植物激素脫落酸(ABA)快速檢測(cè)試劑盒

1、植物激素脫落酸(ABA)快速檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供研究使用產(chǎn)品編號(hào)：CSB-E09159Pl檢測(cè)范圍：3.12 pmol/ml-200 pmol/ml最低檢測(cè)限： pmol/ml特異性：本試劑盒可用于快速檢測(cè)植物樣本中ABA含量。有效期：6個(gè)月預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測(cè)定植物組織樣本中的ABA含量。 說(shuō)明 1試劑盒保存：-20（較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)）；2-8（頻繁使用時(shí)）。2濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。 3中、英文說(shuō)明書(shū)可能會(huì)有不一致之處，請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。4剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒采

2、用酶聯(lián)免疫間接競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)ABA。微孔板上包被有ABA偶聯(lián)物。加入ABA抗體和ABA標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離ABA與微量反應(yīng)板上的ABA結(jié)合物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗ABA抗體，沒(méi)有結(jié)合的抗體被洗去，再向微孔中加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗，與結(jié)合在反應(yīng)板上的抗體作用一定時(shí)間，洗去多余的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗。再向反應(yīng)孔中加入相應(yīng)反應(yīng)底物TMB，作用一定時(shí)間后，結(jié)合的酶結(jié)合物將TMB轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ABA呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。 試劑盒組成及試劑配制 1. 已包被ABA偶聯(lián)物的酶聯(lián)板(Assay plate )：一塊（96孔）。 2. 標(biāo)準(zhǔn)

3、品（Standard）：2250ul/瓶。3. 樣品稀釋液(Sample Diluent)：220ml/瓶。4. ABA單克隆抗體：160l/瓶（1：100）5. 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗（HRP-anti-antibody）：1120l/瓶（1：100）6. 底物溶液（TMB Substrate）：110ml/瓶。 7. 濃洗滌液（Wash Buffer）：120ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 8. 終止液（Stop Solution）：110ml/瓶（2N H2SO4）。需要而未提供的試劑和器材1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀2. 高速離心機(jī)3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱4. 超聲清洗器5. 離子交換小

4、柱（PCX）6. 氮?dú)獯蹈蓛x7. 干凈的試管和Eppendof管8. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，最好用多通道移液器9. 蒸餾水，容量瓶等標(biāo)本的稀釋原則：首先通過(guò)文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過(guò)程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。最后計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶濃度為200 pmol/ml，以樣品稀釋液做系列倍比稀釋，分別稀釋200 pmol/ml，100 pmol/ml，50 pmol/ml，25 pmol/ml，12.5 pmol/ml，6.25 p

5、mol/ml，3.12 pmol/ml。樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pmol/ml。ABA抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗的稀釋原則：臨用前以樣品稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（ABA抗體每孔50ul，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗每孔100ul），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10ulABA抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗加990ul樣品稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。操作步驟實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。

6、1. 酶聯(lián)板使用前用洗液洗板2-3次，每次浸泡1-2分鐘，250ul/每孔，甩干。2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00ul，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品50ul，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，然后在所有孔中加入50 ul ABA抗體工作液。盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37反應(yīng)30分鐘（為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液）。3. 溫育后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，250ul/每孔，甩干。4. 所有孔中加入100 ul辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗工作液。盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。酶標(biāo)板加上蓋或

7、覆膜，37反應(yīng)30分鐘5. 溫育后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，250ul/每孔，甩干。6. 依序每孔加底物溶液90ul，37避光顯色（30分鐘內(nèi)，一般10-15分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的后3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，前3-4孔顏色不明顯，即可終止）。7. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。注：1. 用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘

8、，以便試劑集中到管底。2. 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是最后加底物溶液及2N H2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。4. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請(qǐng)于2-8保存。標(biāo)準(zhǔn)品、ABA抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、ABA抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗工作液。5. 建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。洗板方法ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中

9、。計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)），OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。 注意事項(xiàng)1. 當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。2. 洗滌過(guò)程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。3. 一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。5. 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以稀釋倍數(shù)。6. 在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)