不同產(chǎn)地的蒲公英中綠原酸定性鑒別與含量測定

1、不同產(chǎn)地的蒲公英中綠原酸定性鑒別與含量測定邱志宏，張淑慧（河北省人民醫(yī)院藥學(xué)部，河北 石家莊市 050051）摘要 目的：測定不同產(chǎn)地蒲公英中綠原酸含量。方法：薄層色譜法定性鑒別，高效液相色譜法含量測定，色譜條件為：Sino Chrom ODS-BP C18柱（5µm, 4.6mm×250mm ），流動(dòng)相為0.02mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液甲醇（7030），流速1.0ml·min-1 ，檢測波長323nm。結(jié)果：回歸方程：綠原酸Y=1.60X+0.00154，r=0.9995，平均回收率(n=3)為99.4%，RSD為0.96%。結(jié)論：東北產(chǎn)地蒲公英

2、中綠原酸含量最高，湖北產(chǎn)地綠原酸含量最低。關(guān)鍵詞 不同產(chǎn)地；綠原酸；薄層色譜法，高效液相色譜法 中圖分類號(hào) 文獻(xiàn)標(biāo)示碼 B 文章編號(hào)Determination of Chlorogenic Acid and Caffeic Acid in Taraxacum from different habitats(Qiuzhihong,Zhangshuhui Department of Pharmacy,Hebei General Hospital,Shijiazhuang 050051)ABSTRACT：OBJECTIVE To determine the content of chlorogeni

3、c acid in Taraxacum from different habitats. METHODS using the G-TLC measurement to measure chlorogenic acid； HPLC analysis was performed on a Sino Chrom ODS-BP C18 column(5µm, 4.6mm×250mm)，0.02mol·L-1 phosphate buffer-methonal(70: 30) as mobile phase. the flow rate was 1.0ml·min

4、-1 and the detection wavelength at 323nm 。RESULTS chlorogenic acid Y=1.60X+0.0015，r=0.9995，the average recovery was 99.4%. CONCLUSION The content of chlorogenic acid of Taraxacum(Dongbei province) is the highest, The content of chlorogenic acid of Taraxacum(Hubei province) is the lowerestKEY WORD：di

5、fferent habitats； chlorogenic acid；TLC；HPLC 蒲公英（Taraxacum mongolicum Hand）屬于菊科植物1，以全草入藥，在我國各地分布廣泛，蒲公英被譽(yù)為“天然抗生素”，具有廣譜抗菌作用2。蒲公英藥用資源極為豐富，目前最常用的有6個(gè)產(chǎn)地。本文用薄層色譜法定性鑒別不同產(chǎn)地蒲公英中的綠原酸，用高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地蒲公英中綠原酸含量。測定結(jié)果表明，不同產(chǎn)地蒲公英中綠原酸含量有明顯差異，為制劑選用地道藥材提供依據(jù)。1 儀器與試藥2695型高效液相色譜儀，2487型紫外檢測器，Empower色譜工作站，美國Waters公司；色譜柱Sino Ch

6、rom ODS-BP（4.6mm×250mm,5µm ），大連依利特分析儀器有限公司；恒溫干燥箱（山東濰坊精鷹醫(yī)療器械有限公司）；甲醇為HPLC級，美國Fisher公司；薄層層析硅膠G（青島海洋化工有限公司制造, 化學(xué)純）；乙酸乙酯（北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司，AR,20071230乙酸）；丁酯（天津市化學(xué)試劑一廠，AR,060728），鹽酸（石家莊試劑廠，AR,071123）；甲酸（天津市化學(xué)試劑一廠，AR,051213）；冰乙酸（天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心出品，AR,20060600）；乙醚（天津市富宇精細(xì)化工有限公司，AR,071115），氫氧化鈉(天津化學(xué)試劑三

7、廠, AR)；羧甲基纖維素鈉（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，化學(xué)純,20040506）； 綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110753-200413）；藥材：河北、河南、湖北、東北、山東、內(nèi)蒙干燥蒲公英全草。2 方法與結(jié)果2.1 薄層鑒別 對照品溶液的制備 精密稱取110°C干燥至恒重的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品2mg于棕色瓶中，加甲醇10mL制成0.2mg/mL的溶液，作為對照品溶液。綠原酸供試品溶液的制備 取蒲公英藥材500g，加913倍量水，靜置30min，加熱煮沸1.5h，趁熱過濾，得濾液，藥渣再加6倍量水，加熱煮沸1h，趁熱過濾，棄去藥渣，得濾液，合并濾液，濃縮，經(jīng)過兩次醇沉、回流

8、后，即得蒲公英膏子，稱取1g蒲公英浸膏，加乙酸乙酯液搖勻提取2次，每次10mL。合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL，使溶解做為供試品溶液。 薄層展開 取對照品溶液10uL，供試品溶液5uL點(diǎn)于同一硅膠G薄層板（含1%CMC-Na）上，以乙酸丁酯-甲酸-水（10：2：3）的上層清夜作為展開劑，飽和15-20min，展開距離12-13min，自然晾干。在紫外燈（365nm）下檢視。在綠原酸對照品相應(yīng)位置顯示有藍(lán)色和藍(lán)綠色熒光斑點(diǎn)。樣品薄層色譜圖如下（圖1）。2.2 含量測定色譜條件 色譜柱：Sino Chrom ODS-BP C18（5µm, 4.6mm×250mm ），流

9、動(dòng)相：0.02mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液甲醇（7030），流速：1.0ml·min-1 ，檢測波長：323nm，進(jìn)樣量：10l。2.2.2溶液的制備2.2.2.1對照品溶液的制備 精密稱取咖啡酸對照品20mg，置100mL容量瓶中，加甲醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻即得0.2mg·mL-1咖啡酸對照品貯備液；精密稱取綠原酸對照品20mg，至100mL容量瓶中，加甲醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻即得0. 2 mg·mL-1綠原酸對照品貯備液。2.2.2.2供試品溶液的制備 取蒲公英藥材500g，加913倍量水，靜置30min，加熱煮沸1.5h，趁熱

10、過濾，得濾液，藥渣再加6倍量水，加熱煮沸1h，趁熱過濾，棄去藥渣，得濾液，合并濾液，濃縮，經(jīng)過兩次醇沉、回流后，即得蒲公英膏子，膏子用微孔濾膜過濾兩次，再稀釋30倍，即得供試品溶液。 2.2.3 線性關(guān)系的考察 分別精取濃度為20、40、60、80、100 µg·mL-1的咖啡酸對照品溶液10µL ，按上述色譜條件分別進(jìn)樣，以咖啡酸濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=2.59X+0.0049，r=0.9997，在20100µg·mL-1范圍內(nèi)呈線性關(guān)系（n=5）；分別精取濃度為10、20、30、40、50 µg·mL

11、-1的綠原酸對照品溶液10µL ，按上述色譜條件分別進(jìn)樣，以綠原酸濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=1.60X+0.0015，r=0.9995，在1050g·mL-1范圍內(nèi)呈線性關(guān)系（n=5）。2.2.4 精密度試驗(yàn) 取高、中、低3個(gè)濃度的對照品溶液，在上述色譜條件下，每個(gè)濃度重復(fù)進(jìn)樣3次，進(jìn)樣量10L，計(jì)算精密度：咖啡酸RSD1.226%、綠原酸RSD 1.774%。2.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，在室溫下放置，分別在0、1、3、5、7h測定咖啡酸和綠原酸的峰面積，結(jié)果表明咖啡酸和綠原酸在7h內(nèi)穩(wěn)定，RSD分別為0.84%和1.65%。2.2.6 加樣回收

12、試驗(yàn) 分別精密吸一定量的對照品溶液，依次加入精密吸取已知河北產(chǎn)地供試品，按供試品溶液制備項(xiàng)下處理，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，回收率結(jié)果見表1。表1 咖啡酸、綠原酸回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab1 Results of recovery test of Chlorogenic Acid（n=3） 編號(hào) 樣品含量µg 對照品加入量µg 測得量µg 回收率% 平均值% RSD%1 0.144 0.256 0.392 97.972 0.144 0.342 0.483 99.69 99.10 0.713 0.144 0.427 0.587 99.21 4 0.040 0.126 0.

13、165 99.015 0.040 0.167 0.210 100.90 99.40 0.96 6 0.040 0.209 0.246 98.012.7 不同產(chǎn)地蒲公英中綠原酸含量測定 不同產(chǎn)地的蒲公英藥材按供試品溶液制備項(xiàng)下處理后，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，用外標(biāo)法計(jì)算蒲公英中咖啡酸、綠原酸的含量，結(jié)果見表2，色譜圖見圖1。表2 不同產(chǎn)地蒲公英中咖啡酸、綠原酸含量Tab2 The content of Caffeic Acid and Chlorogenic Acid in Taraxacum from different habitats編號(hào) 產(chǎn)地 綠原酸含量（mgg-1）1 河北 0.03

14、422 河南 0.03393 湖北 0.02654 東北 0.04055 山東 0.02906 內(nèi)蒙 0.0313 A B圖1色譜圖Fig1 HPLC chromatogramsA. 對照品 (reference substance) B.蒲公英藥材（Taraxacum）Lys. 咖啡酸（Caffeic Acid） kfs. 綠原酸（Chlorogenic Acid）圖2七個(gè)產(chǎn)地蒲公英原藥材中綠原酸薄層圖譜數(shù)據(jù)4 討論在薄層鑒別中所用硅膠G板均為6g硅膠G加3倍量的水并加1%羧甲基纖維素鈉于研缽中向同一方向研勻，靜置2-3分鐘待消泡后手動(dòng)鋪板，于水平臺(tái)晾干后置恒溫干燥箱中110°C活化30min，取出輕放入干燥器中備用，認(rèn)為此厚度及該溫度下活化的硅膠板用于點(diǎn)樣效果優(yōu)于其他用量,配比及其他溫度下活化的硅膠板。在綠原酸薄層層析實(shí)驗(yàn)采用乙酸丁酯冰乙酸水（1