丙型肝炎患者胃粘膜細(xì)胞中HCV NS3、NS5抗原定位研究

1、    丙型肝炎患者胃粘膜細(xì)胞中HCV NS3、NS5抗原定位研究袁光輝羅朝霞黃其通郎振為安冬茹涂多瑪 【摘要】目的了解丙型肝炎病毒(HCV)在胃粘膜細(xì)胞中的感染狀況。方法采用免疫組化S-P法以抗-HCV NS3和抗-HCV NS5檢測了33例慢性丙型肝炎(CHC)患者胃粘膜組織中HCV NS3及HCV NS5抗原。結(jié)果HCV NS3、HCV NS5的檢出率分別為33.33%(11/33)和27.27%(9/33)。陽性物質(zhì)沉積于胃粘膜上皮腺體細(xì)胞胞漿，呈單個(gè)或片灶狀分布，部分病例淋巴細(xì)胞胞漿中也可見到。結(jié)論胃粘膜細(xì)胞中HCV抗原的檢出，表明HCV可能是

2、一種泛嗜性病毒，其機(jī)制及生物學(xué)意義須進(jìn)一步研究。 【關(guān)鍵詞】肝炎病毒，丙型免疫組織化學(xué)胃粘膜 Detection of HCV antigens in the gastric mucosa of patients with chronic hepatitis C Yuan Guanghui, Luo Zhaoxia, Huang Qitong, et al.The First Affiliated hospital, Hubei Medical University, Wuhan 430060 【Abstract】ObjectiveThe purpose of this paper is to

3、 investigate the expression and distribution of hepatitis C virus (HCV) in the gastric mucosa of patients with chronic hepatitis C (CHC). MethodsHCV NS3 and HCV NS5 antigen were detected by immunohistochemical method in 33 cases with CHC. ResultsHCV NS3 and HCV NS5 antigen in gastric mucosa had been

4、 detected in 33.33% (11/33) and 27.27% (9/33) of the cases,respectively.The two antigens with staining signals were mainly located in the cytoplasm of epithelial adenous cells and the positive cells distributed individually or focally. HCV antigen were also detected in the lymphocytes of some cases.

5、 ConclusionThe results showed that HCV antigen in gastric mucosa could be detected;however,the pathogenesis of the disease and the ways of infection remained to be further studied. 【Key words】Hepatitis C virusImmunohistochemistryGastric mucosa 丙型肝炎病毒(HCV)在肝外感染的研究，日益受到重視。為探討胃粘膜細(xì)胞中HCV的存在及分布狀況，我們采用免疫組化

6、S-P法對33例慢性丙型肝炎(CHC)的胃粘膜細(xì)胞進(jìn)行了HCV抗原的檢測，現(xiàn)報(bào)道如下。 材料與方法 一、病例 33例慢性丙型肝炎均為湖北醫(yī)科大學(xué)附一院和北京佑安醫(yī)院住院患者，經(jīng)血清學(xué)檢測抗-HCV或HCV RNA均陽性。臨床診斷符合1995年全國傳染病及寄生蟲病學(xué)術(shù)會議修訂標(biāo)準(zhǔn)。男25例，女8例，年齡2175歲。33例中26例有輸血及血制品史?；颊咝形哥R檢查，分別夾取胃粘膜組織24塊，標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋，5m連續(xù)切片，作HE染色及免疫組化HCV NS3、NS5的檢測。 二、主要試劑及來源 鼠抗-HCV NS3單克隆抗體由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)病毒所詹美云教授饋贈；鼠抗-HCV NS5由北

7、京醫(yī)科大學(xué)肝病研究所研制。S-P試劑盒為美國Zemed公司產(chǎn)品?？?HCV及HCV RNA試劑盒購自華美生物制品公司。三、方法及步驟 采用免疫組化S-P法檢測，步驟參照試劑盒說明書嚴(yán)格執(zhí)行。 四、實(shí)驗(yàn)對照 1. 經(jīng)免疫組化檢測HCV抗原為陰性的正常胃組織6例及正常肝組織4例為陰性對照。 2. 用反復(fù)驗(yàn)證為HCV抗原陽性的慢性丙型肝炎患者的肝臟組織切片作陽性對照。 3. 用PBS液代替一抗作空白對照。 五、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 四格表資料2檢驗(yàn)。 結(jié)果 一、胃粘膜HCV NS3、NS5抗原的檢出情況 33例患者胃粘膜中11例HCV NS3和9例HCV NS5檢出為陽性，陽性率達(dá)33.33%和27.27%，

8、其中7例陽性組織顯示兩種抗原均為陽性，其余的表現(xiàn)為HCV NS3或HCV NS5單獨(dú)陽性。此外，還觀察到胃粘膜中病毒抗原的多寡與相應(yīng)組織的炎癥病變無明顯關(guān)聯(lián)。 本組實(shí)驗(yàn)中6例胃粘膜的陰性對照均為陰性；正常肝組織及空白對照均為陰性；陽性對照為陽性。 二、兩種抗原在胃粘膜中的定位與分布 HCV NS3、NS5的陽性物質(zhì)主要位于胃粘膜上皮腺體細(xì)胞的胞漿中，陽性細(xì)胞呈單個(gè)、散在或片灶狀分布(見圖1、2)。兩種抗原在胃粘膜中的檢出率分別為33.33%和27.27%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異無顯著性(2=0.48,P0.05)。此外，部分病例的淋巴細(xì)胞的胞漿中也可見到兩種抗原。 三、胃粘膜的組織學(xué)改變 圖1HCV

9、 NS3陽性胃粘膜體細(xì)胞(胞漿呈深色) 免疫組化×200 行胃鏡檢查，鏡下均可見胃粘膜有不同程度的糜爛、充血、皺襞增粗或潰瘍等表現(xiàn)。光鏡下同步觀察經(jīng)HE染色的同一組織的連續(xù)切片，組織學(xué)表現(xiàn)為單個(gè)核細(xì)胞浸潤為主的慢性炎癥。實(shí)驗(yàn)中觀察到兩種抗原檢測為陽性患者同陰性患者胃粘膜組織的炎癥程度及病理改變無差異。 圖2HCV NS5陽性物質(zhì)在胃腺體細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá) 免疫組化×400 討論 HCV為單股正鏈RNA病毒，基因組約由9 400個(gè)核苷酸組成。近年來研究顯示，HCV不僅感染肝細(xì)胞，在肝外的許多臟器或組織，如外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)、唾液腺、腎臟、胰腺、淋巴結(jié)等均檢測到HCV和/

10、或HCV RNA1。本實(shí)驗(yàn)在丙型肝炎患者的胃粘膜上皮腺體細(xì)胞的胞漿中檢測出HCV，而細(xì)胞間質(zhì)或血管壁上沒有，為HCV在肝外胃粘膜組織中的存在提供了依據(jù)。以上結(jié)果表明HCV可能與乙型肝炎病毒(HBV)一樣具有泛嗜性。 目前有資料報(bào)道24，HCV感染與一些肝外臟器功能障礙及綜合征，如混合性冷球蛋白血癥、膜性增殖性腎小球腎炎、糖尿病等疾病均有一定聯(lián)系，但其致病機(jī)制及自身免疫特征仍不清楚。相反，也有一些HCV感染肝外組織的文獻(xiàn)表明，HCV在肝外組織中的存在，并不導(dǎo)致相應(yīng)臟器的病理改變5。本研究中HCV陽性與陰性患者的胃粘膜組織學(xué)改變較為一致，HCV的感染似乎沒有加重胃粘膜的病變。HCV的感染與相應(yīng)臟器

11、炎癥的關(guān)系還須深入觀察。 HCV進(jìn)入胃粘膜的途徑及機(jī)制尚不清楚，推測有三種可能：1. HCV感染肝臟，釋放抗原經(jīng)血行進(jìn)入胃粘膜；2. HCV抗原通過與IgG形成免疫復(fù)合物沉積在胃粘膜中；3. 通過底層蛋白(protein endonexin )的"吸附作用"，將HCV抗原導(dǎo)入胃粘膜。該蛋白僅存于猩猩、恒河猴的肝臟及人類的各個(gè)組織臟器中6，此種蛋白易與HCV抗原相結(jié)合，故使HCV抗原在肝外臟器中存在。 近年有學(xué)者在肝硬化患者的胃粘膜中通過Southern吸印術(shù)檢出HBV游離型和整合型DNA，表明HBV在胃粘膜中可能存在復(fù)制和整合7。本實(shí)驗(yàn)中采用的NS3蛋白為HCV基因組非結(jié)構(gòu)

12、蛋白區(qū)的一種重要多肽，能編碼HCV RNA，復(fù)制時(shí)基因組展開解旋酶8。但HCV在胃粘膜中是否存在增殖復(fù)制，尚待作原位雜交進(jìn)一步肯定。 作者單位：430060 武漢，湖北醫(yī)科大學(xué)附屬一院（袁光輝、羅朝霞、黃其通）；武漢石化職工醫(yī)院（安冬茹、涂多瑪）；北京佑安醫(yī)院（郎振為） 參考文獻(xiàn) 1Hadziyannis ST. The spectrum of extrahepatic manifestation in hepatitis C virus infection (Review). J Vir Hepatol,1997，4：9-28. 2Lunel F,Musset L,Cacouh P,et a

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