HPLC法測(cè)定注射用雷貝拉唑鈉的含量及有關(guān)物質(zhì)

1、HPLC法測(cè)定注射用雷貝拉唑鈉的含量及有關(guān)物質(zhì)趙俊,陳祥峰*,唐燕平(南京海光應(yīng)用化學(xué)研究所,南京211112摘要 目的:建立注射用雷貝拉唑鈉含量及有關(guān)物質(zhì)的HPLC檢測(cè)方法。方法:采用Sh i m adzu CLC-OD S不銹鋼柱(150mm 4 6mm,5 m;流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液-乙腈(6040,流速1 0mL!m i n-1,檢測(cè)波長(zhǎng)為292n m。結(jié)果:雷貝拉唑鈉與其相鄰雜質(zhì)峰能完全分離,雷貝拉唑鈉在16 9168 5 g!mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0 9999,高、中、低3種不同濃度的回收率為99 0%100 8%(n=9。結(jié)論:本方法操作簡(jiǎn)便,精密度好,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,

2、可用于該制劑的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞:雷貝拉唑鈉;含量;有關(guān)物質(zhì);高效液相色譜法中圖分類號(hào):R917文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):0254-1793(200903-0423-04HPLC deter m inati on of rabeprazole sodi u m for i njectionand its rel ated s ubstancesZ HAO Jun,CHEN X iang-feng*,TANG Y an-ping(Nan ji ng H ai guang App lied Che m istry In stitute,N an ji ng211112,Ch i naAbst ract

3、 Objective:To establish anH PLC m e t h od for the and deter m i n ati o n of assay re lated substances of Rabe prazole Sodiu m for I n j e ction。M et hods:The chro m atograph w as equ i p ped w ith a150mm 4 6mm sta i n less co l um n(m ode:l Sh i m adzu CLC-ODS,w ith m obile phase o f a m i x t u r

4、e of phosphate buffer and acetonotrile (6040,flo w rate of1 0mL!m i n-1and detection w avelength at292nm。R esults:The data sho w s t h at t h is m ethod can clearly separate R abeprazole peak fro m its nearby i m purity peaks,w ith a better li n ear range o f16 9-168 5 g!mL-1(r=0 9999,and R abeprazo

5、le Sodi u m average recovery range o f99 0%to100 8%duri n g tests i n its high,m i d d le and lo w er concentrations(n=9。Conc l u sion:This m ethod i s si m ple,accurate and re li a ble,so it can be used for qua lity contro l of this preparation.K ey w ords:rabeprazo le sodium;assay;related substanc

6、es;H PLC雷貝拉唑鈉(rabeprazo le sod i u m由日本衛(wèi)材公司開發(fā)的新一代質(zhì)子泵抑制劑,與奧美拉唑等第一代抑制劑相比具有較高的pKa值,口服后可在體內(nèi)快速活化,與質(zhì)子泵結(jié)合發(fā)揮抑酸作用。雷貝拉唑鈉在抗分泌作用、抗幽門螺桿菌作用、藥物的相互作用、藥物的安全性以及代謝的多態(tài)性等方面與第一代質(zhì)子泵抑制劑相比具有明顯的優(yōu)點(diǎn)13。目前在國(guó)內(nèi)已上市劑型為腸溶片,江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司研制開發(fā)了注射用雷貝拉唑鈉。雷貝拉唑鈉及其制劑含量測(cè)定已有文獻(xiàn)報(bào)道,雷貝拉唑采用非水溶液滴定法4,腸溶片采用HPLC法5,報(bào)道的色譜條件不但主藥與降解產(chǎn)物峰分離效果不好,而且供試品溶液放置易降解。本文采

7、用HPLC法測(cè)定注射用雷貝拉唑鈉的含量及有關(guān)物質(zhì),結(jié)果可靠,重現(xiàn)性好,可用于該藥的質(zhì)量控制。1 儀器與試劑島津LC-10Avp高效液相色譜儀(日本島津公司;UV-2401PC紫外-可見分光光度計(jì)(日本島津公司。注射用雷貝拉唑鈉由江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司提供,規(guī)格:20mg,批號(hào):20060523, 20060528,20060602;雷貝拉唑鈉對(duì)照品由南京海光應(yīng)用化學(xué)研究所提供,含量采用非水滴定法測(cè)定為99 72%。乙腈為色譜純,其余試劑均為分析純。2 色譜條件和系統(tǒng)適用性色譜柱:Sh i m adzu CLC-ODS柱(150mm 4 6 mm,5 m;流動(dòng)相:磷酸鹽緩沖液(取磷酸氫二鈉1 1

8、19g和磷酸二氫鈉0 179g,加水1000mL溶解 -乙腈(6040;流速:1 0m L!m i n-1;檢測(cè)波長(zhǎng):*通訊作者 Te:l(02551198909;E-ma i:l n j chenxf yahoo co m cn292nm;進(jìn)樣體積20 L 。理論板數(shù)按雷貝拉唑鈉峰計(jì)算不低于2000,雷貝拉唑鈉與各雜質(zhì)間的分離度應(yīng)符合規(guī)定。3 方法的專屬性考察3 1空白試驗(yàn)取處方量的空白輔料甘露醇加0 001m o l !L -1氫氧化鈉溶液溶解并稀釋,量取20 L 進(jìn)樣,結(jié)果可見稀釋液及輔料對(duì)含量與有關(guān)物質(zhì)檢查均無干擾,色譜圖見圖1。3 2酸破壞取本品(20060523批適量(約相當(dāng)于雷貝

9、拉唑15m g,置50m L 量瓶中,加0 1m o l !L -1鹽酸溶液4mL ,于室溫條件下放置4h ,用堿中和后,加0 001m ol !L -1氫氧化鈉溶液稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液進(jìn)樣20 L,記錄主峰保留時(shí)間2倍的色譜圖。3 3堿破壞取本品(20060523批適量(約相當(dāng)于雷貝拉唑15m g,置50m L 量瓶中,加0 1m o l !L -1氫氧化鈉溶液4mL,于室溫條件下放置4h,用酸中和后,再加0 001m o l !L -1氫氧化鈉溶液稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液進(jìn)樣20 L,記錄主峰保留時(shí)間2倍的色譜圖。3 4氧化破壞取本品(20060523批適量(約相當(dāng)于雷

10、貝拉唑15m g,置50mL 量瓶中,加30%過氧化氫2mL ,于室溫條件下放置4h 后,加0 001mo l !L -1氫氧化鈉溶液稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液進(jìn)樣20 L ,記錄主峰保留時(shí)間2倍的色譜圖。3 5光照破壞取本品(20060523批適量(約相當(dāng)于雷貝拉唑15mg ,置50mL 量瓶中,加0 001m ol !L -1氫氧化鈉溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻,置強(qiáng)光條件下(4500Lx 放置4h 后,取出,濾過,取續(xù)濾液進(jìn)樣20 L ,記錄主峰保留時(shí)間2倍的色譜圖。3 6高溫破壞取本品(20060523批適量(約相當(dāng)于雷貝拉唑15mg ,置50mL 量瓶中,加0 001m ol !

11、L -1氫氧化鈉溶液使溶解并稀釋至刻度,置100#水浴上加熱4h 取出,冷卻,濾過,取續(xù)濾液進(jìn)樣20 L ,記錄主峰保留時(shí)間2倍的色譜圖。測(cè)試結(jié)果表明:該方法專屬性強(qiáng),能有效檢測(cè)本品經(jīng)酸、堿、氧化、光照、熱破壞后產(chǎn)生的降解產(chǎn)物等雜質(zhì),說明本色譜條件可行。色譜圖見圖1。 圖1H PLC 法專屬性考察圖譜Fi g 1 Ch ro m at ogra m s of t h e specificit y validati on A.輔料及稀釋液(access ory and d il u ent B.未破壞(no da m ageC .酸降解產(chǎn)物(degradati on product s i n

12、acid m ed i um D .堿降解產(chǎn)物(degradation produ cts i n a l kali ne m ed i um E.氧破壞產(chǎn)物(degradati on p roducts i n oxidati on m ed i um F .氧化劑(oxi d antG .光破壞產(chǎn)物(degradationproducts under strong lightH.熱降解產(chǎn)物(degradati on p roducts under h igh te m perat ure1.雷貝拉唑鈉(rab epraz o l e sod i um 4 含量測(cè)定的方法學(xué)研究4 1線性關(guān)系

13、取雷貝拉唑鈉對(duì)照品適量(約相當(dāng)于雷貝拉唑20m g,精密稱定,置50mL量瓶中,加0 001m o l!L-1氫氧化鈉溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻,分別精密量取該溶液1,3,5,7,10mL,置25mL量瓶中,加0 001m o l!L-1氫氧化鈉溶液稀釋至刻度,配制成系列對(duì)照品溶液,精密量取各溶液20 L分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖,以雷貝拉唑鈉峰峰面積A對(duì)溶液濃度C( g!mL-1進(jìn)行線性回歸,得到回歸方程:A=1578 3C-51 516r=0 9999結(jié)果表明:雷貝拉唑鈉在16 9168 5 g!mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。4 2定量限、檢測(cè)限取4 1%項(xiàng)下最低濃度的溶液用0 00

14、1m o l!L-1氫氧化鈉溶液逐級(jí)稀釋,取20 L進(jìn)樣,記錄色譜圖。按信噪比S/N=10計(jì)算定量限為2ng;按信噪比S/N=3計(jì)算檢測(cè)限為0 6 ng。4 3精密度試驗(yàn)取4 1%項(xiàng)下中間濃度的溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,結(jié)果雷貝拉唑鈉峰面積的RSD為0 66%,表明進(jìn)樣精密度良好。4 4 回收率試驗(yàn)按照制劑處方配制樣品,其中雷貝拉唑鈉對(duì)照品分別按處方量的80%,100%, 120%投料,照6%項(xiàng)下測(cè)定方法制備樣品溶液,每個(gè)濃度測(cè)定3份樣品,計(jì)算平均回收率。結(jié)果低、中、高3種濃度的平均回收率分別為99 0%, 100 8%,99 4%;RSD分別為1 01%,0 69%, 0 83%。4 5重現(xiàn)性試驗(yàn)

15、取同一批號(hào)注射用雷貝拉唑鈉(批號(hào):20060523,按6%項(xiàng)下方法測(cè)定雷貝拉唑鈉的含量,共測(cè)定6次,結(jié)果含量測(cè)定的平均值為99 52%,RSD為0 22%,表明本方法重現(xiàn)性良好。4 6穩(wěn)定性試驗(yàn)取4 5%項(xiàng)下的供試品溶液,分別在室溫放置0,1,2,4,6,8,12h后測(cè)定,結(jié)果雷貝拉唑鈉的峰面積RSD為0 34%,表明雷貝拉唑鈉溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。5 有關(guān)物質(zhì)取本品適量(約相當(dāng)于雷貝拉唑15mg,精密稱定,用0 001mo l!L-1氫氧化鈉溶液配制成濃度為0 3mg!mL-1的供試品溶液和濃度為3 g! mL-1的對(duì)照溶液。量取對(duì)照溶液20 L注入液相色譜儀,調(diào)節(jié)儀器檢測(cè)靈敏度,使雷貝拉唑鈉

16、峰高為滿量程的20%25%;再量取供試品溶液20 L注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的2倍。量取所有雜質(zhì)峰面積的和與對(duì)照溶液主峰面積比較,測(cè)定本品3批(20060523,20060528,20060602的有關(guān)物質(zhì)分別為0 45%,0 38%,0 49%。6含量測(cè)定取本品5瓶分別測(cè)定每瓶裝量,計(jì)算平均裝量,取內(nèi)容物適量(約相當(dāng)于雷貝拉唑20m g,精密稱定,用0 001m o l!L-1氫氧化鈉溶液溶解并稀釋制成濃度為80 g!mL-1的供試品溶液,精密量取20 L,注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另取雷貝拉唑鈉對(duì)照品適量,同法測(cè)定,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算,測(cè)得本品3批(20060523,2

17、0060528,20060602的含量分別為99 57%,103 1%,101 1%。色譜圖見圖2。圖2對(duì)照品(A和樣品(B色譜圖F i g2C hro m atogra m s of referen ce(Aand sa mp le(B1.雷貝拉唑鈉(rabep razole sod i um7 討論7 1 稀釋液的選擇因雷貝拉唑鈉在酸性及中性溶劑中不穩(wěn)定,在堿性溶劑中穩(wěn)定,故有關(guān)物質(zhì)及含量測(cè)定均選擇0 001m o l!L-1的氫氧化鈉溶液作為樣品配制的稀釋液。7 2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取雷貝拉唑鈉適量,分別加流動(dòng)相及稀釋液(0 001m o l!L-1氫氧化鈉溶液溶解并制成濃度為12 g!m

18、L-1的溶液,在450190 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)繪制吸收曲線圖,結(jié)果可見本品在兩種溶液中于292n m波長(zhǎng)處均有最大吸收,故選擇292nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。7 3 專屬性考察空白試驗(yàn)表明稀釋液及輔料對(duì)測(cè)定無干擾;破壞試驗(yàn)表明本品在堿性條件下較穩(wěn)定,在酸性、氧化、強(qiáng)光、熱條件下均易產(chǎn)生降解產(chǎn)物,且各降解產(chǎn)物均與主峰分離良好,不影響含量測(cè)定及有關(guān)物質(zhì)檢查。7 4 本文所建立的HPLC方法靈敏、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng),雷貝拉唑鈉濃度在16 9168 5 g!mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,本法操作簡(jiǎn)便,可同時(shí)測(cè)定含量及有關(guān)物質(zhì)。參考文獻(xiàn)1 M AO Yu(毛煜,SHE Jia-hong(佘佳紅,YUAN B

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22、inar% 應(yīng)亞太經(jīng)合組織(APEC生命科學(xué)創(chuàng)新論壇(LSI F%的邀請(qǐng),中國(guó)藥品生物制品檢定所常務(wù)副所長(zhǎng)金少鴻教授與叢佳處長(zhǎng)參加了2009年2月17日2009年2月20日在墨西哥舉行的以保護(hù)病人健康、建立國(guó)際合作(Bu ilding Internati o na lCooperation to Protect Patients%為主題的打擊假藥和藥品安全研討會(huì)%(Anti-Counterfe iti n g M ed i c al Products and Phar m aceu tica l Pr oducts Safety Se m inar%。應(yīng)大會(huì)組委會(huì)的要求,金少鴻教授作了關(guān)于中國(guó)檢測(cè)偽劣藥品行動(dòng)規(guī)劃成功事例(Success Sto r yCh i n a Counter fe itM ed icine Detecti o n Progra m的大會(huì)報(bào)告。參加此次研討會(huì)的104名代表分別來自墨西哥、新加坡、馬來西亞、印度尼西亞、越南、秘魯、巴拿馬、阿根廷、巴西、洪都拉斯、美國(guó)、英國(guó)、中國(guó)等40多個(gè)國(guó)家和地區(qū),世界衛(wèi)生組織(WHO總部專門負(fù)責(zé)藥品打假工作