用熒光原位雜交技術(shù)對性腺發(fā)育不全患者性染色體分析的研究

1、用熒光原位雜交技術(shù)對性腺發(fā)育不全患者性染色體分析的研究            【關鍵詞】  熒光原位雜交    【摘要】 目的 探討熒光原位雜交（FISH）技術(shù)比常規(guī)染色體分析，在性腺發(fā)育不全患者性染色體檢測中的優(yōu)越性。方法 應用CEP，Xp11.1-q11.1（綠色標記）及CEP，Yq12Satellite（紅色標記）DNA探針，對30例常規(guī)染色體分析有性染色體異常者，行單色或雙色FISH對比分析。結(jié)果 25例核型一致，符合

2、率83.33%。5例不一致，其中1例45，X0/46，X，i（Xq），嵌合比例倒置。3例有Y染色體，但無Y熒光信號。1例47，XYY（女性），出現(xiàn)45，X0/46，XY/47，XYY三種核型嵌合。以上FISH結(jié)果，更符合臨床體征。結(jié)論 FISH檢測性腺發(fā)育不全患者性染色體異常，比常規(guī)染色體分析更準確、可靠，有一定臨床實用意義。關鍵詞 熒光原位雜交 常規(guī)染色體分析 性腺發(fā)育不全 性染色體異常Study on sex chromosome analysis of gonad agenesis patients with FISH   Li Yuzhong，Liu Yanqiu，

3、Wang Zhanghua，et al.     Jiangxi Provincial Women and Children Hospital，Nanchang330006. 【Abstract】 Objective To study the advantages of dual-color fluorescence in situ hybridization（DIFH）in sex chromosome analysis of gonad agenesis patients over traditional chromosome analysis.Methods

4、 Analysed30cases of sex chromosome abnormalities found by traditional chromosome analysis with single or dual-color FISH of green-labelled CEP，Xp11.1-q11.1and red-labelled CEP，Yq12satelliteDNA probes.Results The karyotypes of25cases are the same as traditional method，with the agreement rate being83.

5、33%.The results of other five cases were different.One was45，X0/46X，i（Xq），with reverse mosaic，Three cases had Y chromosome but without Y fluorescence signal.One was47.XYY（female），with the mosaic of45，X0/46，XY/47，XYY.The results of FISH were more consistent with clinical features.Conclusion FISH anal

6、ysis of sex chromosome abnormalities of gonad agenesis patients is more accurate and reliable than traditional chromosome analysis，it has better practicalbility.  Key words FISH traditional chromosome analysis gonad agenesis sex chromosome abnormality   在人類遺傳病研究中，性別發(fā)育有異常是常見的遺傳病，發(fā)病率為1%

7、2% 1  ，性的分化是由性染色體決定的。性染色體無論在數(shù)量及結(jié)構(gòu)發(fā)生任何改變，均可導致性腺發(fā)育不全，因此性染色體是決定性別的基礎。熒光原位雜交（FISH）是當今迅速發(fā)展起來的分子生物學與細胞遺傳學、免疫學相結(jié)合的新技術(shù)。它不僅可檢測中期分裂相，同時還能在間期細胞中顯示雜交信號 2  。本研究為觀察FISH技術(shù)比常規(guī)染色體分析，在性腺發(fā)育不全患者性染色體異常檢測中的優(yōu)越性，現(xiàn)報告如下。1 資料與方法    1.1 一般資料 選2003年6月2004年6月，因原發(fā)性或繼發(fā)性閉經(jīng)，反復流產(chǎn)，不孕不育，無精癥，生殖器及性腺發(fā)育不全來本院門診就診，經(jīng)常

8、規(guī)染色體分析為性染色體異常者，或核型與臨床體征不一致者共計30例。1.2 方法2 結(jié)果    2.1 30例性腺發(fā)育不全患者常規(guī)染色體G顯帶及FISH兩種檢測方法的比較 見表1。表1 30例性染色體異常患者常規(guī)染色體及FISH對比分析結(jié)果 （略）2.2 性腺發(fā)育不全患者染色體異常部分FISH圖片 （1） 47，XYY（女性）標本，雙色FISH見間期核及中期分裂相顯示，有1綠及1綠1紅與1綠2紅3種不同類型熒光信號。（2）47，XXX標本雙色FISH顯示，見間期核及中期分裂相有2綠1紅熒光信號。（3）47，XXX單色FISH顯示，間期核及中期分裂相均有3個綠色熒光信

9、號。（4）45，X0/46，X，i（Xq），間期核顯示1個及2個綠色熒光信號，中期分裂相有2個綠色熒光信號，其中1條X長臂等臂染色體在綠色熒光信號中央?yún)^(qū)見橫形裂隙。見圖14。3 討論    3.1 FISH檢測性染色體嵌合型異常比常規(guī)染色體分析結(jié)果更準確可靠 常規(guī)染色體分析只能觀察占比例少的中期分裂相，判斷的準確程度，完全依賴中期分裂相的數(shù)量與質(zhì)量，因此有一定的局限性。而FISH技術(shù)除可分析中期分裂相外，還可分析占比例多的間期細胞。尤其是在極短的時間內(nèi)，對分散及顯帶欠佳的分裂相，以及部分顯帶技術(shù)不易分辨的異常，均可做出準確判斷。如一些倒位、微小缺失、復雜畸變等 4

10、  ，彌補了常規(guī)染色體分析中的不足。本研究通過30例性發(fā)育不全患者，常規(guī)染色體及FISH兩種方法對比分析。有25例核型一致，符合率占83.33%。有5例結(jié)果不致:其中（1）1例核型為45，X0/46，X，i（Xq）的嵌合體。常規(guī)染色體分析，46，X，i（Xq）的中期分裂相比45，X0的中期分裂相數(shù)目多。而FISH分析，45，X0的細胞數(shù)比46，X，i（Xq）的細胞數(shù)多，出現(xiàn)嵌合比例倒置。本例患者由于45，X0的細胞數(shù)占多數(shù)，因此臨床表現(xiàn)更符合Turner綜合征（見序號3）。（2）2例45，X0/46，XY兩性嵌合核型，常規(guī)染色體分析有Y染色體存在，但FISH檢測無Y熒光信號。本2例患

11、者臨床表現(xiàn)為女性性腺發(fā)育不全，可能與 Yq12信號缺失及同時存在45，X0的細胞嵌合有關（見序7、 8）。（3）1例常規(guī)染色體分析為47，XYY，社會性別為女性患者。FISH分析為45，X0/46，XY/47，XYY三種核型的嵌合，患者不具備典型47，XYY綜合征的臨床表現(xiàn)，而是兩性畸形，這大概與體內(nèi)存在3種不同類型的嵌合核型有關（見序11）。（4）1例46，XY（小Y）無精癥男性，常規(guī)染色體分析有Y染色體，F(xiàn)ISH無Y熒光信號（見序號16）?？紤]本例無精、不育，與Yq12缺失有關。符合Y染色體長臂缺失，可影響精子的生成。精子的發(fā)生基因位于Yq11.23至Yq12鄰接區(qū)域之間的報道 5

12、0; 。以上5例FISH分析比常規(guī)染色體分析更符合臨床體征。    3.2 FISH技術(shù)對觀察染色體微小畸變比常規(guī)染色體分析更清晰直觀 本文從2例45，X0/46，X，i（Xq）中期分裂相，F(xiàn)ISH圖中清晰可見。在1條X長臂等臂染色體近著絲粒，熒光信號中央?yún)^(qū)有一橫形裂隙。將著絲粒分成兩半，形成2個等大，對稱的熒光小點。分別附著在2個X長臂等臂染色體近著絲粒上，這一現(xiàn)象在常規(guī)染色體分析中很難看清楚。而在FISH圖中能更清晰、直觀可見。以上結(jié)果，符合X長臂等臂染色體的形成機制。是在著絲粒區(qū)出現(xiàn)橫裂，短臂缺失，長臂復制而成的報道 6  。  

13、;  以上研究說明:FISH技術(shù)檢測范圍廣，特異性強，能準確定位，易檢出占比例小的嵌合體及微小缺失，染色體畸變等。比常規(guī)染色體分析更準確可靠。對性發(fā)育不全患者性染色體異常的檢測，診斷及指導治療，均具有重要的臨床實用意義。由于FISH技術(shù)受探針特異性的限制，只能使用已知位點探針。同時價格較昂貴，作為常規(guī)檢測方法尚存在一定的困難。在研究性發(fā)育不全患者性染色體異常時，應首選常規(guī)染色體分析，發(fā)現(xiàn)異常而又不能確診的病例，再采用FISH檢測方法加以證實。因此，F(xiàn)ISH不能完全取代常規(guī)染色體分析，只有兩者適當?shù)亟Y(jié)合，才能取得更理想的臨床實用效果。（本文圖片見封三）參考文獻1 Su H，F(xiàn)ai Y，

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