梗阻性腎間質(zhì)纖維化大鼠血流變及微循環(huán)研究

1、梗阻性腎間質(zhì)纖維化大鼠血流變及微循環(huán)研究 10-08-25 11:00:00 編輯：studa20 作者：呂小燕，孫學(xué)剛，劉強(qiáng)，呂志平【摘要】 目的觀察單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)致大鼠腎間質(zhì)纖維化的血液流變學(xué)及微循環(huán)的變化特點(diǎn)，從絡(luò)病角度探討腎間質(zhì)纖維化的中醫(yī)病機(jī)。方法 建立單側(cè)輸尿管梗阻致大鼠腎間質(zhì)纖維化模型，觀察腎間質(zhì)纖維化大鼠全血粘度150/s切變率、30/s切變率、5/s切變率、1/s切變率、紅細(xì)胞壓積、舌下及耳廓的脈絡(luò)變化，同時檢測腎纖維化指標(biāo)、血清肌酐及尿素氮。結(jié)果腎間質(zhì)纖維化模型組的全血粘度150/s切變率、30/s切變率、5/s切變率、1/s切變率、紅細(xì)胞壓積、透明質(zhì)酸酶(HA)

2、、層粘連蛋白(LN)、型前膠原(PC)、IV型膠原(C IV)、血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)與假手術(shù)組相比顯著升高;且腎纖維化指標(biāo)(HA、LN、 PC、C IV)與全血粘度的各個切變率及紅細(xì)胞壓積呈顯著正相關(guān)。結(jié)論腎間質(zhì)纖維化大鼠血流變及微循環(huán)的變化特點(diǎn)一定程度上反應(yīng)了腎間質(zhì)纖維化“絡(luò)脈瘀組”的中醫(yī)病機(jī)，為抗腎間質(zhì)纖維化“活血通絡(luò)”的治療提供初步依據(jù)。 【關(guān)鍵詞】 腎間質(zhì)纖維化; 血液流變學(xué); 全血粘度; 紅細(xì)胞壓積Abstract：ObjectiveTo observe the changes of blood rheology and microcirculation in ren

3、al interstitial fibrosis and unilateral ureteral obstruction (UUO) . MethodsRat fibrosis models was established by unilateral ureteral obstruction. Hematocrit and blood viscosity at shear rate in 150/s, 30/s, 5/s, 1/s, renal fibrosis serum markers, serum creatinine and blood urea nitrogen were detec

4、ted respectively in sham operation and model group; microcirculation microscope was used to observe the thread of hypoglottis and auricle in rats. ResultsThe indexes of hematocrit, blood viscosity at different shear rate, hyaluronic acid (HA), laminin (LN), procolagen type (PC), collagen type (C), s

5、erum creatinine (SCr) and blood urea nitrogen (BUN) were increased significantly after fibrosis appeared, and there had positive correlation between blood viscosity at different shear rate, hematocrit and serum concentration of the fibrosis markers(HA，LN， PC，C IV). ConclusionThe tendency of blood rh

6、eological and microcirculation changes hint the pathogenesis of renal interstitial fibrosis including “blood- stasis blocking collaterals”. This may be one of the causes about using “promoting blood circulation to remove meridian obstruction” method to treat renal interstitial fibrosis.Key words：Ren

7、al interstitial fibrosis; Hemorheology; Blood viscosity; Hematocrit腎間質(zhì)纖維化(RIF)是各種慢性腎臟疾病進(jìn)展到終末期腎功能衰竭共有的病理改變1，隸屬于絡(luò)病學(xué)說中“腎絡(luò)病”的范疇，其形成的病理過程與絡(luò)病學(xué)說中的“久病入絡(luò)”相一致2,3。近來有關(guān)學(xué)者認(rèn)為，血流變及微循環(huán)的異常變化是反映絡(luò)脈病變的主要客觀指標(biāo)4,5。本文通過觀察UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化血流變及微循環(huán)的變化特點(diǎn)，擬從絡(luò)病角度闡述腎間質(zhì)纖維化的中醫(yī)病機(jī)。1 材料與儀器1.1 動物SPF級SD大鼠16只，雌雄各半，體質(zhì)量180200g, 由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗動物中心提供(合

8、格證號：NO 0038558)。1.2 試劑及儀器透明質(zhì)酸、層粘連蛋白、III型前膠原、IV型膠原放免測試盒，上海海研醫(yī)學(xué)生物技術(shù)有限公司，批號20081201。GTM-STEELLEX R-80A血液流變儀，北京中勤世帝科學(xué)儀器有限公司;意大利愛康ECHO LCD全自動生化儀，意大利樂高特公司;olympus szx16體視顯微鏡，上海嘉儀信息科技有限公司;SN-682型放射免疫計數(shù)器，上海核福光電儀器有限公司。2 方法2.1 造模腎纖維化模型組(以下簡稱：模型組)大鼠于9 Am以水合氯醛(350 mg/kg)腹腔麻醉，取左側(cè)腹腎區(qū)切口,用眼科鑷分離左側(cè)輸尿管,用5號手術(shù)線,在腎盞處和腎下極

9、處分別結(jié)扎輸尿管,但并不離斷輸尿管,并保護(hù)好腎包膜及周圍組織,術(shù)后把腎置于原位,逐層縫合腹膜、肌肉、皮膚;假手術(shù)組：除不結(jié)扎輸尿管外,其余步驟與模型組相同;術(shù)中嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。模型及假手術(shù)組大鼠均予普通飼料，自由飲水，共5周。2.2 動物分組SPF級SD大鼠16只隨機(jī)均分為兩組：假手術(shù)組和模型組。2.3 舌下、耳廓脈絡(luò)圖像采集造模期滿前1天20：00時，動物禁食，于次日8：00時用10%水合氯醛腹腔麻醉，取仰臥位,用鑷子輕輕夾住大鼠舌尖從左輕輕拉出,直至露出舌根部,使整個舌體與大鼠軀干成直線或有小于15的夾角，用80倍的體視顯微鏡觀察舌下脈絡(luò);后取側(cè)臥位，將左側(cè)耳廓置于“耳托”上，呈平面展開

10、，再用80倍的體視顯微鏡觀察耳廓背側(cè)脈絡(luò);所有采集圖像導(dǎo)入聯(lián)想電腦，采用ACDsee v3. 2和windows圖片和傳真查看器看圖軟件查看。2.4 指標(biāo)檢測圖像采集完畢后，剖開腹腔，取左側(cè)腎組織用中性福爾馬林固定，常規(guī)脫水，HE染色，光鏡下觀察腎組織細(xì)胞的病理改變及腎間質(zhì)纖維的增生程度，并參照文獻(xiàn)6制定膠原纖維增生程度半定量標(biāo)準(zhǔn);腹主動脈采血，用真空負(fù)壓抗凝采血管收集：取0.8 ml的全血用GTM-STEELLEX R-80A血液流變儀測定不同切變率的全血粘度;取1 ml的全血用10 cm長的普通壓積管，離心15 min 3 000 r/min測定紅細(xì)胞壓積;剩余全血室溫靜置1.5 h，2

11、500 r/min，4C離心15 min，取上層血清，分裝于離心管中;用ECHO LCD全自動生化分析儀測定血清SCr、BUN;用SN-682型放射免疫r計數(shù)器測定血清HA、LN、PC、CIV(按試劑說明書進(jìn)行)。2.5 統(tǒng)計方法上述各項指標(biāo)以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示，用統(tǒng)計軟件SPSS11.5進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗、雙變量相關(guān)分析、Kruskal-Wallis H及Mann-Whitney U非參數(shù)檢驗。3 結(jié)果3.1 動物生存狀態(tài)觀察模型組大鼠皮毛略枯槁、干澀，喜靜少動，動作遲緩;假手術(shù)組大鼠皮毛濃密、光潔，體態(tài)正常;體質(zhì)量日漸增加。兩組大鼠存活良好。3.2 大鼠舌下、耳廓脈絡(luò)的變化見圖12。模型組大鼠舌質(zhì)紫暗舌下脈絡(luò)紫黑增粗;耳廓潤澤、脈絡(luò)增粗，略曲張。假手術(shù)組大鼠舌質(zhì)鮮紅潤澤舌下脈絡(luò)清晰可見;耳廓潤澤、脈絡(luò)清晰。3.3 腎功(SCr、BUN)的變化 見表1