法法 為代表 的半 隨機(jī)引 物 策 略 ， 試驗 步驟 簡單 ， 自動化程 度 高 ， 步行 距 離 長 ， 而且 擴(kuò) 增 特異 性 高， 因此非 常適合 大規(guī)模 的分 離側(cè) 翼序列 ， 尤其 在大 規(guī)模 分析 突變體 插入位 點方 面具有 絕對 的優(yōu)勢 。但 是 ， 隨機(jī) 引物 也有 不盡 人意 之處 ， 半 比如 新 擴(kuò)增 區(qū)域 包 含有 較 短 的 重 復(fù)序 列 時 ， 往往 得 不 到 目的 產(chǎn) 物 ， 和

8、生 中重要性 的不斷提高 ， 利用染色 體步移技 術(shù)克隆重 要功能 的新 基因也將越來越普遍 ， 信隨著眾 多科研 相 工作 者 的不懈 努 力 ， 色體 步 移新 技 術(shù) 將會 不 斷涌 染 現(xiàn)， 染色體步移也將會更 加簡單 、 快速 。 參 考 文 獻(xiàn) 王 閔 霞 ， 欣 榮 ， 天 山 ， 應(yīng) 用 與 環(huán) 境 生 物 學(xué) 報 ， 馬 王 等 ， （ ） ： ， ， ， ， ： ， ， ， ， ，： ， ， ， ， ， 。 ： 隨機(jī)簡并 引物存 在 有 限 的結(jié) 合 位點 ， 于高 度重 復(fù) 對 的序列 ， 即使使用 不 同的 簡并 引 物 也難 以擴(kuò)增 獲 得 陽性 結(jié)果 。因此 ， 在

9、實 際操作 中研 究者往往將上述方 王 文 明 ， 光懷 ， 世 全 ， 傳 學(xué)報 ， （ ： 江 王 等 遺 ， ） 王 省 芬 ， 擁 民 ， 桂 寅 ， 花學(xué) 報 ， （ ） 鄭 張 等 棉 ， ： 法 中的兩個或兩個 以上的技術(shù)聯(lián)合使 用 ， 尤其是 結(jié)合 基因組文庫 的染色體 步移技 術(shù)與結(jié)合 的染 色體 步移技術(shù)在試驗 中的聯(lián)合 使用 ， 二者 優(yōu) 勢互 補(bǔ) ， 現(xiàn) 實 了長距離快速染 色體 步移 。隨著 生命科 學(xué) 在 國計 民 張 俊 成 ， 秀 英 ， 佳 潔 ， 類 作 物 學(xué) 報 ， ： 孔 吳 等 麥 ， （ ） 洪 楊 ， 虹 物 化學(xué) 與生 物 物 理 進(jìn) 展 ，

10、（ ） 雷 生 ， ： ， ， ， ： （ 下轉(zhuǎn) 第 頁） 加 年 第 期 黃 新 等 ： 物 傳 感 器 在 轉(zhuǎn) 基 因產(chǎn) 品 檢 測 中 的研 究 進(jìn) 展 生 ， ， ， ： ， ， ， ， ， ： ， ） ， （ ： ， ， ： ， ， ， ， ， ， ， ， （ ）： ， ， ， ， ， ， ， ， ， ，（ ）： ， ， ， ， （ ）： ， ， ， （ ） ： ， ， ， ， ， （ ） ： ， ， ， （ ， ）： （ ， ， ）： ， （ ） ， ， ： ， ， ： ， （ ） ， ， ， ： ， ， ， ： ， ， ， （ ： ， ， ） ， ， ， 。 ， ： ， ， ，

11、， ， ： ， ： ： 卯 ， ， ， 粥 ， ， ， ： ， ， ： ， ， ， ： ， ， ， ， ： ， ， ， ： ， ， ， ， ： （ ）： ， ， ： ， ， ， ， ， ， （ ， ， ）： ， ，（ ） ： ， （ 上接 第 頁） ， ， ， ， ： ， ， ， ： ， ， ， ， ， ： ， ， ， ： ， ， ： ， ， ， ， ： ， 洪宇植 ， 肖亞 中 ， 偉 ， 光 生 物 學(xué) 報 ， ， ： 房 等 激 （ ） ， ， ， ： ， （ ） ， ， ： ， （ ） ， ， ， ： ， ， （ ） ， ， ， ： （ ） ， ， ， ： ， ， ， ： ， （ ） ， ， ： （ ： ， ， ， ） 洪 登 峰 ， 麗 麗 ， 光 圣 子 植 物 育 種 ， ： 萬 楊 分 ， （ ） ， （ ， ， ）： （ ： ， ， ， ） ， ， ， ） （ ： ， ， ，