蠅蛆殼聚糖對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠的降脂保肝作用

1、蠅蛆殼聚糖對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠的降脂保肝作用         【摘要】目的研究蠅蛆殼聚糖的降脂保肝作用。方法通過(guò)喂飼SD大鼠高脂飼料,建立實(shí)驗(yàn)性高脂血癥模型,并用蠅蛆殼聚糖進(jìn)行 治療 ,測(cè)定血清膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C) 、高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)含量,測(cè)定肝臟系數(shù)和肝中膽固醇含量,并對(duì)各組大鼠肝臟進(jìn)行病理觀察。結(jié)果蠅蛆殼聚糖能顯著降低實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清TC，TG，LDL-C水平，升高血清HDLC水平,降低大鼠的肝臟系數(shù)及膽固醇含量,并能減輕肝細(xì)胞脂變程度。結(jié)

2、論蠅蛆殼聚糖能調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血脂代謝,抑制肝臟脂肪沉積,有良好的降脂保肝作用。 【關(guān)鍵詞】   蠅蛆殼聚糖 實(shí)驗(yàn)性高脂血癥 大鼠 降脂保肝甲殼素是地球上除纖維素之外最豐富的天然高分子聚合物，也是昆蟲體內(nèi)構(gòu)成昆蟲體壁的主要成分之一。將甲殼素在強(qiáng)堿液中加熱處理，其分子結(jié)構(gòu)中的乙酰胺基就會(huì)水解脫去乙?；?，留下游離的氨基，成為殼聚糖。殼聚糖是一種具有重要開發(fā)價(jià)值的天然多糖物質(zhì)，具有免疫調(diào)節(jié)、降低體重和膽固醇、抗腫瘤、調(diào)理腸胃、抗凝血、抗菌等多種生物活性1。高脂血癥是動(dòng)脈粥樣硬化形成的原因之一已被確認(rèn)，而肝臟是脂質(zhì)代謝的中心。本實(shí)驗(yàn)采用高脂血癥大鼠模型，觀察蠅蛆殼聚糖對(duì)血清及肝臟脂質(zhì)含

3、量及肝臟病理形態(tài)學(xué)的影響。 1  材料與儀器 1.1  動(dòng)物SD大鼠，雄性，100只，體重180205 g，由貴陽(yáng)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2  藥品與試劑蠅蛆皮，由琨恩生物技術(shù)有限公司提供。蠅蛆殼聚糖，自制。蝦蟹殼聚糖，購(gòu)自濟(jì)南海得貝生物工程有限公司。膽固醇，分析純， 中國(guó) 醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司產(chǎn)品。批號(hào)：F20050303?？偰懝檀荚噭┖小⒏呙芏戎鞍啄懝檀荚噭┖?、甘油三酯試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇試劑盒， 均由北京中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)。1.3  飼料基礎(chǔ)飼料，由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。高脂飼料，用1膽固醇、5豬油、10蛋黃粉及

4、85基礎(chǔ)飼料配制而成。1.4  主要儀器OLYMPUS-AU400全自動(dòng)生化分析儀；OLYMPUS顯微鏡(日本OLYMPUS)。 2  方法 2.1  分組及造模用基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)SD大鼠5 d后，隨機(jī)分為6組，每組10只。正常對(duì)照組每日以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，灌胃給等量蒸餾水；高脂模型組每日以高脂飼料喂養(yǎng)，灌胃給等量蒸餾水；殼聚糖低、中、高劑量組自造模日起給高脂飼料的同時(shí)分別灌胃蠅蛆殼聚糖300,600,900 mg/kg，給藥1次/d。陽(yáng)性對(duì)照組每日以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，灌胃給蝦蟹殼聚糖600 mg/kg，給藥1次/d。2.2  TC，TG，HDL-C，LDL-

5、C的測(cè)定以上各組均連續(xù)給藥4周，動(dòng)物自由進(jìn)水。給藥第2周，大鼠禁食不禁水12 h，斷尾取血，分離血清測(cè)定TC，TG，HDL-C，LDL-C水平；于實(shí)驗(yàn)結(jié)束前1天末次給藥后，大鼠禁食不禁水12 h，股動(dòng)脈放血處死，取血并分離血清測(cè)定TC，TG，HDL-C，LDL-C水平。2.3  病理形態(tài)學(xué)觀察及肝臟脂質(zhì)測(cè)定 取出肝臟并稱肝重（LW）， 計(jì)算 肝臟系數(shù)（LI）；在肝右葉離邊緣1 cm處，橫切一塊肝組織，用中性福爾馬林固定，常規(guī)脫水，石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察肝臟病理形態(tài)學(xué)改變。于剩余肝臟中取組織，在蒸餾水中漂洗數(shù)次，濾紙吸干，稱重1g，放入組織勻漿器，加3 ml生理鹽水勻

6、漿10 min,將漿液放入冰箱（20）34 h，進(jìn)行肝臟脂質(zhì)測(cè)定。2.4  學(xué)處理全部數(shù)據(jù)采用±s表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)Independent Samples T Test進(jìn)行分析。P0.05 和P0.01作為顯著性差異界值。 3  結(jié)果 3.1  蠅蛆殼聚糖對(duì)高脂模型大鼠血清血脂水平的影響給高脂飼料后，高脂模型組大鼠血清TC，TG，LDL-C含量持續(xù)顯著升高，HDL-C含量持續(xù)顯著降低，與正常對(duì)照組相比，差別有顯著性意義（P0.01），表明高脂模型造模成功。給予蠅蛆殼聚糖，各劑量組TC，TG，LDL-C含量均降低，HDL-C含量均升高，除低劑量

7、組外，與高脂模型組比較有顯著性差異（P0.01）。同時(shí)，隨著給藥時(shí)間的增加，殼聚糖抑制了因高脂飲食造成的血清TC，TG，LDL-C含量的升高，HDL-C含量的降低（見表12）。表1  蠅蛆殼聚糖對(duì)大鼠血清TC、TG水平的影響（略）與正常對(duì)照組比較，*P0.05，*P0.01;與模型組比較，P0.05,P0.05,P0.01；n=10表2  蠅蛆殼聚糖對(duì)HDL-C、LDL-C水平的影響（略）與正常對(duì)照組比較，*P0.05，*P0.01;與模型組比較，P0.05,P0.05,P0.01；n=103.2  蠅蛆殼聚糖對(duì)高脂模型大鼠肝臟系數(shù)及肝臟膽固醇水平的影響給高脂飼料

8、4周，高脂模型組大鼠肝重、肝臟系數(shù)值顯著升高，肝臟膽固醇含量顯著升高,與正常對(duì)照組相比，差別有顯著性意義（P0.05），表明高脂模型造模成功。給予蠅蛆殼聚糖，各劑量組肝重、肝重/體重值均降低，其中中、高劑量組與高脂模型組比較有顯著性差異（P0.01）。肝臟膽固醇含量均降低，與高脂模型組比較有顯著性差異（P0.01）。見表3。肝臟系數(shù)（%）=肝臟重量（g）體重（g）×100%         3.3  蠅蛆殼聚糖對(duì)高脂模型大鼠脂肪肝變性程度的抑制作用血脂代謝的紊亂導(dǎo)致肝臟脂肪的聚積是誘發(fā)脂肪肝的因

9、素之一。在實(shí)驗(yàn)中觀察到模型組大鼠脂肪肝、水腫的形成顯著高于正常對(duì)照組。而藥物干預(yù) 治療 可減輕脂肪肝的程度。病理結(jié)果顯示正常對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)清楚完整，肝索排列規(guī)則，肝細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,排列正常(見12)。模型對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)模糊不清，部分肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)消失，肝細(xì)胞排列紊亂，肝細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小不一的脂肪空泡，肝細(xì)胞腫大明顯(見圖34)。經(jīng)藥物治療后脂肪肝的變性程度減輕，肝小葉結(jié)構(gòu)尚存，肝結(jié)構(gòu)大致正常，部分肝細(xì)胞索排列紊亂，肝細(xì)胞輕度水腫。高劑量組肝組織結(jié)構(gòu)與正常對(duì)照組相似(見圖910),其余各治療組光鏡下所見大致介于正常對(duì)照組和模型組之間(見圖58)。陽(yáng)性對(duì)照組肝組織結(jié)構(gòu)與正常對(duì)照組相似（見圖111

10、2）。圖1  正常對(duì)照組大鼠肝組織切片圖(100×)（略）圖2  正常對(duì)照組大鼠肝組織切片圖(400×)（略）圖3  高脂模型組大鼠肝組織切片圖(100×)（略）圖4  高脂模型組大鼠肝組織切片圖(400×)（略）圖5  低劑量組大鼠肝組織切片圖(100×)（略）圖6  低劑量組大鼠肝組織切片圖(400×)（略）圖7  中劑量組大鼠肝組織切片圖(100×) 4  討論 4.1  蠅蛆殼聚糖的調(diào)血脂作 用高脂血癥是動(dòng)脈硬化性心腦血管疾病的

11、主要危險(xiǎn)因子，正確的調(diào)節(jié)血脂水平已被證明可以降低心血管疾病的死亡率和發(fā)生率。動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是缺血性心、腦血管病的主要病理基礎(chǔ)，防止AS的發(fā)生及促使AS的消退是防治心腦血管病發(fā)病率及死亡率的根本性措施2。脂質(zhì)代謝異常是AS形成的重要因素3。保持正常的血脂水平是預(yù)防心腦血管疾病的發(fā)生的重要措施之一。血漿中TC、TG和LDL增高是心腦血管疾病的重要致病因素；HDL的增高則有利于抗AS等心腦血管疾??；因此，一種理想的降脂藥應(yīng)該能有效地調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，既能降低TC和TG的含量又能升高HDL的水平，這對(duì)于預(yù)防AS等心腦血管疾病是必要的4。在本實(shí)驗(yàn)中,以高脂飼料造成高脂血癥大鼠模型，觀察了蠅蛆殼聚糖對(duì)其

12、的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),蠅蛆殼聚糖能顯著降低實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠血清TC、LDL-C、TG水平，升高血清HDLC水平。給藥第2周即產(chǎn)生作用，隨給藥時(shí)間的增加作用明顯。蠅蛆殼聚糖降低TC、LDL-C及升高HDL-C的作用隨劑量增加，其作用增強(qiáng)；但蠅蛆殼聚糖低劑量（300mg/kg）作用效果不是很明顯，僅對(duì)LDL-C有降低作用，對(duì)其它指標(biāo)無(wú)明顯影響；蠅蛆殼聚糖高劑量（900mg/kg）對(duì)各指標(biāo)的影響與蝦蟹殼聚糖相似。蠅蛆殼聚糖降低TG作用低劑量組幾無(wú)作用，而中、高劑量組作用與陽(yáng)性蝦蟹殼聚糖組相似。說(shuō)明蠅蛆殼聚糖可能通過(guò)增加膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，清除外周組織細(xì)胞中過(guò)多的膽固醇，從而防止了AS的形成。圖8

13、0; 中劑量組大鼠肝組織切片圖(400×)（略）    圖9  高劑量組大鼠肝組織切片圖(100×)（略）    圖10  高劑量組大鼠肝組織切片圖(400×)（略）    圖11  陽(yáng)性對(duì)照組肝組織切片圖(100×)（略）    圖12  陽(yáng)性對(duì)照組肝組織切片圖(400×)（略）4.2  蠅蛆殼聚糖的保肝作用研究表明，高脂血癥與脂肪肝形成密切相關(guān)，高脂血癥

14、患者脂肪肝患病率顯著高于血脂正常者5。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，從肝臟重量及肝臟膽固醇結(jié)果來(lái)看，高脂血癥模型大鼠肝重、肝臟系數(shù)及膽固醇含量顯著升高；從肝臟病理形態(tài)學(xué)結(jié)果來(lái)看，高脂血癥模型大鼠肝細(xì)胞脂肪變性及水樣變性，肝細(xì)胞明顯腫脹，匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，表明高脂飲食對(duì)大鼠肝臟細(xì)胞的脂肪變作用顯著。蠅蛆殼聚糖干預(yù)4周能顯著降低高脂血癥大鼠的肝重、肝臟系數(shù)及膽固醇含量，有效保護(hù)肝細(xì)胞，抑制肝細(xì)胞水腫及脂肪變性的發(fā)生，具有非常顯著性差異。中、高劑量蠅蛆殼聚糖能顯著降低肝重、肝臟系數(shù)（P0.01），低、中、高劑量蠅蛆殼聚糖能顯著降低肝臟膽固醇含量（P0.01）；高劑量蠅蛆殼聚糖肝臟脂肪變性程度明顯減輕，肝細(xì)胞水腫減

15、少，使肝細(xì)胞幾乎保持正常狀態(tài)。因此，可以推論，蠅蛆殼聚糖可能通過(guò)降低血脂來(lái)減輕甚至消除脂肪肝形成，同時(shí)降低肝脂質(zhì),對(duì)高脂飲食引起的大鼠肝臟細(xì)胞損傷具有修復(fù)作用，能減輕高脂血癥大鼠肝臟的脂肪變性及炎性壞死現(xiàn)象。提示蠅蛆殼聚糖可能通過(guò)調(diào)節(jié)血脂水平，降低脂肪肝和動(dòng)脈硬化病變程度，從而達(dá)到預(yù)防心腦血管疾病的目的。本實(shí)驗(yàn)只觀察了給予蠅蛆殼聚糖灌胃4周后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，長(zhǎng)期給予該產(chǎn)品是否更有利于阻止高脂血癥大鼠肝臟脂肪變性的進(jìn)展，逆轉(zhuǎn)肝臟損害，有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)?！?參考 文獻(xiàn) 】 1 張 偉，林 紅，陳宇岳.甲殼素和殼聚糖的及 前景J.南通大學(xué)學(xué)報(bào)( 自然 科學(xué) 版)，2006，5（1）：29.2 劉占濤，楊志宏