HPLC法測定注射用阿奇霉素的有關(guān)物質(zhì)

1、論著HPL C 法測定注射用阿奇霉素的有關(guān)物質(zhì) 作者簡介:易秋艷(1972,女,主管藥師易秋艷1,范時根2,楊梁1(1.四川省食品藥品檢驗所,四川成都610036;2.四川百利藥業(yè)有限責(zé)任公司,四川成都610045摘要目的:建立注射用阿奇霉素有關(guān)物質(zhì)的新檢測方法。方法:采用高效液相色譜法(HPL C 檢測注射用阿奇霉素中有關(guān)物質(zhì)。液相色譜條件為色譜柱:Waters XBridge TM Sheild RP18;流動相:乙腈2磷酸鹽緩沖液(取0.05mol/L 磷酸氫二鉀溶液,用20%磷酸溶液調(diào)節(jié)p H 值至8.6,流動相(5842;流速:1ml min -1;檢測波長為210nm ,柱溫:30

2、。結(jié)果:高效液相色譜法阿奇霉素的檢測限為4.6ng ,阿奇霉素主峰與雜質(zhì)峰分離完全。結(jié)論:高效液相色譜法靈敏度高,可量化,更適用于注射用阿奇霉素的有關(guān)物質(zhì)檢查。關(guān)鍵詞注射用阿奇霉素;高效液相色譜;有關(guān)物質(zhì)檢查中圖分類號R 927.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼A 文章編號100420188(20080520656203Determination of related compounds in azithromycin for injection by HPLCYI Qiu 2yan 1,FAN Shi 2gen 2,YAN G Liang 11.Bureau of Food and Drug Inspectio

3、n of Sichuan Province ,Chengdu ,610036,China ;2.Sichuan Bai 2Li Pharmaceutical Co.,Ltd ,Chengdu ,610045,China.Abstract Objective :To establish a new met hod to detect t he related compounds in azit hromycin for injection.Methods :The relatedcompounds in azit hromycin for injection were determined by

4、 high performance liquid chromatography (HPLC .The isolation was executed by Waters XBridge TM Sheild RP18Column and t he mobile phase consisted of acetonitrile 2phosphate buffer.Detection was carried out at wave lengt h of 210nm ,flow rate of 1ml min -1and temperature of 30.R esults :The metered li

5、mit of azit hromycin was 4.6ng by HPL C.The main and impurity peak of azit hromycin for injection were divided completely.Conclusion :The HPLC is sensitive and can be used for t he determination of related compounds in azit hromycin for injection.K ey w ords :azit hromycin ;HPLC ;related compound ;m

6、easurement阿奇霉素是新一代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,它通過抑制蛋白質(zhì)的合成而起作用。以往的注射用阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)均采用T LC 法檢測有關(guān)物質(zhì),該方法靈敏度欠佳,不能準(zhǔn)確、有效的控制注射用阿奇霉素中的有關(guān)物質(zhì),考慮到廣大病員用藥的安全可靠,本文參考有關(guān)文獻(xiàn)1,2,建立了HPLC 法測定注射用阿奇霉素中有關(guān)物質(zhì)的方法。該方法準(zhǔn)確、靈敏、簡便,適用于注射用阿奇霉素的有關(guān)物質(zhì)檢測。1儀器與試劑美國Waters 公司2695液相色譜儀,2487檢測器,Empower 色譜工作站(美國Waters 公司,Milli 2Q 超純水儀(MILLIPORE 公司,電子天平:Sartorius BP 211D ,

7、p H 計:METTL ER TOL EDO MA235。注射用阿奇霉素由四川百利藥業(yè)有限責(zé)任公司提供(規(guī)格:0.125g ,共3批9個批號。阿奇霉素對照品和紅霉素對照品均來源于中國藥品生物制品檢定所。乙腈為色譜純,其它化學(xué)試劑均為分析純;超純水(電阻率18.2M .cm 。2方法與結(jié)果2.1色譜條件用硅膠表面經(jīng)雜化處理的十八烷基硅烷建合硅膠為填充劑Waters XBridge TM SheildRP18(規(guī)格:250mm ×4.6mm ,5m ;以乙腈2磷酸鹽緩沖液(取0.05mol/L 磷酸氫二鉀溶液,用20%磷酸溶液調(diào)節(jié)p H 值至8.6,流動相(5842;檢測波長為210nm

8、 ;流速:1ml min -1;柱溫:30。取阿奇霉素對照品適量,用流動相制成約含阿奇霉素2mg/ml 的溶液;取上述溶液適量,于水浴中加熱30min ,冷卻,加乙腈使溶液體積與取用量大致相等,濾過,取續(xù)濾液100l 注入液相色譜儀,記錄色譜圖,阿奇霉素峰的拖尾因子不得過2.5,阿奇霉素峰的保留時間約為11min ,阿奇霉素降解產(chǎn)物和阿奇霉素峰間的分離度均應(yīng)符合規(guī)定,見圖1。圖1阿奇霉素系統(tǒng)適應(yīng)性試驗色譜圖2.2空白試驗輔料干擾:取本品的空白輔料制備空白輔料供試品溶液,取100l 注入液相色譜儀,記錄色譜圖,結(jié)果輔料對阿奇霉素峰無干擾,見圖2。 圖2輔料空白試驗色譜圖2.3破壞性試驗使用高溫、

9、強酸、強堿、氧化和光照條氫氧化鈉溶液2ml ,放置1h ,中和后,用流動相稀釋至10ml ;取1份加流動相5ml 溶解,于水浴中加熱60min ,用流動相定容至10ml ;另2份加流動相2ml 溶解后其中1份加30%過氧化氫1滴放置1h 后用流動相稀釋至10ml ;另1份于4000lx 光照12h 后用流動相稀釋至10ml 。在上述HPLC 條件下進(jìn)樣100l ,記錄色譜圖結(jié)果說明本法可檢出阿奇霉素的降解產(chǎn)物,且降解產(chǎn)物與阿奇霉素主峰分離良好。同時考察本品在該色譜條件下與紅霉素的分離度良好。2.4檢測限取阿奇霉素對照品依法配制阿奇霉素對照品溶液,逐步稀釋,進(jìn)樣,測定,結(jié)果當(dāng)進(jìn)樣量為4.6ng

10、時,信噪比為31;即在本方法中阿奇霉素的檢測限為:4.6ng 。2.5耐用性試驗因采用HPL C 法故對本方法的色譜條件進(jìn)行了耐用性實驗當(dāng)流動相的p H 為8.5或8.7時,阿奇霉素色譜峰的峰形雖不及8.6時的峰形好,但依然可進(jìn)行檢測。2.6有關(guān)物質(zhì)測定取本品,加流動相溶解并稀釋制成約含2mg/ml 的溶液,作為供試品溶液;精密量取1ml 置100ml 量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,作為對照溶液,取100l 注入液相色譜儀,按自身對照法計算雜質(zhì)含量,結(jié)果見表1。表1注射用阿奇霉素樣品有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果規(guī)格(g 批號最大雜質(zhì)峰(%其他雜質(zhì)峰(%2.7各已知雜質(zhì)與阿奇霉素的校正因子(1Azith

11、romycin N 2oxide 與阿奇霉素的相對保留時間為0.35,校正因子為0.62;(2N 2demethylazithromycin 與阿奇霉素的相對保留時間為0.48,校正因子為0.70;(3酸性降解產(chǎn)物(Desosaminylazithromycin 與阿奇霉素的相對保留時間為0.52,校正因子為1.66;(4azaerythromycin A 與阿奇霉素的相對保留時間為0.58,校正因子為0.77;(5Erythromycin A oxime 與阿奇霉素的相對保留時間為0.62,校正因子為2.94,其它未知雜質(zhì)與阿奇霉素的校正因子均為1。阿奇霉素與其雜質(zhì)混合物圖譜如圖3。 注:1

12、.azithromycin N 2oxide ;2.N 2denethylazithromycin ;3.desosaminylazithromycin ;4.azaerythromycin ;5.erythromycin A oxime ;圖3阿奇霉素與其雜質(zhì)混合物圖譜3討論3.1檢測波長的選擇取流動相配制的阿奇霉素對照品溶液于紫外分光光度計上掃描,在210nm波長處有最大吸收,故選擇選定檢測波長為210nm。3.2方法的選擇薄層色譜法測定注射用阿奇霉素時規(guī)定:“取本品適量,精密稱定,加無水乙醇使溶解并制成每1ml中含阿奇霉素20mg的溶液,作為供試品溶液;精密量取0.5ml,置50ml量瓶

13、中,用無水乙醇稀釋至刻度,搖勻,作為對照溶液(3;精密量取對照品溶液(31ml,置10ml量瓶中,用無水乙醇稀釋至刻度,搖勻,作為對照溶液(4。照薄層色譜法(附錄B試驗,精密吸取上述溶液各2l,分別點于同一硅膠G薄層板上,對照溶液(4應(yīng)顯一個明顯斑點,否則應(yīng)重新試驗。”由此可判斷TL C法檢測限約為40ng,此檢測限明顯高于本方法的檢測限(4.6ng,且在實際試驗中,TL C法的第4點要檢出還是很不容易,故HPL C法的靈敏度明顯優(yōu)于薄層色譜法(TL C,更有利于有關(guān)物質(zhì)的檢出。3.3色譜柱的選擇同時采用Waters Symmetry SheildTM RP18(規(guī)格:250mm×4

14、.6mm,5m色譜柱和ultimate TM X B2C18(規(guī)格:250mm×4.6mm, 5m色譜柱進(jìn)行試驗,發(fā)現(xiàn)這兩種色譜柱雖能進(jìn)行分離,但主峰拖尾嚴(yán)重,理論板數(shù)較低;隨著色譜柱技術(shù)的進(jìn)一步提高,色譜柱填料的雜化硅膠技術(shù)使現(xiàn)在新生產(chǎn)出的色譜柱對堿性化合物表現(xiàn)出優(yōu)良的保留效果,而且峰形更對稱,色譜柱適應(yīng)的p H值范圍更寬,所以選定硅膠表面經(jīng)雜化處理的十八烷基硅烷建合硅膠為填充劑的Waters X Bridge TM Sheild RP18(規(guī)格: 250mm×4.6mm,5m進(jìn)行試驗。參考文獻(xiàn)1姜建國,張西茹,楊梁,等.阿奇霉素中相關(guān)物質(zhì)的高效液相色譜2電噴霧電離2質(zhì)譜

15、分析J.藥物分析雜志,2003,23(5;3302332.告S.國食藥監(jiān)辦2007334號,2007.收稿日期:2008208201個案長期濫用糖皮質(zhì)激素致自發(fā)性乙狀結(jié)腸膀胱瘺1例田忠,耿協(xié)強(解放軍第59醫(yī)院腹部外科,云南開遠(yuǎn)661600關(guān)鍵詞糖皮質(zhì)激素;腸瘺;膀胱瘺;乙狀結(jié)腸中圖分類號R574.62文獻(xiàn)標(biāo)識碼B文章編號100420188(20080520658201病例陶某,男性,72歲,因排尿時排出糞渣3個月入院,無尿急、尿頻、尿痛及排尿困難,既往有慢性結(jié)腸炎病史10余年,自行在院外長期服用醋酸強的松、地塞米松治療。體檢:腹部無異常,未捫及包塊,無壓痛,肛門正常無瘺管,尿液靜置24h 呈

16、混濁狀,見大量糞便殘渣沉淀。尿常規(guī)檢查:WBC(+/HP;逆行膀胱造影檢查提示膀胱結(jié)腸瘺可能。腸鏡檢查:距肛門約20cm處可見一約(0.6×0.5cm瘺口,周圍黏膜糾集。膀胱鏡檢查:膀胱黏膜充血,膀胱內(nèi)無腫瘤潰瘍出血,膀胱容量>500 ml。膀胱底靠近左側(cè)輸尿管開口處見黏膜糾集,插管能順利通過,雙側(cè)輸尿管口顯示清晰。膀胱美藍(lán)試驗,糞便著藍(lán)色。診斷為乙狀結(jié)腸膀胱瘺。剖腹探查見膀胱內(nèi)無結(jié)石、腫瘤、潰瘍,膀胱三角區(qū)見糞便殘渣沉淀,靠近左側(cè)輸尿管處見黏膜糾集,插入F8號導(dǎo)尿管能順利進(jìn)入乙狀結(jié)腸,乙狀結(jié)腸與膀胱底部緊密粘連形成疤痕,術(shù)中分離膀胱與乙狀結(jié)腸,分別可見(0.6×0.5cm瘺口,手術(shù)切除膀胱瘺口及其周圍疤痕組織后縫合修補,術(shù)中未發(fā)現(xiàn)乙狀結(jié)腸和直腸腫瘤,切除乙狀結(jié)腸病灶段,遠(yuǎn)端閉合放回盆腔,近端行乙狀結(jié)腸單腔造口術(shù),膀胱置入T型管引流,病理報告炎性疤痕組織,術(shù)后再次發(fā)生結(jié)腸膀胱瘺,合并感染,經(jīng)搶救治療無效死亡。討論自發(fā)性乙狀結(jié)腸膀胱瘺罕見,臨床以膀胱直腸瘺多見。本例患者慢性結(jié)腸炎10余年,加上有長期濫用糖皮質(zhì)激素的病史,主要考慮為長期濫用糖皮質(zhì)激素使胃酸和胃蛋白酶分泌增多,抑