離子色譜法測(cè)定蔬菜、水果中亞硝酸鹽和硝酸鹽

1、離子色譜法測(cè)定蔬菜、水果中亞硝酸鹽和硝酸鹽上海市疾病預(yù)防控制中心 蔣蓉 金玉娥 汪國(guó)權(quán) （200336）蔬菜作為人們?nèi)粘Ｉ畋匦璧孽r活農(nóng)產(chǎn)品，其食用的安全性日益引起重視。食品中的亞硝胺是已被公認(rèn)的一種化學(xué)致癌物，其前體包括硝酸鹽和亞硝酸鹽。同時(shí)由于化肥的廣泛使用，尤其是化學(xué)氮肥，使蔬菜、水果中硝酸鹽殘留量過(guò)大。政府部門(mén)為此設(shè)定了有關(guān)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，如上海市地方標(biāo)準(zhǔn)“安全衛(wèi)生優(yōu)質(zhì)蔬菜”（DB31/T258.1-2001）中就規(guī)定，蔬菜中亞硝酸鹽限量衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)為4mg/kg，硝酸鹽為1000mg/kg。目前適用于蔬菜、水果中硝酸鹽和亞硝酸鹽的檢測(cè)方法主要有比色法1、示波極譜法1、離子色譜法2和毛細(xì)管電泳法

2、3等。本文采用離子色譜/電導(dǎo)檢測(cè)器方式，建立了蔬菜、水果中硝酸鹽和亞硝酸鹽檢測(cè)方法，具有精密度高，操作簡(jiǎn)便，易推廣的特性。DX-500離子色譜儀(美國(guó)DIONEX公司)ASRS-ULTRA抑制器ED40電導(dǎo)檢測(cè)器AS40 自動(dòng)進(jìn)樣器超聲波清洗機(jī)高速離心機(jī)石墨化炭黑柱（ENVI-CARB）（Supelco）0.01mol/L NaOH溶液：稱(chēng)取0.40gNaOH，用純水定容至1L亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.100g/L）（上海市測(cè)試技術(shù)研究所）硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.000g/L）（上海市測(cè)試技術(shù)研究所）超純水（Milliopore）IonPac AS11分析柱（4×250mm）（Dionex）

3、IonPac AG11保護(hù)柱（4×50mm）（Dionex）2CO33進(jìn)樣體積：25ul稱(chēng)取新鮮蔬菜樣品10g于研缽中，研磨勻漿，用50ml濃度為0.01mol/L NaOH溶液洗入有蓋錐形瓶中，于超聲條件下提取10min，靜置，傾取上清液于離心管中，于轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下，離心分離10min，備用。將石墨化炭黑柱（ENVI-CARB）（Supelco）用5ml純水洗滌后，將樣品溶液上柱，棄去前2ml流出液，收集后5ml樣品溶液于AS40 自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣管中，經(jīng)0.45um過(guò)濾器過(guò)濾后，自動(dòng)分析。在離子色譜的分離過(guò)程中，淋洗液中的鹽濃度對(duì)各種離子的保留時(shí)間存在明顯影響（見(jiàn)

4、圖1）。同時(shí)蔬菜中含有一定量天然Cl-，而Cl-和NO2- 出峰時(shí)間較為接近，為防止高濃度Cl- 在測(cè)定過(guò)程中對(duì)低濃度NO2- 2CO33的緩沖溶液作為淋洗液，在這一分離條件下，二者能很好地分離，即使當(dāng)樣品溶液中 Cl-濃度為100ug/ml，NO2-濃度為0.50ug/ml，兩者相差200倍時(shí)，Cl-與NO2- 也能分離良好，峰形完整，因此可以證明該色譜條件下，高濃度Cl- 對(duì)低濃度NO2- 無(wú)干擾，（見(jiàn)圖2），同時(shí)全分析時(shí)間僅為15分鐘，滿足了日常分析要求，（見(jiàn)圖3）。2-、NO3-、SO42-保留時(shí)間的影響圖圖2.樣品溶液中 Cl-100ug/ml，NO2-圖3. NO2-和NO3-標(biāo)準(zhǔn)

5、色譜圖由于NO2-和NO3-在堿性條件下以離子形式這種穩(wěn)定方式存在于溶液中，因此選用0.01mol/L NaOH溶液作為樣品提取溶劑進(jìn)行提取。由于在蔬菜、水果提取溶液中，存在大量有機(jī)化合物，如色素、黃酮、皂甙、內(nèi)脂等化合物，如不去除，會(huì)縮短色譜柱使用壽命，因此可用吸附柱來(lái)消除此種干擾。本法研究中采用三種吸附柱：OAsis HLB（Waters）、石墨化炭黑柱（ENVI-CARB）（Supelco）、大孔吸附樹(shù)脂（天津農(nóng)藥股份公司），對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的回收效率進(jìn)行了比較，（見(jiàn)表1）。結(jié)果表明，三種吸附柱對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液中NO2-和NO3-的回收效率均良好，但從實(shí)際使用中發(fā)現(xiàn)，OAsis HLB和大孔吸附樹(shù)脂

6、對(duì)有機(jī)物吸附效果不理想，尤其對(duì)色素的吸附能力差，而石墨化炭黑柱的流出液近似無(wú)色，因此選用石墨化炭黑柱作為樣品前處理柱。表1. 色譜前處理柱回收效率（%） 檢測(cè)離子OAsis HLB石墨化炭黑柱大孔吸附樹(shù)脂NO2-989695NO3-979694選擇某一NO2-和NO3- 含量較低的黃瓜作為樣品本底，準(zhǔn)確稱(chēng)量后加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按樣品處理方法處理，測(cè)定NO2-和NO3- 的含量，計(jì)算方法精密度及回收率，（見(jiàn)表2）。表2. 方法的精密度與回收率 （n = 6）檢測(cè)離子本底值（mg/kg）加入量（mg/kg）測(cè)定值（mg/kg）RSD（%）回收率（%）NO2-1019810010297100NO3-

7、10.0 59853.310453.010196102104方法的線性范圍、相關(guān)系數(shù)及檢出限采用本方法測(cè)定了NO2-、NO3-的線性關(guān)系和最低檢出限等指標(biāo)，（見(jiàn)表3）。 表3. 方法的線性范圍及相關(guān)系數(shù)檢測(cè)離子線性范圍（mg/kg）標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)檢出限（mg/kg）NO2-×102×104xNO3-×105×104x采用本分析方法對(duì)部分蔬菜、水果中NO2-和NO3- 進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果和譜圖分別見(jiàn)表4和圖4。表4. 蔬菜、水果中NO2-和NO3-結(jié)果 （mg/kg）樣品NO2-NO3-黃瓜209小青菜5.26× 103芥蘭<× 103西瓜<× 103圖4. 樣品色譜圖本文報(bào)導(dǎo)了常規(guī)離子色譜/電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè)蔬菜、水果中的硝酸鹽和亞硝酸鹽，避免了使用一些專(zhuān)用檢測(cè)器，如紫外檢測(cè)器4，且分離完全、干擾少，檢測(cè)靈敏度能達(dá)到有關(guān)衛(wèi)生安全標(biāo)準(zhǔn)要求，具有準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、易推廣的特點(diǎn)，是實(shí)際工作中較為實(shí)用的檢測(cè)方法