陰離子交換色譜-脈沖安培檢測法測定奶粉中羥脯氨酸

1、陰離子交換色譜-脈沖安培檢測法測定奶粉中羥脯氨酸摘要：介紹了陰離子交換色譜柱分離，脈沖安培法檢測奶粉中羥脯氨酸的方法。奶粉樣品經(jīng)酸水解后可直接進(jìn)樣檢測，脈沖安培檢測器檢測羥脯氨酸的檢出限在0.04 mol/L，并具有較寬的線性范圍（0.1-10 mol/L）。離子色譜-脈沖安培檢測法測定奶粉中的羥脯氨酸，具有無需衍生、操作簡便，靈敏度高等優(yōu)點，可作為奶粉中違法摻加皮革水解蛋白與否的判斷依據(jù)。 關(guān)鍵詞 陰離子交換色譜，脈沖安培檢測，奶粉，羥脯氨酸 一、引言 動物皮革水解蛋白是一種廉價蛋白原料，是將牛皮及其制品下腳料等粗加工后制成的水解蛋白質(zhì)。由于該蛋白產(chǎn)品中蛋白質(zhì)含量可高達(dá)85% 以上，且成本極

2、為低廉，某些非法廠家為降低生產(chǎn)成本，在乳粉和其它乳制品中摻入廉價的水解動物蛋白來冒充或替代乳蛋白質(zhì)1,2。國家衛(wèi)生部于2009年2月公布的食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)名單(第二批)的通知中明確規(guī)定乳及乳制品、含乳飲料中禁止添加皮革水解蛋白。皮革的主體蛋白類型為膠原蛋白，而羥脯氨酸則是膠原蛋白中特有的氨基酸，約占膠原蛋白氨基酸總量的10%。而乳蛋白質(zhì)則不含羥脯氨酸，因此常將羥脯氨酸含量作為奶粉及乳飲料產(chǎn)品摻假與否的證據(jù)。 目前國內(nèi)對羥脯氨酸的檢測方法主要有分光光度法3、高效液相色譜法1、氨基酸分析儀法2等。其中比色法雖然操作簡便，但因為缺乏分離手段而容易導(dǎo)致假陽性。由于大部分氨基酸都不具備常見

3、檢測器的可檢基團(tuán)，因而液相色譜法、氨基酸分析儀都需要先經(jīng)過衍生后方可被檢測。離子色譜脈沖安培檢測法4測定氨基酸是一種新型技術(shù)，其主要通過檢測氨基在金電極表面反應(yīng)電流變化，因而無需衍生，操作簡便。文中介紹了離子色譜法用于測定奶粉中羥脯氨酸的方法，奶粉樣品經(jīng)酸水解后經(jīng)離子色譜柱分離，脈沖安培檢測器直接檢測，對多種奶粉中羥脯氨酸的含量進(jìn)行準(zhǔn)確測定。 二、實驗部分 2.1 儀器和試劑 ICS-3000型離子色譜儀（Dionex，美國），帶有Ag工作電極、pH/Ag/AgCl 復(fù)合參比電極、Ti對電極的ED3000電化學(xué)檢測器；Chromeleon 6.80 色譜工作站； Nanopure超純水機(jī)(Th

4、ermo Scientific Barnstead，美國)；0.22 m微孔尼龍膜（天津富集） 2.2 前處理方法 平行稱取奶粉樣品兩份50-100 mg 固體樣品到安培瓶中，加入6 mol/L鹽酸溶液10 mL，液氮冷凍后抽真空，在酒精噴燈上燒結(jié)瓶口，于110 恒溫干燥箱中水解22 h。冷卻后，混勻，開管，用移液管吸取200 L濾液，置濃縮儀中蒸發(fā)至干。加入2 mL 0.02 mol/L鹽酸和0.02 g/L疊氮化鈉混合溶液，搖勻后備用。測定前，取500L該樣品溶液，以0.02 g/L疊氮化鈉溶液稀釋至10 mL，搖勻后過濾后可直接進(jìn)樣分析。 2.3 測定條件 分析柱：AminoPac PA

5、10，250×2 mm； 保護(hù)柱：AminoPac PA10，50×2 mm； ED 3000脈沖安培檢測，Au工作電極電極，PH/Ag/AgCl參比電極模式，氨基酸電位波形。 淋洗液條件：AminoPac PA10使用說明中Table 3“radient Conditions for Amino Acids and Carbohydrates”，其中添加42.2-44.2min，0.1 mol/L HOAc沖洗步驟。 流速：0.25 mL/min ；進(jìn)樣方式：自動進(jìn)樣，25 L ；柱溫：30 。 三、 結(jié)果與討論 3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線和方法檢出限 氨基酸在0.1-10 mol

6、/L范圍內(nèi)具有良好的線性，線性相關(guān)系數(shù)（R2）為0.9999。根據(jù)三倍信噪比可計算出羥脯氨酸的方法檢出限在0.04 mol/L，也即5g/L，具有較高的靈敏度。圖1 . 某奶粉樣品水解后氨基酸分離譜圖3.2 樣品測試 分別對四種奶粉樣品經(jīng)酸水解后進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)這幾種奶粉中確實存在羥脯氨酸，圖1為經(jīng)空白校正后的奶粉水解液的樣品色譜圖。但2#樣品中的羥脯氨酸含量明顯較低，考慮到摻假如此低不存在太明顯利益效果，懷疑是某奶粉營養(yǎng)添加劑引入了羥脯氨酸。而其余三個樣品中存在的羥脯氨酸含量都在0.3%甚至1%左右，懷疑其存在摻假可能。 表1. 樣品測定結(jié)果四、結(jié)論 離子色譜-積分脈沖安培法檢測奶粉中羥脯氨酸無需衍生即可直接進(jìn)樣分析，測試成本較低。且由于使用安培檢測器因而具有較高的靈敏度，可檢測到樣品水解液中0.1 mol/L的羥脯氨酸，因而更加適用于奶粉及乳制品中皮革水解蛋白摻假的檢測。 參考文獻(xiàn) 1. 金蘇英，林笑容，趙志紅，等，飲料工業(yè)，2009，7：2830 2. 曾暖茜 王