雪蓮果離體培養(yǎng)及植株再生體系的建立

1、生物技術(shù)北方園藝2008(7:210212 第一作者簡介:馬杰(19602,女,河南開封人,本科,副教授,現(xiàn)從事生物技術(shù)研究工作。E 2mail :mjie0924 ?；痦椖?河南省科技攻關(guān)資助項目(0524050005。收稿日期:2008-02-10雪蓮果離體培養(yǎng)及植株再生體系的建立馬杰,崔波,張仙云,袁秀云(鄭州師范高等?？茖W(xué)校生物工程研究所,河南鄭州450044摘要:對雪蓮果幼嫩葉片和腋芽離體培養(yǎng)與植株再生過程進行了研究,建立了雪蓮果的再生體系。該體系以雪蓮果葉片和腋芽為材料進行離體培養(yǎng),結(jié)果表明:MS 可作為雪蓮果再生體系的基本培養(yǎng)基;葉片、腋芽誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽培養(yǎng)基為MS +6

2、2BA 2.0mg/L +NAA 0.2mg/L +蔗糖3%;繼代培養(yǎng)基為MS +62BA 1.0mg/L +NAA 0.1mg/L +蔗糖3%;生根培養(yǎng)基為1/2MS +IAA 0.3mg/L +蔗糖3%。關(guān)鍵詞:雪蓮果;離體培養(yǎng);再生體系中圖分類號:Q 943.1文獻標(biāo)識碼:A 文章編號:1001-0009(200807-0210-03雪蓮果S mallanthus sonchi f olius (Poepp .et Endl.H.Robinson 又稱菊薯、亞貢,為菊科多年生草本植物。原產(chǎn)南美洲安第斯山脈,果實為塊根,形狀如甘薯,被稱為地下水果。雪蓮果葉富含硒和多糖、酚酸、黃酮類等功能性

3、成分,果實含有豐富的寡聚果糖和人體必須氨基酸和酚酸、類黃酮和砧類物質(zhì),具有降血脂,減肥,調(diào)節(jié)內(nèi)分泌,防治血管老化,預(yù)防骨質(zhì)疏松,抗菌等作用,特別適合糖尿病人和減肥者食用。因其特殊的保健功能及藥用價值,越來越得到廣泛的重視,在食品、醫(yī)藥方面有廣闊的應(yīng)用前景。隨著對雪蓮果研究的深入,雪蓮果將成為一種極具市場潛力的植物。雪蓮果的常規(guī)繁殖靠種子或扦插,速度慢,周期長,成本較高。該試驗探索了雪蓮果再生體系建立的方法和條件,并為該植株開展快繁等進一步的研究奠定了基礎(chǔ)。1材料和方法1.1材料雪蓮果葉片和腋芽。1.2誘導(dǎo)培養(yǎng)取雪蓮果的幼嫩葉片、腋芽置流水中沖洗15min ,無菌操作以70%酒精進行表面滅菌15

4、s ,用無菌水沖凈后,置0.1%升汞溶液中振搖5min ,然后以無菌水沖洗4遍。葉片用無菌解剖刀將周邊切下棄去,保留部分切成大小約0.5cm 2,接種于14號培養(yǎng)基中(表1,每種培養(yǎng)基接種數(shù)均為40。腋芽滅菌后剝離至生長點,接種于1、2號培養(yǎng)基中,統(tǒng)計產(chǎn)生不定芽數(shù)。1.3增殖培養(yǎng)將誘導(dǎo)形成的不定芽分割成單個芽苗,每瓶接種數(shù)一致,轉(zhuǎn)入6、913號6種培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)(表3,分別統(tǒng)計數(shù)量。圖1雪蓮果的不定芽誘導(dǎo)1.4生根培養(yǎng)將高26cm 植株分別放入表4所列的1013號4種培養(yǎng)基中(表4,每種培養(yǎng)基5瓶,每瓶放7株植株,即每種培養(yǎng)基接種35株,置光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng),1520d 觀察不定根的生長情

5、況。1.5培養(yǎng)條件及培養(yǎng)基所有培養(yǎng)條件均為:培養(yǎng)溫度(25±2,光照強度2500lx ,光照時間每天12h ;所用培養(yǎng)基除特別注明外均為MS 培養(yǎng)基,蔗糖0.3%,瓊脂0.8%,p H 值(5.8±0.1。2結(jié)果2.1雪蓮果葉片、腋芽不定芽的誘導(dǎo)葉片在1周左右,開始陸續(xù)在其周邊出現(xiàn)白色或淡黃色至黃綠色的突起(見圖1,其愈傷組織漸漸向外蔓延變大、變厚,之后在其突起處形成34或更多不定芽,30d 左右長成1015mm 的無根小苗。誘導(dǎo)不定芽成12北方園藝2008(7:210212生物技術(shù)功率最高44.00%(表1。腋芽誘導(dǎo)最初表現(xiàn)為萌動、基部膨大,長出白色或淡黃色愈傷組織,然后

6、形成不定芽。腋芽誘導(dǎo)成功率高,達100%(表2。 圖2雪蓮果的繼代培養(yǎng)表1葉片在MS 培養(yǎng)基誘導(dǎo)不定芽的試驗結(jié)果KT 1.0+NAA 0.122522.73表2腋芽在MS 培養(yǎng)基誘導(dǎo)不定芽的試驗結(jié)果編號激素/mg L -1接種數(shù)量產(chǎn)生不定芽的外植體數(shù)不定芽誘導(dǎo)率/%162BA 1.0+I BA 0.155100262BA 1.0+NAA 0.1441002.2不定芽的繼代培養(yǎng)繼代培養(yǎng)是實現(xiàn)快繁的重要環(huán)節(jié)之一,培養(yǎng)一段時間后,為了防止培養(yǎng)物老化,要及時將其接種到新鮮培養(yǎng)基中,進行繼代培養(yǎng),以使不定芽能夠順利地增殖、生長,從而得到大量幼苗(見圖2,供進一步生根試驗。繼代培養(yǎng)過程中,不定芽基部有愈傷

7、組織生長,其上有若干新的不定芽長出。選用62BA 和NAA 的不同濃度配比作為研究因子,經(jīng)過試驗,選擇增殖系數(shù)高的培養(yǎng)基(表3。 圖3雪蓮果的生根培養(yǎng)表3不同激素組合對不定芽在MS 培養(yǎng)基增殖的影響編號激素/mg L -1培養(yǎng)天數(shù)接種數(shù)量增殖數(shù)增殖系數(shù)262BA 1.0+NAA 0.120520 4.00562BA 1.0+NAA 0.220730 4.29662BA 2.0+NAA 0.220631 5.17762BA 2.0+NAA 0.420519 3.80862BA 4.0+NAA 0.420818 2.25962BA 4.0+NAA 0.8206142.332.3不定根的誘導(dǎo)生根試驗

8、統(tǒng)計生根時間、根的形態(tài)和生根數(shù)量,結(jié)果見表4。表4生根培養(yǎng)(1/2MS 編號激素/mg L -1IAA 0.3>201919100.00注:表中所有統(tǒng)計數(shù)量污染、褐變數(shù)均未統(tǒng)計在內(nèi)。3討論與結(jié)論用雪蓮果的嫩葉為外植體,在MS 培養(yǎng)基可誘導(dǎo)出不定芽,細胞分裂素62BA 配合生長素NAA ,其濃度分別為1.0mg/L 和0.1mg/L 時效果最好。以腋芽為外植體,在1、2號培養(yǎng)基中不定芽的誘導(dǎo)率均達100%,但在2號培養(yǎng)基上單株不定芽的數(shù)量較多(24個,故以MS +62BA 1.0mg/L +NAA 0.1mg/L 為最佳。在繼代培養(yǎng)時,隨著細胞分裂素生長素濃度水平不斷提高,不定芽增殖系數(shù)提

9、高到一定程度轉(zhuǎn)而下降,較高濃度的細胞分裂素配合較低濃度的生長素有利于從生芽的增殖,培養(yǎng)基MS +62BA 2.0mg/L +NAA 0.2mg/L 的增殖效果較為理想,在此培養(yǎng)基中,不定芽增殖系數(shù)最高達5.17。生根培養(yǎng)試驗結(jié)果表明,以NAA 和IAA 做生根試驗過程中,根部形態(tài)有很大不同,表現(xiàn)在用IAA 培養(yǎng)基植株的根細長,而用NAA 培養(yǎng)基植株的根短粗(圖3。生根時間也有差別,11號培養(yǎng)基上植株的完成生根時間最短,生根率100%,且根的形態(tài)完好,植株成活率也很高。其他有些生根率雖也達100%,或時間較長,大于20d ;或根細長不利于植株成活。故選用MS +NAA 0.5mg/L +蔗糖3%

10、作為雪蓮果的生根培養(yǎng)基,形成的植株根系完好,成活率高。綜上所述,雪蓮果在短時間內(nèi)可完成從誘導(dǎo)到再生植株形成的整個過程,實現(xiàn)了該植株的再生體系的建立,該體系的建立大大加快了育苗進程,對雪蓮果種苗快速繁殖和規(guī)模化生產(chǎn)有著重要的指導(dǎo)意義。參考文獻1Aybar M ,Riera A.Hypoglycemic effect of the water extract of S mall 2anthus sonchi f olius (Y acon Leaves in normal and diabetic rats J .Journalof Ethnopharmacology ,2001,74(2:125

11、2132.2Valentova K,Cvak L ,Muck A ,et al.Antioxidant activity of exrracts112生物技術(shù)北方園藝2008(7:212214不同激素配比對碧桃離體快繁的影響張文娥,潘學(xué)軍,楊仕國,曾家艷(貴州大學(xué)農(nóng)學(xué)院,貴州貴陽550025摘要:以碧桃的單芽莖段為試材,以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基,研究了不同的激素濃度及配比對碧桃腋芽誘導(dǎo)、增殖和生根的影響,結(jié)果表明:碧桃腋芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+KT0.5mg/L+NAA0.1mg/L,在此培養(yǎng)基中碧桃腋芽誘導(dǎo)率可達93.3%,且生長良好;最佳增殖培養(yǎng)基為MS+KT0.3mg/L+NAA0.0

12、8mg/L,其增殖率可達75%,增殖系數(shù)為1.5;最佳的生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.3mg/L,生根率為50%。該研究結(jié)果可為生產(chǎn)提供一定的參考。關(guān)鍵詞:激素;碧桃;離體快繁中圖分類號:S685.99;S603.6文獻標(biāo)識碼:A文章編號:1001-0009(200807-0212-03碧桃是薔薇科桃屬的一個變種,早春開花,其花多重瓣,花色艷麗無比,具有極高的觀賞價值,適合于湖濱、溪流、道路兩側(cè)和公園布置,也適合小庭院點綴和盆栽觀賞,還常用于切花和制作盆景1。目前,碧桃的繁殖多采用播種、扦插和嫁接的方法,但在自然條件下碧桃播種繁殖的周期長,繁殖速度極慢;扦插難生根,苗木整齊度差,且易在繁殖

13、過程中積累病毒,繁殖較困難;嫁收稿日期:2008-02-11接繁殖也受時間、氣候和嫁接技術(shù)等條件的限制2。而且碧桃較容易受到病毒和真菌細菌的侵染,長期采用營養(yǎng)繁殖的植株傳毒快、發(fā)病率高,危害范圍廣,從而會影響種苗的生長發(fā)育,樹勢衰弱,引起品種退化。采用組織培養(yǎng)技術(shù),以碧桃新生枝條為材料快速繁殖獲得大量無菌組培苗,為碧桃生產(chǎn)應(yīng)用提供了技術(shù)支撐,對碧桃基因工程育種有一定的參考價值。1材料與方法1.1試驗材料以重瓣碧桃(Prunus percica var.duplex的單芽莖段為試材,取自貴州大學(xué)花卉資源圃。1.2試驗設(shè)計from the leaves of S mallanthus sonchi

14、 f oliusJ.European Journal of Nutri2 tion,2003,42(1:61266.3錢林,丁長河,李里特,等.雪蓮果的化學(xué)組分及其功能特性J.食品研究與開發(fā),2006,27(6:1792180,188.4李卓亞.雪蓮果化學(xué)成分及其藥理作用的研究進展J.食品與藥品, 2007,9(6:41243.5馬杰,何蔚葒,崔波.蝴蝶蘭原球莖狀體的誘導(dǎo)及增殖J.河南科學(xué), 2005,23(1:51253.T issu e C u ltu re in V itro and E stab lishm ent o f R egeneration System o f Smalla

15、nthus sonchif oliusMA Jie,CUI Bo,ZHANG X ian2yun,Y UAN X iu2yun(Bio2technoloy Institute,Zhengzhou T eachers C ollege,Zhengzhou,Henan450044,ChinaAbstract:The regeneration system of S mallanthus sonchi f olius was established in this paper by using leaves and axillary buds as explants in vitro culture.The results showed that MS can be used as the basic media of the regeneration system of S mallanthus sonchi f olius.The appropriate medium used for calli and bud