CIK細胞免疫治療對術(shù)后腎癌患者免疫功能的影響-

1、作者簡介李莉(1978,女,河北張家口市人,醫(yī)學(xué)碩士,住院醫(yī)師,主要從事腫瘤生物治療的基礎(chǔ)與臨床研究工作.CIK 細胞免疫治療對術(shù)后腎癌患者免疫功能的影響李莉1,宋鑫1,葉聯(lián)華2(1昆明醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院,云南省腫瘤醫(yī)院腫瘤生物治療中心;2胸外科,云南昆明650118摘要目的探討CIK 細胞免疫治療對術(shù)后腎癌患者免疫功能的影響.方法選取期、期腎癌患者CIK 細胞治療組于CIK 細胞治療后2周,外周血CD3+、CD4+T 細胞、NK 細胞及CD4+/CD8+的比值、IL -2、INF-r 水平較治療前升高(P <0.01,于治療后4周達高峰,此后逐漸回落(P <0.05;而CIK 細

2、胞治療組T h2細胞因子(IL -4、IL -10于CIK 細胞治療后2周下降,治療后4周降至低谷.CIK 細胞治療組于CIK 細胞治療后2、4、8周CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK 細胞、IL -2、INF-r 、IL -4和IL -10與常規(guī)治療組各時點比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05.結(jié)論CIK 細胞免疫治療能增強術(shù)后腎癌患者的免疫功能.關(guān)鍵詞CIK 細胞;腎癌;免疫功能;細胞因子中圖分類號R737.11文獻標(biāo)識碼A 文章編號1003-4706(201011-0092-05Effect of CIK Cells Immunotherapy on Immunity F

3、unction ofPatients with Renal Cancer after OperationLI Li 1,SONG Xin 1,YE L ian -hua 2(1Biotherapy Center ;2Dept.of Thoracic Surgery ,The 3rd Affiliated Hospital of Kunming MedicalUniversity ,Tumor Hospital of Yunnan Province ,Kunming Yunnan 650118,China Abstract Obj ective To study the effect of cy

4、tokine-induced killer (CIK cells im m unotherapy onimm unity function of renal cancer patients after operation .Methods 70patients with histologically or cytologically confirm ed renal cancer in I and II stage of T NM were randomly divided into 2groups :CIK cells therapy group and conventional thera

5、py group ,35cases each group .W e detected the im unity function of NSCLC cases ,including the levels of CD3+,CD4+T cells ,ratio of CD4+/CD8+,NK cells ,and the levels of Th1/Th2cytokine ,before therapy of CIK cells and on 2nd ,4th ,8th week after therapy .Results On the second week after CIK cells t

6、herapy ,the levels of CD3+,CD4+T cells ,NK cells ,ratio of CD4+/CD8+,IL-2,INF-r in peripheral blood of patients with renal cancer in CIK cells therapy group were m ore higher than those before therapy (P <0.01,their levels reached at the peak on 4th week ,from then on ,their levels began to decre

7、ase (P <0.05.M eanwhile ,on 2nd week after treated by CIK cells ,the levels of Th2(IL-4,IL-10in CIK cells therapy group began to decrease ,and reached at a low ebb on 4th week .There was a statistically significant difference in the levels of CD3+,CD4+T cells ,NK cells ,ratio of CD4+/CD8+,IL-2,IN

8、F-r ,IL-4,IL-10of peripheral blood of patients with renal cancer on 2nd ,4th ,8th week after treatm ent between CIK cells therapy昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報2010,(11:9296Journal of Kunming Medical UniversityCN 53-1049/Rgroup and conventional therapy group (P <0.05.Conclusion CIK cells im m unotherapy can enhance the

9、imm une function of patients with renal cancer after operation.Key words CIK cells ;Renal cancer ;Immunity function ;Cytokine 表1兩組患者臨床資料比較n ,(x ±s Tab.1Comparison of the clinical data between two groups n ,(x ±s 常規(guī)治療組3527846.3±8.51619CIK 細胞治療組3523121817組別n 男女年齡(歲腫瘤部位左腎右腎352015352312透明

10、細胞癌儀器與主要試劑1.3.1常規(guī)治療組手術(shù)后不進行任何治療,只給予與CIK 細胞輸注類似的安慰劑治療.1.3.2CIK 細胞治療組手術(shù)后進行自體免疫細胞體外擴增與輸注.用血細胞分離機采集患者外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell ,PBM C ,懸浮于無血清培養(yǎng)基中,調(diào)整細胞密度為5×105/m L ,加入細胞因子INF-r 、M AbCD3、IL-2繼續(xù)培養(yǎng).計細胞數(shù),調(diào)整細胞CIK 細胞治療組分別于治療前、治療后2周、4周和8周,常規(guī)治療組分別于安慰劑治療前、治療后2周、4周、8周,應(yīng)用流式細胞儀檢測患者外周血淋巴細胞免疫功能指標(biāo)C

11、D3+、CD4+、CD4+/CD8+比值、NK 細胞比例及Th1(IL-2、IFN-、T h2(IL-4、IL-10細胞因子的動態(tài)變化.采用SPSS 統(tǒng)計軟件包,各項參數(shù)用(x ±s 表示,兩兩比較采用q 檢驗,組間整體差異采用重復(fù)測量方差分析.a =0.05為檢驗水準(zhǔn),P <0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義.機體免疫功能低下或異常,不能進行有效的免疫防御反應(yīng),是導(dǎo)致腎癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的主要原因之一1,2.目前國內(nèi)外對細胞免疫治療中細胞因子誘導(dǎo)的殺傷(cytokine-induced killer ,CIK 細胞治療對象、治療時機以及維持機體抗腫瘤免疫的時間尚無統(tǒng)一定論3,4.本研

12、究采用CIK 細胞免疫聯(lián)合化療治療術(shù)后腎癌患者,通過監(jiān)測治療前后患者免疫功能指標(biāo)的動態(tài)變化,探討CIK 細胞免疫治療對術(shù)后腎癌患者免疫功能的影響.1材料與方法臨床資料選取昆明醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院2008年1月至2010年5月經(jīng)手術(shù)治療的期、期(pTNM 分期腎癌患者70例,均有明確的病理學(xué)診斷,術(shù)前未經(jīng)抗腫瘤治療,無自身免疫性疾病,其中男性57例,女性13例;年齡3371歲,平均(47.3±8.5歲.70例術(shù)后腎癌患者按隨機數(shù)字表法分為常規(guī)治療組及CIK 細胞治療組,每組35例.兩組患者臨床資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P >0.05,見表1.該試驗經(jīng)昆明醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院倫理委員會

13、批準(zhǔn),患者均簽署知情同意書.李莉,等.CIK 細胞免疫治療對術(shù)后腎癌患者免疫功能的影響93第11期2結(jié)果治療前后患者淋巴細胞免疫功能指標(biāo)的動態(tài)變化CIK 細胞治療組于CIK 細胞治療后2周,外周血CD3+、CD4+T 細胞、NK 細胞及CD4+/CD8+的比值較治療前升高(P <0.01,并隨時間推移繼續(xù)升高,高峰時間段主要在治療后24周,此后,患者免疫功能逐漸回落,于CIK 細胞治療后8周,外周血CD3+、CD4+T 細胞、NK 細胞及CD4+/CD8+的比值回落至較低水平,但其指標(biāo)仍高于常規(guī)治療組(P <0.05.CIK 細胞治療組與常規(guī)治療組患者外周血CD3+、CD +4、N

14、K 細胞及CD4+/CD8+的比值組間總體差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.01,見表2.與常規(guī)治療組比較,*P <0.05,*P <0.01.組別治療前治療后63.10±7.60*71.50±6.70*58.30±7.60*CD4+(%常規(guī)治療組22.70±4.7022.10±6.9022.90±4.5019.70±6.30CIK 細胞治療組23.10±5.3029.50±5.80*38.20±6.90*28.30±7.10*CD4+/CD8+(%常規(guī)治療組 1.03&#

15、177;0.17 1.06±0.22 1.09±0.25 1.06±0.31CIK 細胞治療組 1.17±0.35 1.39±0.42* 1.88±0.51* 1.24±0.37*NK (%常規(guī)治療組CIK 細胞治療組10.40±2.9010.70±3.5010.90±1.8013.10±2.90*10.30±1.5016.10±4.80*10.20±2.1012.50±2.50*表2治療前后淋巴細胞免疫功能指的動態(tài)變化(x ±s 治療

16、前后Th1/Th2細胞因子的動態(tài)變化腎癌患者本身免疫功能低下,手術(shù)創(chuàng)傷進一步加重了其免疫功能的破壞.腎癌患者的免疫抑制是嚴(yán)重影響臨床療效及生活質(zhì)量的重要因素之一.因此,如何有效提高機體免疫功能是腎癌臨床治療中亟待解決的問題.3.1CIK 細胞治療的特點CIK 細胞治療屬于腫瘤生物治療中細胞治療的一種.CIK 細胞是細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞,它是由血液或骨髓的單個核細胞在體外經(jīng)與多種細胞因子共同培養(yǎng)獲得.CIK 細胞是一類非主要組織相容性復(fù)合物和非T 細胞受體限制性的免疫第31卷昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報94組別治療前治療后31.20±11.60*35.60±10.60*27.30

17、7;7.30*IFN-(pg/mL 常規(guī)治療組31.60±11.6030.90±9.3031.50±9.7029.50±12.50CIK 細胞治療組31.60±12.10053.10±20.3*65.40±22.80*40.60±13.90*IL -4(pg/mL 常規(guī)治療組22.70±5.4024.10±5.8024.80±5.3027.30±6.90CIK 細胞治療組23.50±7.6015.90±6.30*10.20±7.90*18.30&

18、#177;6.40*IL -10(pg/mL 常規(guī)治療組18.60±6.5020.10±6.1020.40±7.3021.70±4.90CIK 細胞治療組18.90±5.8013.70±4.60*10.60±2.60*16.10±5.10*表3治療前后Th1/Th2細胞因子的動態(tài)變化(x ±s Tab.3The dynamic change of Th1/Th2cytokines before and after treatment (x ±s 與常規(guī)治療組比較,*P <0.05,*P &

19、lt;0.01.活性細胞,其主要效應(yīng)細胞為CD3+、CD56+T 淋巴細胞,由于多種細胞因子之間的協(xié)同作用,使激活的殺傷細胞出現(xiàn)更好的增殖及殺傷活性4,5.CIK 細胞內(nèi)含有大量的分泌顆粒,當(dāng)與靶細胞結(jié)合后,CIK 細胞脫顆粒,釋放其中的穿孔素和顆粒酶,前者在靶細胞膜上形成穿膜樣結(jié)構(gòu),從而改變細胞的滲透壓;后者具有胰蛋白酶等絲氨酸蛋白酶的特性,同時表達酯酶活性破壞細胞膜結(jié)構(gòu);以上兩者的共同作用可導(dǎo)致腫瘤細胞的壞死3,6.CIK 細胞具有以下優(yōu)點:增殖速度快;殺瘤活性高;殺瘤譜廣;對多重耐藥腫瘤細胞同樣敏感,能抵御腫瘤細胞引發(fā)的效應(yīng)細胞Fas-FasL 凋亡;對正常骨髓造血影響輕微2,3.因此,

20、CIK 細胞在腎癌的生物免疫治療中具有廣闊的應(yīng)用前景.3.2CIK 細胞的治療對象目前國內(nèi)外在腫瘤CIK 細胞免疫治療中,大多數(shù)以晚期腫瘤患者為治療對象,雖然取得了一些效果,但大多數(shù)效果不理想3,5.主要原因就在于這些患者已喪失基本的免疫功能或自體免疫功能已極其低下,而擁有相對健全免疫系統(tǒng)的患者更容易從免疫治療中獲益7,8.因此,本研究中,所有接受CIK 細胞治療的患者均為早期患者即術(shù)后腎癌患者,其免疫能力還未出現(xiàn)明顯的下降,在這一時期進行CIK 細胞治療,殺滅微轉(zhuǎn)移灶的同時又提高了機體的免疫功能,預(yù)防復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移具有重要作用.3.3CIK 細胞對機體T 淋巴細胞免疫功能的影響腎癌患者免疫功能低下

21、,機體不能有效進行免疫防御反應(yīng),是導(dǎo)致腫瘤細胞免疫逃逸及術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的重要因素4,9.本研究表明:肺癌患者的外周血T 細胞亞群的紊亂,表現(xiàn)為CD4+T 細胞減少,CD4+/CD8+比值下降或倒置;CIK 細胞治療后,腎癌患者外周血CD3+、CD4+T 細胞、NK 細胞及CD4+/CD8+的比值均有不同程度升高.提示術(shù)后腎癌患者經(jīng)CIK 細胞治療后,可改善其細胞免疫功能,有利于增強T 淋巴細胞對腫瘤細胞的識別,誘導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答,殺滅殘留癌細胞,抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā).維持并盡量延長機體抗腫瘤免疫的時間和激發(fā)機體的抗腫瘤免疫能力同樣重要7,8.目前,在CIK 細胞治療時,需要輸注多大的細胞數(shù)量以及輸

22、注后機體抗腫瘤免疫功能能夠維持多長時間等問題存在較多的爭論.本研究中,經(jīng)患者免疫功能動態(tài)檢測結(jié)果顯示:CIK 細胞輸注后2周患者的細胞免疫功能明顯提高,至第4周達高峰,8周后下降.提示術(shù)后腎癌者行CIK 細胞治療1個療程,細胞總數(shù)約為1.0×109,其抗腫瘤免疫能力可維持8周左右.如果在第一次治療后8周左右再追加一個療程,可使患者保持較高的抗腫瘤免疫功能,可能會取得更好的療效.3.4CIK 細胞在維持Th1/Th2平衡中的作用李莉,等.CIK 細胞免疫治療對術(shù)后腎癌患者免疫功能的影響95第11期細胞因子是機體抗腫瘤效應(yīng)機制的重要組成部分,它們可以通過直接殺傷腫瘤細胞、激活有抗腫瘤活性

23、的效應(yīng)細胞或通過細胞因子網(wǎng)絡(luò)影響其他相關(guān)因子的抗腫瘤作用.根據(jù)分泌細胞因子的不同,T輔助細胞可分為Th1和Th2類細胞, T h1類細胞因子的主要作用為增強機體的細胞免疫功能,包括IL-2、TNF-、IFN-;Th2類細胞因子則主要對體液免疫起作用,包括IL-4、IL-5、IL-10.對于腫瘤患者而言,要使機體保持良好的抗腫瘤免疫狀態(tài),其抗腫瘤免疫必須以T h1型為主,一旦發(fā)生漂移形成Th2型,腫瘤細胞就有可能發(fā)生免疫逃逸,導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生或轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)7,8,10.因此,恢復(fù)Th1和Th2的平衡一直是腫瘤治療的策略之一.本研究通過動態(tài)監(jiān)測腎癌患者T h1/Th2細胞因子.提示CIK細胞治療能提高術(shù)

24、后腎患者外周血T h1類細胞因子水平,而降低T h2類細胞因子水平.因此,CIK細胞治療在抑制機體免疫T h1Th2的漂移以及恢復(fù)Th1/Th2的平衡中具有重要作用,從而使機體保持良好的抗腫瘤免疫狀態(tài).本研究表明:CIK細胞治療能有效地提高術(shù)后腎癌患者的T淋巴細胞免疫功能以及在維持T h1/T h2的平衡中具有重要作用.但是,腫瘤免疫逃逸的機制是多因素、多層次、多環(huán)節(jié)的.本的研究只是改善或加強了其中的某些因素,而這些因素在整個免疫網(wǎng)絡(luò)中的作用及其與其他因子之間的關(guān)系還有待進一步的研究.參考文獻1SU X,Z HANG L.Immunotherapy with cytokine-inducedk

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