WB03 標(biāo)準(zhǔn)曲線的做法

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的做法1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的本質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)曲線是標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的物理/化學(xué)屬性跟儀器響應(yīng)之間的函數(shù)關(guān)系。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的目的是推導(dǎo)待測物質(zhì)的理化屬性。如果有不需要標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，比如絕對(duì)校正，我想大家都會(huì)高興。2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的適用性。這是做標(biāo)準(zhǔn)曲線的重要前提，這個(gè)問題實(shí)際很簡單，就是這樣一個(gè)問題：我的樣品的儀器響應(yīng)能否用我們所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線來推導(dǎo)其理化屬性？答案建立在儀器響應(yīng)的特異性和標(biāo)準(zhǔn)系列和樣品的匹配性上面。一方面我們總是力求儀器的響應(yīng)對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)和樣品是一視同仁；同時(shí)我們也要求我的樣本跟標(biāo)準(zhǔn)基體匹配。所以最好的標(biāo)準(zhǔn)是基體匹配標(biāo)準(zhǔn)，最好的標(biāo)準(zhǔn)曲線是工作曲線。這樣，我們也很好理解為什么大多數(shù)分析要求標(biāo)準(zhǔn)曲線和

2、樣品同批測定（除非經(jīng)過實(shí)驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的變化不大），同樣的道理也可以理解為什么我們在做大批量檢測的時(shí)候要插入QC檢驗(yàn)樣本，以考察儀器的穩(wěn)定性。即使在任何信息未知的情況下，我們還是要做我們的分析測試的（要不，我們都失業(yè)了），因?yàn)榇蠹叶际怯猛瑯拥姆椒ㄗ?，要錯(cuò)大家一起錯(cuò)；同時(shí)也因?yàn)槲覀兿嘈虐殡S科學(xué)的進(jìn)步，我們所測試的結(jié)果的準(zhǔn)確性就越接近真理。3、簡單的標(biāo)準(zhǔn)曲線-單點(diǎn)校正。對(duì)于分析成本高的測試，單點(diǎn)校正是不得以的選擇?，F(xiàn)在應(yīng)用最多的是色譜分析，很多國家標(biāo)準(zhǔn)或國際標(biāo)準(zhǔn)都采用單點(diǎn)校正，實(shí)際是建立在色譜分析的高選擇性上面：我們的空白一般都很小，我們的線性一般都很好。在有這么多驗(yàn)前概率的支撐下，色譜分析中大量的

3、單點(diǎn)校正不失為一個(gè)合理的選擇。但單點(diǎn)校正要丟失很多的信息量，這個(gè)信息量就是不確定度。4、標(biāo)準(zhǔn)曲線的點(diǎn)的分布。從不確定度理論推算樣本的不確定度時(shí)，有二個(gè)重要的結(jié)論：一、標(biāo)準(zhǔn)曲線的重心點(diǎn)處，所查出來的樣品不確定度最小。二、標(biāo)準(zhǔn)的點(diǎn)數(shù)越多，樣品的不確定度越小?；谶@兩個(gè)結(jié)論的標(biāo)準(zhǔn)曲線的做法應(yīng)該是：在樣品濃度的附近盡量的多布標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)。點(diǎn)做多做少，點(diǎn)分布如何，影響的是標(biāo)準(zhǔn)曲線所查出來的樣品的理化屬性的不確定度。好的測量應(yīng)該是不確定度小的測量，這在判斷樣品的結(jié)果是否超標(biāo)或符合限值的時(shí)候至關(guān)重要。5、實(shí)際的標(biāo)準(zhǔn)曲線?，F(xiàn)有方法趨向于標(biāo)準(zhǔn)曲線適用于較寬的樣品濃度范圍。在較寬的濃度跨度和有限的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的情況下，均勻的

4、分布濃度點(diǎn)是最佳選擇，這樣對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)曲線覆蓋的濃度范圍內(nèi)，對(duì)于所有的濃度所提供的信息量都是相同的。奇數(shù)點(diǎn)的設(shè)置來源于我們的信息，我們總是先知道濃度的范圍，在該濃度范圍先確定中間點(diǎn)，然后在中間點(diǎn)左右分布對(duì)稱的標(biāo)準(zhǔn)曲線點(diǎn)，所以出來的總是奇數(shù)個(gè)點(diǎn)。正如前面強(qiáng)調(diào)的是，點(diǎn)多點(diǎn)少，最后影響的是標(biāo)準(zhǔn)曲線所查出樣品理化屬性的不確定度，到底多大的不確定度是符合要求呢，這就是你在判斷樣品的結(jié)果是否超標(biāo)或符合限值的時(shí)候有重要意義了。6、標(biāo)準(zhǔn)曲線的評(píng)價(jià)。一般認(rèn)為標(biāo)準(zhǔn)曲線用相關(guān)系數(shù)來評(píng)價(jià)好壞，其實(shí)最科學(xué)的方法是檢驗(yàn)直線方程剩余殘差的隨機(jī)性，統(tǒng)計(jì)學(xué)上采用F檢驗(yàn)。7、現(xiàn)把對(duì)直線方程的幾個(gè)重要需要問題的理解總結(jié)如下，供參考：（

5、1）回歸方程的應(yīng)用前提。不是任何情況都去回歸，從最小二乘的定義上只考慮了響應(yīng)的誤差，使該直線到參與回歸點(diǎn)的垂直距離的和最小，換句話說就是只考慮了響應(yīng)（Y軸）上的誤差，并假定該誤差是服從正態(tài)分布的，才有不確定度計(jì)算中那個(gè)經(jīng)典的直線回歸的不確定度計(jì)算公式。從另外的角度講，譬如分段擬合，最小一乘擬合就不能用我們不確定度的公式了。如果考慮濃度(X軸)的誤差應(yīng)該采用最小似然比的方法。（2）關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)曲線的個(gè)數(shù)的問題。這個(gè)問題實(shí)際上是對(duì)于不確定度的把握。做幾個(gè)點(diǎn)就對(duì)應(yīng)多大的不確定度，單從公式上分析，點(diǎn)數(shù)增加不確定度就減少。點(diǎn)數(shù)增加可以是濃度點(diǎn)的增加，也可以是同一濃度的測定次數(shù)的增加。這個(gè)意義上講，一個(gè)濃度多

6、測幾次，用平均值算出來的方程和完全按單獨(dú)點(diǎn)計(jì)算的方程是一致的，但不確定度不一樣。（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)該是每個(gè)點(diǎn)重復(fù)1-3次，隨機(jī)安排標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)順序。重復(fù)是降低不確定度，隨機(jī)可以避免儀器測定的系統(tǒng)誤差。（4）加不加(0,0)點(diǎn)的問題。一般的儀器是默認(rèn)加入(0,0)，如果你做了空白的就應(yīng)該用(0,0)管調(diào)整儀器的基線。加入(0,0)點(diǎn)不代表該回歸曲線一定過(0,0)點(diǎn)，有時(shí)我們會(huì)采用強(qiáng)制過(0,0)點(diǎn)的回歸方法，這時(shí)的直線就是Y=bX，同樣采用最小二乘的方法。這樣回歸與普通的回歸有不同的不確定度。（5）先減空白的響應(yīng)帶入回歸方程，還是先算出空白濃度再用樣品濃度減空白濃度。有時(shí)兩種計(jì)算的結(jié)果差別非常的大。先減空白的響應(yīng)比先用空白響應(yīng)帶入直線的方法要引入少一步的不確定度。先減空白所引入的不確定度為：空