哮喘豚鼠內(nèi)臟感覺傳入部位P物質(zhì)含量的變化

1、    哮喘豚鼠內(nèi)臟感覺傳入部位P物質(zhì)含量的變化*        摘要目的：研究哮喘豚鼠內(nèi)臟感覺傳入各部位內(nèi)P物質(zhì)含量的變化，探討P物質(zhì)在哮喘發(fā)病中的作用機(jī)制。方法：放射免疫分析。結(jié)果：哮喘豚鼠內(nèi)臟感覺傳入部位P物質(zhì)水平(結(jié)狀神經(jīng)節(jié)88.23±16.32，C7C8段脊神經(jīng)節(jié)77.22±13.26，T1T2段脊神經(jīng)節(jié)75.96±15.67,T3T5段脊神經(jīng)節(jié)75.50±19.28，C7T5段脊髓后角68.25±13.39，孤束核

2、(81.63±17.68)pg/g W.W)明顯高于正常對照組(結(jié)狀神經(jīng)節(jié)70.28±12.29,C7C8段脊神經(jīng)節(jié)59.87±17.36，T1T2段脊神經(jīng)節(jié)65.35±13.24，T3T5段脊神經(jīng)節(jié)63.23±12.88,C7T5段脊髓后角57.52±18.69，孤束核(68.37±16.89)pg/g W.W. (P0.05)。結(jié)論：下呼吸道和肺的內(nèi)臟感覺傳入徑路各部位的P物質(zhì)可能參與哮喘發(fā)病過程。主題詞P物質(zhì)；結(jié)狀神經(jīng)節(jié)；神經(jīng)節(jié)，脊；哮喘；豚鼠 The alterations of substance P levels

3、 in the viscerosensoryafferent sites of the asthmatic guinea pigFANG Xiu-Bin, TONG Xiao-Jie, LI Song-Lin, WANG Tie-MinBrain Research Institute, China Medical University, Shenyang(110001)Abstract AIM:To explore the changes of substance P(SP) levels in the viscerosensory afferent sites of the asthmati

4、c guinea pig and the mechanism of SP effect in asthma.METHOD：Radioimmunoassay.RESULTS：SP levels in the viscerosensory afferent sites of the asthmatic guinea pig were much higher than those in the normal control.CONCLUSION：SP in the viscerosensory afferent sites of the inferior respiratory tract and

5、lung might be involved in the pathogenesis of asthma.MeSHSubstance P; Nodose ganglion; Ganglia, spinal; Asthma; Guinea pigsP物質(zhì)(substance P，SP)為含11個(gè)氨基酸的神經(jīng)肽，廣泛分布于中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)1，2，具有收縮呼吸道平滑肌的作用3。作者以往的研究發(fā)現(xiàn)，哮喘豚鼠下呼吸道SP含量4和SP免疫反應(yīng)纖維5明顯多于對照組，對哮喘病人的研究表明，下呼吸道SP免疫反應(yīng)纖維多于非哮喘病人6，提示SP可能參與哮喘發(fā)病機(jī)制。然而，作為一級傳入系統(tǒng)的結(jié)狀神經(jīng)節(jié)和C7T5段脊

6、神經(jīng)節(jié)是下呼吸道和肺的內(nèi)感覺神經(jīng)的胞體所在地，脊髓后角和孤束核分別是這一內(nèi)臟傳入的二級中繼站，哮喘時(shí)這些部位的SP是否有變化，尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。本文應(yīng)用放射免疫分析方法，旨在探討下呼吸道和肺內(nèi)臟感覺傳入徑路各部位的SP含量與哮喘發(fā)病的關(guān)系。材料與方法實(shí)驗(yàn)用雌性健康豚鼠，體重200250 g，隨機(jī)分成4組：實(shí)驗(yàn)組，正常對照組，實(shí)驗(yàn)對照組，實(shí)驗(yàn)對照組。實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物16只，首先經(jīng)腹腔注射10%卵蛋白水溶液1 mL，10 d后將動(dòng)物置于1%卵蛋白水溶液噴霧的半封閉玻瓶中。23 min，動(dòng)物開始哮喘發(fā)作，表現(xiàn)為呼吸加深頻率加快，肋間隙凹陷，呼吸頻率達(dá)160次/min以上，重者甚至哮喘致死。約35 min后將

7、動(dòng)物從玻瓶中取出，哮喘仍可持續(xù)2030 min，甚至更長。隔日激發(fā)哮喘1次，共78次。正常對照組動(dòng)物16只。實(shí)驗(yàn)對照組動(dòng)物8只，該組動(dòng)物致敏后不激發(fā)哮喘。實(shí)驗(yàn)對照組8只，在哮喘后的靜止期即激發(fā)哮喘的第2 d處死動(dòng)物。將正在哮喘的實(shí)驗(yàn)組和對照各組豚鼠分別斷頭后，迅速在冰塊上取出雙側(cè)迷走神經(jīng)結(jié)狀神經(jīng)節(jié)，雙側(cè)C7T5?國家自然科學(xué)基金資助 (No.39670335)段脊神經(jīng)節(jié)和對應(yīng)節(jié)段脊髓后角及孤束核區(qū)，經(jīng)液氮速凍，置-70密封貯存。組織稱重后，切成2 mm×2 mm碎塊置于0.5 mol/L的乙酸中95水溶10 min，用Ultra-Turrax勻漿機(jī)做成勻漿，離心20 min(4,7

8、400×g)，上清液分裝凍干，密封貯存于-70備用。放射免疫分析試驗(yàn)盒系Peninsula Lab(美國cat, No.RIK-7451)產(chǎn)品，每個(gè)試管內(nèi)含待測樣品100 L，免抗SP血清100 L及125I-SP 100 L，混勻后于4孵育48 h，再加入羊抗兔血清室溫孵育2 h，離心(2 800×g)20 min后吸去上清，用-射線計(jì)數(shù)器測定，標(biāo)準(zhǔn)曲線按測試盒要求制作。所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，兩均數(shù)間差異顯著性用t檢驗(yàn)法判定。結(jié)果應(yīng)用特異性放免分析法檢測了實(shí)驗(yàn)性哮喘豚鼠結(jié)狀神經(jīng)節(jié)，C7T5段脊神經(jīng)節(jié)，相應(yīng)節(jié)段脊髓后角及孤束核內(nèi)的SP的含量

9、。結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)哮喘組上述各部位的SP含量明顯高于正常對照組(P0.05)；實(shí)驗(yàn)對照、組、正常對照組各組間比較，SP含量無明顯差異(P0.05)，這表示致敏后不激發(fā)哮喘和哮喘間歇期上述各部位的SP含量與正常對照組無明顯差異，SP含量的變化只發(fā)生在哮喘時(shí)(表1、表2)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，結(jié)狀神經(jīng)節(jié)和孤束核內(nèi)的SP含量，明顯高于C7T5段脊神經(jīng)節(jié)和相應(yīng)節(jié)段脊髓后角(表1、表2)，這可能是由于下呼吸道和肺經(jīng)由迷走神經(jīng)傳導(dǎo)的內(nèi)臟感覺只經(jīng)過結(jié)狀神經(jīng)節(jié)到達(dá)孤束核，而經(jīng)由交感神經(jīng)傳導(dǎo)的則經(jīng)C7T5多段脊神經(jīng)節(jié)到達(dá)脊髓后角，但C7T5各段脊神經(jīng)節(jié)的SP水平總量仍大大高于結(jié)狀神經(jīng)節(jié)，說明經(jīng)交感神經(jīng)感覺纖維傳遞的SP多

10、于經(jīng)迷走神經(jīng)感覺纖維傳送的。表1哮喘豚鼠結(jié)狀神經(jīng)節(jié)和脊神經(jīng)節(jié)內(nèi)SP含量與對照組比較Tab 1 Comparison of SP levels in nodose ganglia and spinal ganglia of asthmatic guinea pig and controls (pg/g Tissue,±s)GroupnNodosegangliaC7C8 spinalgangliaT1T2 spinalgangliaT3T5 spinalgangliaExperimental asthma1688.23±16.32*77.22±13.26*75.96&

11、#177;15.67*75.50±19.28*Normal control1670.25±12.2959.87±17.3665.35±13.2463.23±12.88Experimental control1873.50±18.2461.47±15.6264.65±17.4766.39±15.26Experimental control2874.36±20.7863.59±17.9464.88±14.8963.86±16.66*P0.05,vs control gr

12、oups 表2哮喘豚鼠脊髓后角和孤束核內(nèi)SP含量與對照組比較Tab 2 Comparison of SP levels in dorsal horn of spinal cordand solitary nucleus of asthmatic guinea pig and controls (pg/g Tissue,±s)GroupnDorsal horn of C7T5 spinal cordSolitary nucleusExperimentalasthma1668.25±13.29*81.63±17.68*Normalcontrol1657.52±

13、;18.6768.37±16.89Experimentalcontrol 1856.32±16.6770.65±19.96Experimentalcontrol 2854.79±18.5773.59±20.21*P0.05,vs control groups 討論支氣管哮喘是以氣道阻塞和氣道高反應(yīng)性為特征的慢性氣道炎癥性疾病，其發(fā)病機(jī)制至今尚不完全清楚，除免疫性炎癥學(xué)說外，神經(jīng)源性炎癥學(xué)說越來越受到關(guān)注。SP是最早被發(fā)現(xiàn)的速激肽家族成員7，速激肽類多肽均具有不同程度收縮呼吸道平滑肌、促使氣道血管擴(kuò)張、血漿滲出和粘液分泌的作用8，9，作者也曾證明

14、哮喘豚鼠下呼吸道和血液中SP水平明顯高于對照組4，哮喘豚鼠下呼吸道SP免疫反應(yīng)纖維數(shù)量多于對照組5；Nieberk等檢測了哮喘病人支氣管肺泡灌流液中SP的含量，發(fā)現(xiàn)SP水平明顯高于非哮喘病人10。這些研究結(jié)果提示，SP可能參與哮喘發(fā)病機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明，哮喘豚鼠結(jié)狀神經(jīng)節(jié)，C7T5段脊神經(jīng)節(jié)及相應(yīng)節(jié)段脊髓后角和孤束核內(nèi)SP水平明顯高于正常對照組，這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果尚未有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。哮喘發(fā)作時(shí)呼吸道上皮的損傷暴露了上皮內(nèi)的感覺神經(jīng)末梢，促進(jìn)上皮內(nèi)C類感覺神經(jīng)末梢釋放感覺性神經(jīng)肽類物質(zhì)，從而引起呼吸道平滑肌收縮、粘膜水腫等氣道炎性反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)證明了哮喘豚鼠C7T5段脊神經(jīng)節(jié)和結(jié)狀神經(jīng)節(jié)內(nèi)SP水平明顯

15、高于對照組，間接說明了SP是感覺神經(jīng)元胞體合成、通過軸突運(yùn)輸?shù)竭_(dá)周圍組織的感覺神經(jīng)末梢釋放，從而導(dǎo)致哮喘豚鼠下呼吸道SP含量升高4?？梢姡嗍笙潞粑繱P含量升高，主要來源于C7T5段脊神經(jīng)節(jié)和結(jié)狀神經(jīng)節(jié)。脊神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中樞突(C類細(xì)纖維)大部分終止于脊髓后角，結(jié)狀神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中樞突終止于延髓孤束核。本實(shí)驗(yàn)證明的哮喘豚鼠C7T5段脊髓后角和孤束核內(nèi)SP含量明顯比對照組升高，提示這二處的SP可能主要分別來源于C7T5段脊神經(jīng)節(jié)和結(jié)狀神經(jīng)節(jié)，至于這些部位SP含量變化在哮喘發(fā)病的中樞調(diào)節(jié)作用的機(jī)制，尚待進(jìn)一步探討。作者單位：方秀斌佟曉杰李松林王鐵民：中國醫(yī)科大學(xué)腦研究所(沈陽 110001)張然

16、：沈陽市紅十字會(huì)醫(yī)院內(nèi)科參考文獻(xiàn)1方秀斌，何維為，于頻.人脊神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的P物質(zhì)和K物質(zhì)免疫反應(yīng).中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1988，17：135.2方秀斌，何維為，于頻.P物質(zhì)免疫反應(yīng)在人脊髓的定位.中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1987，16：24.3Frossard N, Barnes PJ. Effect of tachykinins in small human airways. Neuropeptides, 1991,19:157.4方秀斌，王鐵民，于頻，等.哮喘時(shí)下呼吸道和血液中P物質(zhì)含量的變化.中國病理生理雜志，1993，9：236.5方秀斌，王鐵民，于頻，等.哮喘時(shí)下呼吸道的P物質(zhì)能免疫反應(yīng)纖維.

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