臍橙黃龍病的發(fā)生及防控

1、臍橙黃龍病的發(fā)生和防控摘 要 黃龍?。–itrus Huanglongbing）被認(rèn)為是世界臍橙生產(chǎn)上的毀滅性病害已超過(guò)一個(gè)世紀(jì)，被人們稱(chēng)為臍橙上的“癌癥”，對(duì)于該病目前尚無(wú)有效的治療方法,主要以預(yù)防為主。關(guān)鍵詞 黃龍?。话l(fā)生；防控The Occur and Control of Citrus HuanglongbingAbstract: Huanglongbing (HLB) has been a destructive disease of citrus around the world for over a century, has been the “cancer” of citrus

2、, has no effective measures to cure it by now, only can prevent its spread. Key words: Huanglongbing; occurring; control臍橙黃龍?。–andidatus Liberobacter asiaticus），又名黃稍病、黃枯病、青果病，系國(guó)內(nèi)外植物檢疫對(duì)象。目前，臍橙黃龍病廣泛分布在亞洲、非洲、大洋洲和南美洲的40多個(gè)國(guó)家和地區(qū)1，在中國(guó)幾乎所有的臍橙產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生和危害。1發(fā)生規(guī)律1.1病原臍橙黃龍病的病原為變形菌門(mén)（Proteobacteria），-亞綱,韌皮部桿菌屬細(xì)菌（Can

3、didatus Liberibacter），是革蘭氏陰性細(xì)菌，屬于難培養(yǎng)菌2,分為亞洲種（Ca.L.asiaticus）、非洲種（Ca.L.africanus）和美洲種（Ca.L.americanus）3-6，中國(guó)的黃龍病病原菌主要為亞洲種7。病原在寄主篩管細(xì)胞和薄壁細(xì)胞內(nèi)分布不均勻，故同一株樹(shù)各枝梢發(fā)病時(shí)間也呈現(xiàn)不同。病原只侵染柑桔屬、金柑屬和枳屬植物，其中尤以椪柑、焦柑、福橘、茶枝柑等品種耐病力弱，而橙類(lèi)、柚類(lèi)耐病力較強(qiáng)。病原不耐高溫，抗勢(shì)力極差，在48的情況下經(jīng)過(guò)5小時(shí)，在60的環(huán)境下經(jīng)過(guò)5分鐘即會(huì)失去活力8。1.2 引進(jìn)帶有病苗木和接穗病原通過(guò)帶病的接穗和苗木，可以將病原從帶病區(qū)遠(yuǎn)距離

4、傳播到無(wú)病區(qū)而感染病菌。1.3 臍橙木虱的自然傳播臍橙木虱是黃龍病唯一的自然傳播媒介，是以各種臍橙植株為食的有褐色斑點(diǎn)的小昆蟲(chóng)，通過(guò)影響植物內(nèi)養(yǎng)分的流通，最終導(dǎo)致植物死亡。1.4 其他病原可以通過(guò)菟絲子（Cuscuta Compstris）、九里香、長(zhǎng)春花、木蘋(píng)果等寄主植物傳播，但不能通過(guò)汁液和土壤傳播。2 癥狀識(shí)別2.1 稍始發(fā)病樹(shù)在樹(shù)冠中發(fā)生若干黃稍，春稍開(kāi)始發(fā)病的，黃稍數(shù)量多，出現(xiàn)在樹(shù)冠頂部或樹(shù)冠的其他部位；夏秋稍期開(kāi)始發(fā)病的，黃稍數(shù)量較少，常出現(xiàn)在樹(shù)冠頂部；從部分大枝擴(kuò)展到全株發(fā)病，一般經(jīng)歷1-2年，這是黃龍病區(qū)別于缺肥、水漬等引起枝葉發(fā)黃的一個(gè)特點(diǎn)；病枝容易落葉，從病枝萌發(fā)的新稍短，

5、葉小、黃化。2.2 葉發(fā)病葉片表現(xiàn)為黃化葉片，可分為均勻黃化、斑駁型黃化、缺素型黃化三種類(lèi)型。均勻黃化 該病發(fā)病之初，病樹(shù)頂部或外圍1-2枝或多枝新稍葉片不轉(zhuǎn)綠而呈現(xiàn)均勻的黃化，多出現(xiàn)在出發(fā)病樹(shù)和夏秋稍上，葉片呈均勻的淡黃綠色，且極易脫落。斑駁型黃化 有的葉片轉(zhuǎn)綠后從主、側(cè)脈附近或葉片基部沿葉緣出現(xiàn)黃綠相間的不均勻斑塊。斑駁型在春、夏、秋稍病枝上均有，病樹(shù)進(jìn)入中后期，葉片均勻黃化，先失去光澤，葉脈凸出，木栓化，硬脆而脫落。缺素型黃化 病葉小，葉片主、側(cè)脈綠色，其脈間葉肉呈淡黃色或黃色，類(lèi)似缺乏鋅、錳、鐵等微量元素的癥狀。上述三種黃化類(lèi)型中，葉片的斑駁型黃化最具有特征性。此外，病葉較健葉厚，摸之

6、有革質(zhì)感，在枝上著生較直立，有的葉脈腫突，局部木栓化開(kāi)裂。2.3 花 感病的臍橙樹(shù)在次年春天開(kāi)花較早且特別多，呈“乒乓”花狀（似半圓的乒乓球），個(gè)別小花枝聚含成團(tuán)呈“花球”狀，花小且畸形，花瓣短小肥厚，呈淡黃色，柱頭彎曲外露，會(huì)逐漸落花。2.4 果 病樹(shù)果實(shí)小，有的無(wú)光澤且畸形（如變長(zhǎng)或果形歪斜），果臍歪偏，著色時(shí)黃綠不均勻，福橘、椪柑、溫州蜜桔等寬皮臍橙常在果蒂附近先著色，其余部分青綠色，成“紅鼻子果”9。2.5 根病樹(shù)極少長(zhǎng)新根，老根容易從細(xì)根開(kāi)始腐爛，病樹(shù)嚴(yán)重時(shí)，根系腐爛，直至整株死亡。3 鑒別方法3.1 研究認(rèn)為，“紅鼻子果”和斑駁黃化葉片是最具有特征的癥狀，可作為形態(tài)學(xué)鑒定臍橙黃龍病

7、的主要依據(jù)10。3.2 指示植物法利用病毒在其他植物上表現(xiàn)癥狀的特征,作為鑒別病毒種類(lèi)的標(biāo)準(zhǔn),這種專(zhuān)用來(lái)產(chǎn)生癥狀的寄主稱(chēng)為指示植物,又稱(chēng)鑒別寄主。指示植物分為2種類(lèi)型:一種在接種后產(chǎn)生系統(tǒng)的癥狀,并擴(kuò)展到未接種部位;另一種只在接種部位產(chǎn)生局部病斑11。Bove12，13和柯沖14分別把臍橙青果病原BLO和臍橙黃龍病原BLO用菟絲子傳到長(zhǎng)春花上。發(fā)病的長(zhǎng)春花往往是個(gè)別枝條先發(fā)病,然后其它枝條才陸續(xù)發(fā)病,發(fā)病枝條葉片起初局部黃化,然后沿葉邊緣變黃,中脈附近葉肉成綠色,花變小。這樣可證明草地菟絲子所傳遞的就是臍橙黃龍病的病原BLO,所以可以用菟絲子和長(zhǎng)春花檢測(cè)臍橙黃龍病。這種方法簡(jiǎn)便易行,成本低,結(jié)

8、果準(zhǔn)確、可靠。但所需時(shí)間長(zhǎng),大量樣品的檢測(cè)比較困難。3.3 電鏡診斷法采用電子顯微鏡,可以直接觀察病原顆粒的大小、形態(tài)和結(jié)構(gòu)。自1977-1978年間利用電鏡與超薄切片技術(shù)在臍橙黃龍病病樹(shù)葉片的篩管細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)病原BLO以來(lái), 在中國(guó),電鏡便成為診斷黃龍病的一個(gè)重要手段。采用癥狀明顯、老熟的葉片為材料,用側(cè)脈代替中脈和縱切代替橫切韌皮部制樣等改進(jìn)方法,可有效地提高電鏡對(duì)BLO的檢出率153.4 直接熒光診斷法據(jù)吳世盤(pán)等16的報(bào)道,用落射式熒光顯微鏡可以直接檢測(cè)出局限于韌皮部的由類(lèi)細(xì)菌引起的多種病害,其原理是利用感病植株的壞死組織產(chǎn)生的自發(fā)熒光。在感染黃龍病的組織切片中,在韌皮部可看到多個(gè)鮮明的黃

9、色或黃綠色熒光團(tuán)塊。這種特異性的熒光,在健康葉片的葉柄韌皮部是沒(méi)有的,其它由病毒、類(lèi)病毒、細(xì)菌、真菌等病原引起的病葉葉柄韌皮部亦沒(méi)有這種特異性熒光。用此法檢測(cè)時(shí),取樣必須是完全老熟的黃化葉片。但據(jù)李德望等17的報(bào)道,感染衰退病的臍橙葉片以及生理性黃化葉片也會(huì)出現(xiàn)上述現(xiàn)象。因此認(rèn)為這種方法可能對(duì)黃龍病不具有專(zhuān)化性。3.5 FBA染色法FBA染色液是由0. 1%堿性品紅水溶液和0. 1%無(wú)水對(duì)氨基苯璜酸溶液按1: 1的比例混合,再稀釋一定的倍數(shù)成為染色工作液。取染病的葉片用自來(lái)水和蒸餾水洗凈,用徒手切片法橫切,切片移至滴有FBA染色工作液的載玻片上染色5-8 min,在光學(xué)顯微鏡下可觀察到其外向韌

10、皮部篩管細(xì)胞中存在被染成紅褐色的病原細(xì)菌，多為桿狀,有些呈長(zhǎng)橢圓型。但是這種檢測(cè)方法的穩(wěn)定性不好,對(duì)選取材料和切片的厚度要求都很高。3.6 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)近年來(lái),隨著生物技術(shù)的飛速發(fā)展, Bové,et al.發(fā)表了黃龍病病原的部分DNA序列18,19。根據(jù)這些DNA序列,可以設(shè)計(jì)出多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的引物,使PCR技術(shù)可以用于柑桔黃龍病的研究。由于PCR的高靈敏度,臍橙木虱單蟲(chóng)及小于1 g的植物材料即可用于檢測(cè),所以PCR技術(shù)檢測(cè)臍橙黃龍病具有比其他方法更大的優(yōu)點(diǎn)。而競(jìng)爭(zhēng)性定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Q-PCR)克服了普通PCR靈敏但難以定量的缺點(diǎn),可以確定病原在不同樣品中

11、的含量,進(jìn)行定量分析。所以可以用于不同季節(jié)研究黃龍病病原在寄主中轉(zhuǎn)移與分布的變化,蟲(chóng)媒木虱攜帶病原的變動(dòng)和病害流行與預(yù)測(cè)等問(wèn)題。上世紀(jì)90年代法國(guó)的Bove研究小組20利用PCR技術(shù)檢測(cè)臍橙黃龍病以來(lái)，人們不斷改進(jìn)和優(yōu)化這一技術(shù)，目前已建立和發(fā)展了諸如常規(guī)PCR、半巢式PCR、巢式PCR、免疫捕獲PCR、熒光定量PCR、Long-PCR、LAMP、Cycleave ICAN等一系列檢測(cè)方法。4 防控方法4.1 實(shí)行植物檢疫嚴(yán)格實(shí)行植物檢疫，嚴(yán)禁從病區(qū)引苗木、接穗和果實(shí)到無(wú)病區(qū)或保護(hù)區(qū)。4.2 建立無(wú)病苗圃建立無(wú)病苗圃，培育無(wú)病苗。苗圃應(yīng)設(shè)在無(wú)病區(qū)或離臍橙園3千米以上，最好有天然條件（山區(qū)、林區(qū)

12、）阻隔，或用塑料網(wǎng)棚封閉式育苗。在建圃之前，還應(yīng)鏟除附近零星的臍橙類(lèi)植物或九里香等臍橙木虱的寄主。4.3 及時(shí)挖除病樹(shù)及時(shí)挖除病樹(shù)，堅(jiān)持每次新稍轉(zhuǎn)綠后全面檢查黃龍病株，發(fā)現(xiàn)一株挖除一株，不留殘樁。對(duì)于發(fā)病率較低的臍橙園，挖除病株后，可以在當(dāng)年或次年再植。補(bǔ)植時(shí)，定植穴應(yīng)用石灰消毒，添加容土，施足基肥，大苗移植。對(duì)失管發(fā)病嚴(yán)重或株發(fā)病率在20%以上時(shí)，挖除病樹(shù)，更新果園。4.4 防治傳毒媒介臍橙木虱是傳播臍橙黃龍病的主要媒介，撲滅臍橙木虱，是防治臍橙黃龍病的重要措施。在臍橙木虱發(fā)生高峰期,都要及時(shí)噴藥防治臍橙木虱。此外,要特別注意幾次容易疏忽的用藥時(shí)期:采果后噴藥防治木虱成蟲(chóng),降低木虱越冬基數(shù)；

13、早春萌芽前噴藥防治越冬后的木虱成蟲(chóng),減少木虱傳病機(jī)；挖除黃龍病樹(shù)前先噴藥殺死木虱再挖病樹(shù),以免將帶病原木虱驅(qū)趕到健康樹(shù)；冬季臍橙木虱喜歡在九里香上取食繁殖越冬，要清除果園周邊的九里香等蕓香科植物，及時(shí)噴灑殺蟲(chóng)劑來(lái)?yè)錅缒臼?；做好冬季清園，冬季氣溫低，越冬期的木虱活動(dòng)能力差，通過(guò)噴藥能有效殺死；保護(hù)利用天敵，木虱的天敵較多，有多種寄生蜂、瓢蟲(chóng)、草蛉，還有寄生菌，要保護(hù)利用天敵以抑制木虱的發(fā)生。4.5 實(shí)施臍橙健身栽培臍橙是多年生果樹(shù)，在臍橙黃龍病發(fā)生區(qū)，除了實(shí)行嚴(yán)格的檢疫防控措施外，實(shí)施健身栽培也可有效降低黃龍病的發(fā)病率，既能減輕發(fā)病癥狀，又能延長(zhǎng)橘樹(shù)經(jīng)濟(jì)壽命。臍橙健身栽培的措施主要有：重施有機(jī)肥

14、，加施葉面肥，提高臍橙樹(shù)自身素質(zhì)；開(kāi)心修剪，矮樹(shù)栽培，培育健壯樹(shù)體；合理疏果，均衡結(jié)果，保持橘樹(shù)的持久生產(chǎn)力；提倡深土施肥，誘導(dǎo)根向深土生長(zhǎng)，減少肥料流失，提高橘樹(shù)抗逆性；測(cè)土配方施肥，實(shí)行以需定肥，提高肥料利用率；合理應(yīng)用微量元素，促進(jìn)橘樹(shù)營(yíng)養(yǎng)平衡；平地橘園開(kāi)溝挖渠，防止?jié)n水，以利根系健康生長(zhǎng)。215 結(jié)論臍橙黃龍病作為臍橙生產(chǎn)上的一種毀滅性的病害，雖然到目前為止仍沒(méi)有能夠有效治愈的措施，但我們可以從各個(gè)方面進(jìn)行防治，控制病原的蔓延，使橘園能夠更好地發(fā)展下去。參考文獻(xiàn) 1 Bové J M. Huanglongbing: a destructive, newly-emerging,

15、 century-old disease of citrusJ. Journal of Plant Pathology.2006, 88(1): 7-37.2 Jagoueix S, Bove J M, Garnier M, et al. The phloem-limited bacterium of greening disease of citrus is a member of a subdivision of the proteobacteria J. Journal of Syst Bacteriol.1994, 44 (3): 379-386.3 Teixeira D C, Dan

16、et J L, Eveillard S,et al. Citrus huanglongbing in Sao Paulo State, B Teixeira D C,Danet J L,Eveillard S,et al.Citrus huanglongbing in Sao Paulo State,Brazil：PCR detection of theCandidatusLiberibacter species associated with the diseaseJ.Molecular and Cellular Probes.2005,19：173-179.4 Moll, J.N. and

17、 M. M. Martin. INSERM .1974, 33:8-965 Bove, J.M., E.C. Calavan, S.P. Capoor, R.E. Cortex and R.E. Schwaz. Proc. 6th conf., 10CV.Univ. Calif. Div. Agr. Sci. Richmond. 1974,12-256 Ke. C., S. Ke, R.J. Wu, H. Yang, and P.T. Hsu. Proc. 12th Conf. 10CV, 10CV Riverside. 1993, 220-2237 田亞南, 柯穗, 柯沖. 應(yīng)用多聚酶鏈?zhǔn)椒?/p>

18、應(yīng)（PCR）技術(shù)檢測(cè)和定量分析柑桔黃龍病病原J. 植物病理學(xué)報(bào).1996, 26（3）：243-250.8 柏勁松.臍橙黃龍病的綜合防治技術(shù).農(nóng)村實(shí)用技術(shù)，林果園.2006.9 寧紅，秦蓁.臍橙病蟲(chóng)害綠色防控技術(shù)百問(wèn)百答.中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社.2009.10 吳礽超,趙小龍,王明召.臍橙黃龍病檢測(cè)技術(shù)概述J.廣西園藝,2007,18（6）:59-60.11 許智宏.植物生物技術(shù)M.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 1997.12 GARNIERrM. BOVE JM. The greening organism is a gramnegative bacteriumJ. In:Garnsev SM. TimmerLW. Dodds JA(eds).Proc 9th Conf IntOrg, CitrusViro.l Riverside, 1984: 115-124.13 Garnier, M. and J. M. Bove, Phytopathology .1983，73:1358-136314 柯沖.利用菟絲將黃龍病病原從臍橙傳到長(zhǎng)春花D.國(guó)際臍橙病毒學(xué)會(huì)第十屆會(huì)議論文. 1986.15 田亞南,柯穗,柯沖.臍橙黃龍病診斷法的研究進(jìn)展J.福建農(nóng)