?；撬釋Υ笫笾w缺血再灌注后肝臟損傷的保護效應(yīng)(一)

1、牛磺酸對大鼠肢體缺血再灌注后肝臟損傷的保護效應(yīng)(一)    作者：王銀環(huán)，董淑云，張娜，趙利軍，李宏杰，孔小燕，劉麗華，張連元 【關(guān)鍵詞】 再灌注損傷；肝功能；四肢；?；撬酨rotective effect of taurine against liver injury after limb ischemiareperfusion in rats【Abstract】 AIM: To observe the liver injury and investigate the protective effect of taurine on the liver

2、function after limb ischemiareperfusion. METHODS: Thirty Wistar rats were randomly divided into control group，ischemiareperfusion(IR) group and taurine + ischemiareperfusion (TR) group (n=10 per group). The values of XOD, LDH, MDA, AST, ALT and SOD in plasma were respectively measured after 4 h limb

3、 ischemia and 4 h reperfusion in each group. XOD, MDA, ROS, MPO and Ca2+ in the liver tissues and GSHPX, Ca2+ in the liver mitochondria were observed. RESULTS: In IR group compared with the control group, the values of LDH (190.16±13.36) kat/L vs (122.39±14.87) kat/L, XOD (758.82±151.

4、53) nkat/L vs (543.61±43.51) nkat/L, MDA (5.19±0.67) nmol/L vs (1.27±0.21) nmol/L , ALT (78.40±6.45) nkat/L vs (20.50±3.70) nkat/L, AST (47.70±4.47) nkat/L vs (25.25±2.98) nkat/L in plasma increased, but SOD (1.30±0.15) kat/L vs (1.80±0.16) kat/L reduced,

5、 XOD (104.69±12.34) kat/kg vs (59.01±10.50) kat/kg, MDA (2.66±0.08) nmol/L vs (1.29±0.14) nmol/L, ROS (771.65±100.69) kat/L vs (606.45±52.01) kat/L, MPO (0.47±0.04 vs 0.28±0.06), Ca2+(0.248±0.050) mmol/L vs (0.123±0.014) mmol/L in the liver tissues i

6、ncreased, GSHPx (20.34±4.67) nkat/L vs (31.17±11.50) nkat/L in the liver mitochondria were obviously reduced, but Ca2+(0.38±0.06) mmol/L vs (0.14±0.03) mmol/L increased; In TR group compared with the IR group, the values of LDH (158.29±4.87) kat/L, XOD (758.82±151.53) n

7、kat/L, MDA (2.81±0.19) nmol/L, ALT (64.40±9.05) nkat/L, AST (38.70±8.10) nkat/L were reduced, but SOD (1.50±0.17) kat/L in plasma of TR group increased; the values of XOD (94.19±13.50) kat/L, MDA (1.67±0.12) nmol/L, ROS (710.81±55.34) kat/ L, MPO (0.36±0.04),

8、Ca2+ (0.192±0.426) mmol/L in the liver tissues decreased, the values of GSHPx(22.50±3.17) nkat/L in the liver mitochondria of TR group obviously increased, but Ca2+ (0.31±0.06) mmol/L reduced. CONCLUSION: The taurine could protect the liver function of rats after limb ischemiareperfus

9、ion.【Keywords】 reperfusion injury; liver function; extremities; taurine【摘要】目的： 觀察大鼠肢體缺血再灌注后肝臟的損傷性變化，以及?；撬釋Ω闻K損傷性變化的保護效應(yīng)，探討?；撬釋Υ笫笾w缺血再灌注后肝臟功能保護作用的可能機制. 方法： 實驗用Wistar大鼠30只，隨機分為對照(control, C)組，缺血再灌注(ischemia reperfusion, IR)組和?；撬?缺血再灌注(taurine+ ischemia reperfusion, TR)組，每組10只. 觀察缺血4 h再灌注4 h各組大鼠血漿中XOD,

10、LDH, MDA, AST, ALT和SOD的變化；觀察肝組織XOD, MDA, ROS, MPO和Ca2+的變化；觀察肝線粒體GSHPX和Ca2+的變化. 結(jié)果： 單純肢體缺血再灌注組大鼠血漿中LDH (190.16±13.36) kat/L, XOD (758.82±151.53) nkat/L, MDA (5.19±0.67) nmol/L, ALT (78.40±6.45) nkat/L, AST (47.70±4.47) nkat/L 等較正常對照組血漿中LDH(122.39±14.87) kat/L, XOD(543.61

11、±43.51) kat/kg, MDA(1.27±0.21) nmol/L, ALT(20.50±3.70) nkat/L, AST(25.25±2.98) nkat/L明顯增加，而SOD（1.30±0.15) kat/L較對照組 (1.80±0.16) kat/L明顯降低；單純肢體缺血再灌注組大鼠肝組織XOD (104.69±12.34) kat/Kg, MDA (2.66±0.08) nmol/L, ROS (771.65±100.69) kat/ L, MPO (0.47±0.04), C

12、a2+ (0.248±0.050) mmol/L較正常對照組肝組織XOD(59.01±10.50) kat/kg, MDA (1.29±0.14) nmol/L, ROS (606.45±52.01) kat/L, MPO(0.28±0.06), Ca2+ (0.123±0.014) mmol/L 均明顯增加；缺血再灌注組大鼠肝線粒體GSHPx活性(20.34±4.67) nkat/L與正常對照組(31.17±11.50) nkat/L比較明顯降低，而Ca2+濃度(0.38±0.06) mmol/L則高于

13、正常對照組(0.14±0.03) mmol/L. 牛磺酸+缺血再灌注組大鼠血漿中LDH(158.29±4.87) kat/L, XOD (758.82±151.53) nkat/L, MDA (2.81±0.19) nmol/L, ALT (64.40±9.05) nkat/L, AST (38.70±8.10) nkat/L較單純?nèi)毖俟嘧⒔M明顯降低，而SOD (1.50±0.17) kat/L則增加；肝組織XOD(94.19±13.50) kat/L, MDA (1.67±0.12) nmol/L,

14、ROS (710.81±55.34) kat/L, MPO (0.36±0.04), Ca2+ (0.192±0.426) mmol/L等指標(biāo)也較單純?nèi)毖俟嘧⒔M明顯降低，此外?；撬?缺血再灌注組大鼠肝線粒體GSHPx活性(22.50±3.17) nkat/L與單純肢體缺血再灌注組相比明顯增加，而Ca2+濃度(0.31±0.06) mmol/L則降低，損傷減輕. 結(jié)論： 牛磺酸可以減輕大鼠肢體缺血4 h再灌注4 h后所致的肝損傷.【關(guān)鍵詞】 再灌注損傷；肝功能；四肢；?；撬?引言?；撬崾求w內(nèi)含量最豐富的氨基酸，具有廣泛的生物學(xué)作用1. 已有很多

15、實驗資料2-6證明牛磺酸具有清除自由基和抗脂質(zhì)過氧化作用等. 本實驗我們在大鼠肢體缺血再灌注模型上觀察肝臟的損傷性變化以及觀察預(yù)先給予?；撬釋@一變化的影響，旨在探討肢體缺血再灌注時遠隔器官損傷及其可能的發(fā)生機制，以及?；撬岬谋Ｗo效應(yīng)，為避免或延緩肢體缺血再灌注損傷的發(fā)生、發(fā)展提供理論依據(jù).1材料和方法1.1材料健康雄性Wistar大鼠30只，體質(zhì)量（250±50）g，購自河南醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，醫(yī)動字： D410116號）；所用生化測定試劑盒均購自南京建成生物制品公司，其余所需試劑均為市售分析純產(chǎn)品，722分光光度計購自上海精密科學(xué)儀器公司，低溫高速離心機購自德國Hittech公

16、司.1.2方法統(tǒng)計學(xué)處理： 結(jié)果以x±s表示，用SPSS 11.5 統(tǒng)計分析軟件進行單因素方法分析以及SNKq檢驗.2結(jié)果2.1各組大鼠血漿ALT, AST, LDH, XOD, MDA和SOD含量的變化與正常對照組比較，單純?nèi)毖俟嘧⒔MMDA, XOD, ALT, AST和LDH均明顯升高，分別升高了3.09倍,39.6%, 2.82倍, 88.9%和55.4%,（P0.05）；而SOD則降低了27.7%，(P0.05)；?；撬?缺血再灌注組組與單純?nèi)毖俟嘧⒔M比較，MDA, XOD, ALT, AST和LDH分別降低了45.9%, 7.2%, 15.3%, 18.9%和16.8%

17、，(P0.05)；而SOD則升高了14.8%（P0.05），損傷減輕（表1）.表1各組大鼠血漿SOD, XOD, ALT, AST, LDH和MDA含量(略)aP0.05 vs bP0.01正常對照， cP0.05 vs缺血再灌注.2.2各組大鼠肝組織中XOD, MDA, MPO, ROS和Ca2+含量變化與正常對照組比較，單純?nèi)毖俟嘧⒔MXOD, MDA, ROS, MPO, LDH和Ca2+均明顯升高，分別升高了77.4%, 1.06倍, 27.2%, 66.8%, 30.1%和1.02倍，（P0.05）；?；撬?缺血再灌注組與單純?nèi)毖俟嘧⒔M比較，XOD, MDA, ROS, MPO,

18、LDH和Ca2+分別降低了10.0%, 37.2%, 7.9%, 11.7%, 24.8% (P0.05)和22.6% (P0.05)，損傷減輕(表2).表2各組大鼠肝組織XOD, MDA, ROS, MPO和Ca2+含量(略)aP0.05 vs正常對照組; cP0.05 vs缺血再灌注組.2.3各組大鼠肝線粒體中GSHPX活性和Ca2+含量變化單純?nèi)毖俟嘧⒔M與正常對照組比較，Ca2+(0.38±0.06 vs 0.14±0.03) mmol/L明顯升高，升高1.71倍（P0.05）；而GSHPX(20.34±4.67 vs 31.17±11.50)

19、nkat/L則降低了34.8%, （P0.05）；與單純?nèi)毖俟嘧⒔M比較，?；撬?缺血再灌注組Ca2+(0.31±0.06 mmol)降低了18.4% （P0.05），而GSHPX(22.50±3.17 nkat/L)則升高了10.7% （P0.05），損傷減輕.3討論大量研究證實組織缺血缺氧后的損傷不僅發(fā)生在缺氧當(dāng)時，更主要的是發(fā)生在缺血組織迅速恢復(fù)血供時9. 肝臟損傷是肢體缺血再灌注致遠隔器官損傷的一個非常重要的臟器損傷.反映肝功能的ALT, AST和反映脂質(zhì)過氧化損傷的XOD是三個很重要的酶. 當(dāng)肝在受到損傷的早期，血清ALT, AST含量即可升高，是評價肝功能的非常

20、重要的指標(biāo). XOD是氧自由基產(chǎn)生的主要酶. 在肝細胞受損時，此酶活性明顯升高. SOD和GSHPx對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，此酶能清除超氧陰離子自由基，防止膜脂質(zhì)過氧化連鎖反應(yīng)所造成的損傷，保護細胞. MDA是脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，是衡量機體組織過氧化損傷程度的指標(biāo). LDH也屬于胞質(zhì)酶，其血漿水平的高低可反映組織受損的嚴重程度. MPO是中性粒細胞（PMN）嗜天青顆粒中含量較高的酶，組織中MPO活性的高低可定量表示組織中PMN聚集的程度.在本實驗中我們發(fā)現(xiàn)，大鼠肢體缺血再灌注后肝組織中MPO含量升高，表明PMN在肝內(nèi)血管黏附、聚集或游出到間質(zhì)增多，進而促使黃嘌呤脫氫酶大量轉(zhuǎn)化為

21、黃嘌呤氧化酶，引起“呼吸爆發(fā)”，產(chǎn)生大量氧自由基. 同時，由于SOD及GSHPx活性降低，清除自由基能力下降，自由基大量堆積，引發(fā)過氧化反應(yīng)，肝組織受到損傷. 由于細胞膜遭到破壞，通透性增加，致胞質(zhì)酶和溶酶體酶漏出，造成組織和細胞的進一步損傷10. 我們在實驗中觀察到的血漿中LDH, ALT, AST升高就是由于細胞膜通透性升高，酶釋放入血所致. 組織的過氧化反應(yīng)增強，主要表現(xiàn)為MDA增多. 這些改變又加重了組織細胞損傷，形成自由基增多與組織損傷之間的“惡性循環(huán)”.?；撬崾求w內(nèi)含量最豐富的氨基酸，具有廣泛的生物學(xué)作用1. 具有穩(wěn)定細胞膜、調(diào)節(jié)細胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)和抗脂質(zhì)過氧化作用11，是機體內(nèi)源性抗損傷和細胞保護物質(zhì)，可明顯減輕肢體缺血再灌注后的細胞壞死12. 本實驗中我們觀察到灌服?；撬岬拇笫笾w缺血再灌注后，肝細胞損傷程度明顯減輕，同時SOD， GSHPx活性增加. 本實驗結(jié)果提示：?；撬崮軠p輕肢體缺血再灌注后繼發(fā)的肝臟損傷，而這一效應(yīng)與其避免或減輕肢體缺血再灌注后機體的過氧化反應(yīng)增強有關(guān). 它的這一作用對保護機體避免或延緩肢體缺血再灌注損傷的發(fā)生、發(fā)展有一定的意義. 本實驗結(jié)果提示：?；撬峥赡芡ㄟ^提高LIR后肝細胞及其線粒體內(nèi)自由基清除酶活性、減少自由基生成和穩(wěn)定細胞膜而達到保護肝臟的作用. 其具體機制還有待于進一步闡明.【參考文獻】1 汪朝暉，張賢康，繆明用，等. ?；撬釋Υ笫蟾?/p>