Module 6 定量PCR儀日常維護(hù)_圖文

1、Module 6 : 定量PCR儀日常維護(hù) 電腦及軟件的維護(hù) 定量PCR儀主機(jī)的維護(hù) 2 | Life Technologies Proprietary & Confidential | 9/9/2011 專機(jī)專用 工程師現(xiàn)場(chǎng)安裝時(shí)，會(huì)確認(rèn)計(jì)算機(jī)是否合乎要求 請(qǐng)勿自行更換電腦 請(qǐng)勿自行安裝其它第三方軟件 3 | Life Technologies Proprietary & Confidential | 9/9/2011 預(yù)防電腦病毒 不使用與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的移動(dòng)存儲(chǔ)器 使用U盤(pán)時(shí)，必須先把U盤(pán)在自己的電腦上格式化 最好使用專用的U盤(pán) 4 | Life Technologies Proprietar

2、y & Confidential | 9/9/2011 數(shù)據(jù)線的插拔 避免經(jīng)常拔插連接計(jì)算機(jī)與定量PCR儀的數(shù)據(jù)線 必須在關(guān)閉電腦及主機(jī)的情況下才可以拔插數(shù)據(jù)線 刪除多余的USB設(shè)備 5 | Life Technologies Proprietary & Confidential | 9/9/2011 執(zhí)行硬盤(pán)碎片整理程序當(dāng)運(yùn)行實(shí)時(shí)定量PCR 儀及使用軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí),計(jì)算機(jī)會(huì)刪除并創(chuàng)建若干文件,計(jì)算機(jī)硬盤(pán)的空閑空間會(huì)被分割成越來(lái)越多的小塊當(dāng)硬盤(pán)驅(qū)動(dòng)器上文件以分解的碎片存儲(chǔ)時(shí),程序需要更長(zhǎng)的時(shí)當(dāng)硬盤(pán)驅(qū)動(dòng)器上文件以分解的碎片存儲(chǔ)時(shí)程序需要更長(zhǎng)的時(shí)間才能存取文件碎片整理實(shí)用程序?qū)⒁粋€(gè)文件分解開(kāi)的

3、多個(gè)碎片合并在一起,并存儲(chǔ)到硬盤(pán)的同一個(gè)位置,從而優(yōu)化系統(tǒng)性能。 執(zhí)行硬盤(pán)碎片整理程序 如何整理硬盤(pán)碎片?在Windows 桌面上,選擇Start All ProgramsAccessories System tools Disk Defragment單擊Defragment now 執(zhí)行硬盤(pán)碎片整理程序何時(shí)需要整理磁盤(pán)碎片?建議每月執(zhí)行一次或當(dāng)碎片比例達(dá)到20%以上時(shí)。 操作系統(tǒng)更新何時(shí)執(zhí)行Windows Service Pack 更新?除非美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司代表通知您更新操作系統(tǒng)否則請(qǐng)不要更除非美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司代表通知您更新操作系統(tǒng),否則請(qǐng)不要更新連接定量PCR 儀的計(jì)算機(jī)的操作系統(tǒng)

4、。新版本的MicrosoftWindows 操作系統(tǒng)可能與SDS 軟件存在沖突,并導(dǎo)致儀器不能正常運(yùn)行。如果您希望安裝service pack(更新包以更新操作系統(tǒng),應(yīng)查看隨SDS 軟件提供的版本說(shuō)明,避免兼容性問(wèn)題。 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)備份建議經(jīng)常定期進(jìn)行備份*.sds或*.eds文件:刻錄光盤(pán)或轉(zhuǎn)移數(shù)據(jù)到其它電腦 電腦及軟件的維護(hù)定量PCR儀主機(jī)的維護(hù) 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境電源:建議配置UPS(1.5 KVA,電池供電2小時(shí)以上或穩(wěn)壓器通風(fēng):儀器的通風(fēng)應(yīng)該沒(méi)有阻擋溫度:實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該配有空調(diào),控溫在20-25溫度實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該配有空調(diào)控溫在2025濕度:控制相對(duì)濕度在20-80%空間:易于操作,安全空氣潔凈 電源開(kāi)關(guān)

5、如果主機(jī)和計(jì)算機(jī)連續(xù)開(kāi)機(jī)使用,每周應(yīng)該進(jìn)行一次關(guān)閉主機(jī)電源開(kāi)關(guān),關(guān)閉計(jì)算機(jī),然后重新打開(kāi)計(jì)算機(jī)和儀器主機(jī)電源開(kāi)關(guān)關(guān)閉計(jì)算機(jī)然后重新打開(kāi)計(jì)算機(jī)和儀器電源開(kāi)關(guān)的操作注意正確的計(jì)算機(jī)和主機(jī)電源開(kāi)關(guān)順序 主機(jī)表面清潔使用不脫毛的布?jí)K擦拭儀器表面切勿使用有機(jī)溶劑清潔定量PCR儀 7300/7500定量PCR儀主機(jī)的維護(hù)-v1.4ROI校正 ROI(Regions of Interest 校正 用于生成目標(biāo)區(qū)數(shù)據(jù)。 校正期間生成的數(shù)據(jù)，允許 SDS 軟件映射樣本塊（Block上反應(yīng) 孔的位置，從而在儀器操作期間 ，使軟件可判斷出反應(yīng)板上特定 反應(yīng)孔中熒光強(qiáng)度的增量。 由于定量 PCR儀使用一組濾光片 分離

6、檢測(cè)運(yùn)行期間生成的熒光能 量，所以必須為每個(gè)濾光片生成 校正圖像，以修正光學(xué)系統(tǒng)中的 微小差異。 16 | Life Technologies Proprietary & Confidential | 9/9/2011 準(zhǔn)備ROI校正 7300：7300 ROI校正反應(yīng)板 7500：7500 ROI校正反應(yīng)板 17 | Life Technologies Proprietary & Confidential | 9/9/2011 運(yùn)行 ROI 校正 18 | Life Technologies Proprietary & Confidential | 9/9/2011 分析并產(chǎn)生 ROI 校正

7、數(shù)據(jù) Snapshot 19 | Life Technologies Proprietary & Confidential | 9/9/2011 ROI 校正 建議每半年執(zhí)行一次目標(biāo)區(qū)（ROI）校正 如果懷疑儀器光路受到影響如搬動(dòng)儀器，建議進(jìn)行目標(biāo)區(qū) （ROI）校正 執(zhí)行目標(biāo)區(qū)（ROI）校正使用目標(biāo)區(qū)（ROI）校正板 20 | Life Technologies Proprietary & Confidential | 9/9/2011 背景校正背景校正程序測(cè)量定量PCR儀的背景熒光強(qiáng)度在運(yùn)行校正程序期間,定量PCR 儀在10 分鐘內(nèi)連續(xù)地讀在運(yùn)行校正程序期間定量PCR10取背景校正反應(yīng)板的熒

8、光強(qiáng)度,運(yùn)行溫度為60隨后,SDS 軟件計(jì)算運(yùn)行期間所收集到的熒光強(qiáng)度的平均值,提取出結(jié)果并保存到校正文件中軟件在今后的分析中將自動(dòng)調(diào)用此校正文件,從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中扣除背景信號(hào) 運(yùn)行背景校正準(zhǔn)備背景反應(yīng)板: a. Spectral 光譜校正試劑盒(p calibration kit中的背景板(Background plate(Background plate b. 如果光譜校正套件中的背景反應(yīng)板 多次使用后不好了您可自己創(chuàng)建多次使用后不好了,您可自己創(chuàng)建一 個(gè)背景反應(yīng)板以執(zhí)行背景校正。 運(yùn)行背景校正創(chuàng)建背景校正反應(yīng)板文件 運(yùn)行背景校正運(yùn)行背景反應(yīng)板 運(yùn)行背景校正分析背景數(shù)據(jù) 72000運(yùn)行背景校正

9、72000 應(yīng)該怎么做如果背景信號(hào)大于72000,應(yīng)該怎么做? 加熱槽熒光污染的判斷執(zhí)行背景校正,當(dāng)背景熒光信號(hào)異常(強(qiáng)度超過(guò)72000或7500的濾光片E超過(guò)90000時(shí)實(shí)驗(yàn)中,連續(xù)出現(xiàn)不正常的偏高信號(hào),并表明可能存在熒光物質(zhì)污染時(shí) 清除熱槽中的污染 7300/7500 清除熱槽中的污染清潔樣本塊中污染的反應(yīng)孔: a a. 用移液器吸取少量水或乙醇并滴入每個(gè)污染的反應(yīng) 孔中。b吹打數(shù)次 b. 吹打數(shù)次。 c. 將廢液吸入廢液杯中。 如未能有效清除污染物,重復(fù)以上步驟:乙醇三次,去離子水三次 確認(rèn)反應(yīng)孔中的殘留液體完全干燥 確認(rèn)已除去熱槽中的熒光污染物 運(yùn)行背景校正板確認(rèn)污染已除去 如未除去,

10、重新清潔 使用最新的背景校正 建議每月執(zhí)行次背景校正背景校正建議每月執(zhí)行一次背景校正如果發(fā)現(xiàn)信號(hào)異常,建議立即進(jìn)行背景校正執(zhí)行背景校正使用背景校正板 純熒光校正純熒光校正根據(jù)一系列熒光標(biāo)準(zhǔn)品收集 熒光數(shù)據(jù) 軟件將不同純熒光標(biāo)準(zhǔn)品的熒光信息分 析并存儲(chǔ)到程序中每次實(shí)驗(yàn)運(yùn)行中,SDS 軟件接收原始光SDS 譜信號(hào)。軟件將原始光譜與純熒光文件中包含的純熒光標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較,以確定 樣本中使用的每一種熒光的光譜表現(xiàn) 純熒光校正 在每次執(zhí)行純熒光反應(yīng)板之前,必須執(zhí)行ROI 校正和背景校正 使用純熒光校正板 準(zhǔn)備純熒光反應(yīng)板文件 運(yùn)行純熒光反應(yīng)板 分析純熒光校正數(shù)據(jù) 純熒光校正建議每半年執(zhí)行一次純熒光校正如果

11、使用自定義的熒光必須進(jìn)行純熒光校正如果使用自定義的熒光,必須進(jìn)行純熒光校正執(zhí)行純熒光校正使用純熒光校正板 更換鹵素?zé)舾鶕?jù)需要更換鹵素?zé)舢?dāng)您拿取鹵素?zé)魰r(shí),請(qǐng)戴上無(wú)粉手套 更換鹵素?zé)?7300/7500 使用正確的支架7300/7500可以使用:96孔板0.2ml光學(xué)反應(yīng)管0.2ml八聯(lián)管如果你使用的是0.2ml光學(xué)反應(yīng)管或八聯(lián)管,請(qǐng)使用光學(xué)平蓋 7500/7500 Fast定量PCR儀主機(jī)的維護(hù)-v2.0 定儀機(jī)維護(hù)定量PCR儀主機(jī)的維護(hù)在Windows 桌面上,選擇Start Programme files Applied Biosystems 7500Applied Biosystems75

12、00Software 7500 Softwarev2.0軟件自動(dòng)檢測(cè)校正數(shù)據(jù),如未校正或校正過(guò)期,會(huì)彈出提示對(duì)話框,點(diǎn)擊OpenInstrument MaintenanceInstrument MaintenanceManager,打開(kāi)校正界面。 定量PCR 儀主機(jī)的維護(hù)在Instrument Maintenance 定儀機(jī)維護(hù)Instrument Maintenance Manager 界面,依次完成如下校正:ROIBackgroundOpticalDyeRNase P (可選 定量PCR 儀主機(jī)的維護(hù)ROI 定儀機(jī)維護(hù)校正 St t C lib iti 定量PCR 儀主機(jī)的維護(hù)ROI校正:

13、按照軟件向?qū)нM(jìn)行操作定儀機(jī)維護(hù)校正按照軟件向?qū)нM(jìn)行操作 定量PCR 儀主機(jī)的維護(hù)ROI 校正:按照軟件向?qū)нM(jìn)行操作定儀機(jī)維護(hù)校正按照軟件向?qū)нM(jìn)行操作 定量PCR 儀主機(jī)的維護(hù)完成ROI 校正定儀機(jī)維護(hù)校正成功,則Status 顯示為Current 。校正失敗,則Status 顯示為Failed 。 定量PCR 儀主機(jī)的維護(hù)B k d 背景校正定儀機(jī)維護(hù)Background 背景校正:選擇背景校正界面點(diǎn)擊Start Calibration 根據(jù)提示放入背景反應(yīng)板點(diǎn)擊Start Run察看背景校正結(jié)果 分析背景校正數(shù)據(jù)校正成功,則Status 顯示為Current 。校正失敗,則Status 顯示為Failed 。 定量PCR 儀主機(jī)的維護(hù)Optical 光路校正:定儀機(jī)維護(hù)選擇Optical 校