選擇性鈉氫離子交換抑制劑預處理對未成熟心肌的保護作用

1、    選擇性鈉/氫離子交換抑制劑預處理對未成熟心肌的保護作用            作者：時間：2007-11-22 12:26:00                          &

2、#160;          作者：周榮華 ，劉斌，劉進，關彬，張艷婉，史世勇，溫福興，龍村 【關鍵詞】  缺血再灌注損傷    摘要：目的 研究選擇性Na+/H+ 交換抑制劑HOE642（Cariporide）預處理對未成熟心肌缺血/再灌注損傷的保護作用及機制。方法 20只健康新西蘭幼兔（34周齡），利用Langendorff左室做功模型灌注其離體心臟,建立全心缺血/再灌注模型。KH液自主動脈逆行灌注心臟，向球囊緩慢注入生理鹽水，調(diào)整至左室舒張末壓（LVEDP）為

3、10mmHg, 做功20 min，隨機分為兩組，組: 對照組，繼續(xù)灌注15min；組：HOE642預處理組，用加入HOE642的KH液（濃度為5mol/L）繼續(xù)灌注15min。然后兩組心臟均以St.Thomas停搏液誘導停跳，常溫（37）缺血45min（保濕保溫），再灌注60 min。記錄冠脈流量（CAF），多導生理記錄儀記錄左心功能指標， 原子吸收分光光度計測定心肌細胞內(nèi)鈣（Ca）含量,自動生化分析儀測量冠脈流出液中磷酸肌酸激酶（CK）、磷酸肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脫氫酶（LDH）漏出量含量，計算心肌含水量，透射電鏡觀察心肌超微結(jié)構改變。結(jié)果  CAF、左室發(fā)展壓（LVD

4、P）、左室壓力微分（±dp/dtmax）恢復率，心肌組織內(nèi)Ca 及心肌含水量，心肌超微結(jié)構變化，HOE642預處理組明顯優(yōu)于對照組（P<0.05）。結(jié)論 HOE642預處理通過減少細胞內(nèi)鈣超載，模擬缺血預處理的心肌保護效果，對未成熟心肌缺血/再灌注損傷有明顯的保護作用。關鍵詞：Na+/H+ 交換;預處理;未成熟心肌;缺血再灌注損傷;鈣超載Selective Na+/H+ Exchanger Inhibitor HOE642 Preconditioning Exihibits Markedly Protective Effect on Immature Rabbit Hearts

5、Abstract: OBJECTIVE  To investigate the protective effect of HOE642 Preconditioning against ischemia-reperfusion injury on immature myocardium and its mechanisms.METHODS The Langendorff perfused isolated working immature rabbit heart model was established. After perfused by Krebs-Henseleit buff

6、er solusion bubbled with 95%O25%CO2 gas mixture at 70cmH2O for 20min, 20 isolated hearts of New Zealand healthy white immature rabbits (34 weeks old ,weighing 300g350g) were randomly divided into 2 groups:the group:the control group(n=10)；group:HOE642 preconditioning group(n=10). In group ,the heart

7、s were perfused for 15min by Krebs-Henseleit buffer;In group , HOE642(5mol/L)was added to Krebs-Henseleit buffer and the hearts were perfused for 15min .Then St.Thomas solution was used ,and all hearts were subjected to 45min global ischemia and 60min reperfusion. Perfusate temperature and ischemic

8、heart temperature were both maintained at 37. Myocardial calcium content was examined . Hemodynamicsvariables(LVDP, ±dp/dt),myocardial water content(WC), coronory artery flow (CAF),leakage of myocardial enzyme(CK,CK-MB,LDH)were also calculated. Myocardial and endothelial structures were observe

9、d under election microscope.RESULTS  (1)Myocardial function: LVDP, ±dp/dt, CAF recovery was markedly higher in group than that in group (P<0.01 or P<0.05). (2) Myocardial calcium content was markedly lower in group (P<0.01).(3) Myocardial enzyme is significantly lower in  gro

10、up than group (P<0.05).(4)Myocardial water content(WC) was markedly lower in group(P<0.01) .(5) Myocardial structure: group was optimal with better protective effect on myocardial structure and endothelium of coronary artery.CONCLUSION  HOE642 Preconditioning provide a significantly prote

11、ction against ischemia-reperfusion injury on immature myocardium, mostly through reducing myocardial calcium overload.Key words：Na+/H+ exchanger; Preconditioning; immature myocardium ;Ischemia-reperfusion injury;  Calcium overload隨著心血管外科、體外循環(huán)及圍術期處理水平的提高，越來越多的先心病患兒在嬰幼兒期、新生兒期進行早期手術治療。術中良好的心肌保護是術后

12、存活的關鍵，與未成熟心肌生理功能相適應的、有別于成熟心肌保護措施的尋求是小兒心臟外科關注的焦點1。這也為將來胎兒體外循環(huán)的心肌保護提供依據(jù)。防治心肌缺血/再灌注損傷是心肌保護的關鍵，藥物預處理是防治心肌缺血/再灌注損傷的有效措施。近年,心肌細胞鈉氫通道（Na+/H+ exchanger,NHE1） 介導缺血/再灌注損傷的機制逐漸受到重視，有研究報道Na+/H+ 交換抑制劑對成熟心肌有保護作用2 。HOE642（cariporide）是第一個進入臨床研究的NHE1拮抗劑，本實驗探討了HOE642預處理防治未成熟心肌缺血/再灌注損傷的作用及機制。1材料與方法  1.1 實驗藥品及儀器&#

13、160;                     HOE642（Cariporide）(德國Aventis Pham公司惠贈), Langendorff灌流裝置,Powerlab多導生理記錄儀（Bridge AD Instrument PTY Ltd, Australia ,Chart v5.0），P-300生理壓力傳感器（北京金三江傳感技術有限公司），滾壓泵（Stockert,德國）,混合氣（O

14、2:CO2=95%,北京普萊克斯公司），超純水（SZ-93自動雙重純凈水蒸餾器，上海亞容生化儀器廠），Krebs-Henseleit重碳酸鹽緩沖液（KH液）（mmol/L）:NaCl 118.5、NaHCO3 25.0 、KH2PO4 1.2 、KCL 4.8 、 MgSO47H2O  1.2、 CaCl22H2O 1.8 、葡萄糖11.0 ，pH (7.4±0.5)。1.2 建立實驗模型               

15、0;      健康純種新西蘭大耳白兔，34周齡，雌雄不限，體重300350g（阜外心血管病醫(yī)院實驗動物中心提供）。以戊巴比妥鈉（30mg/kg）腹腔麻醉，經(jīng)耳緣靜脈肝素化（150IU/kg）,由劍突剪開胸腔，迅速剪開壁層心包，快速摘取心臟并浸入4KH液中，主動脈修剪及輕擠心臟排盡心腔余血后立即將心臟懸掛于Langendorff灌流裝置上，用恒溫循環(huán)器預先恒溫到37、95%O2+5%CO2混合氣平衡20min的KH液，自主動脈根部逆行灌注心臟，冠脈流出液不參與循環(huán)，主動脈灌注壓（CPP）為70 cmH2O，剪開肺動脈根部以利冠脈回流通暢。剪開左

16、心耳,將與多道生理記錄儀相連的小乳膠囊經(jīng)左心耳放于左室，通過Powerlab壓力換能器的換能作用，多道生理記錄儀能記錄心臟左室功能參數(shù)：左室發(fā)展壓（LVDP）、左室壓力微分（±dp/dtmax）。向球囊緩慢注入生理鹽水，調(diào)整至左室舒張末壓（LVEDP）為10mmHg，建立左室做功模型。1.3實驗分組                      37KH液平衡灌注心臟，做功20 min，將20枚幼兔心臟隨機分為兩組，組:對照組, 繼續(xù)灌注15min； 組：HOE642預處理組，用加入HOE642的KH液（濃度為5mol/L）繼續(xù)灌注15min。兩組心臟均以常溫St.Thomas停搏液20ml誘導停跳（灌注壓為80 cmH2O），常溫（37）缺血45min（保濕保溫），再灌注60 min，建立全心缺血/再灌注模型。 1.4 監(jiān)測指標