注射用鹽酸槐定堿對(duì)血管刺激性、溶血、過敏性試驗(yàn)研究

1、         08-05-19 10:24:00     編輯：studa20                 作者：梁新麗 廖正根 高秀蛟 張萍【摘要】  目的觀察注射用鹽酸槐定堿是否具有血管刺激性、溶血和過敏性反應(yīng)。方法家兔耳緣靜脈注射注射用鹽酸槐定堿8.3 ml/kg，qd×5

2、d，停藥96 h后對(duì)注射部位做病理組織學(xué)檢查；體外不同濃度的注射用鹽酸槐定堿0.10.5 ml在5 ml兔紅細(xì)胞混懸液中放置0.2524 h，觀察對(duì)兔紅細(xì)胞懸液的溶血作用及有無紅細(xì)胞凝聚作用；給豚鼠隔日腹腔注射不同濃度注射用鹽酸槐定堿0.5 ml，連續(xù)注射3次，分別在第1次注射后第14天及21天從靜脈給予注射用鹽酸槐定堿1 ml，觀察30 min內(nèi)是否出現(xiàn)過敏反應(yīng)；取大鼠，背部皮內(nèi)注射含IgE的抗血清，24 h后靜脈注射含注射用鹽酸槐定堿的0.8%伊文思蘭溶液1 ml攻擊，30 min后處死動(dòng)物，觀察注射點(diǎn)皮膚藍(lán)色反應(yīng)斑點(diǎn)直徑。結(jié)果注射用鹽酸槐定堿對(duì)家兔血管內(nèi)皮沒有損傷和刺激作用；對(duì)兔紅細(xì)胞沒

3、有致溶血作用和凝聚作用；豚鼠未出現(xiàn)過敏反應(yīng)。結(jié)論注射用鹽酸槐定堿用藥血管沒有刺激性反應(yīng)，無溶血及紅細(xì)胞凝聚現(xiàn)象，對(duì)豚鼠無致敏作用且大鼠無同種被動(dòng)皮膚過敏作用。制劑有關(guān)安全性檢測(cè)結(jié)果符合新藥申報(bào)要求。 【關(guān)鍵詞】  注射用鹽酸槐定堿； 血管刺激； 溶血； 全身主動(dòng)過敏反應(yīng)； 被動(dòng)皮膚過敏；Experimental Studies of Sophoridine Hydrochloride for Injection on Vascular Stimulation, Hemolysis, and SensitizationAbstract：Objective To observe whet

4、her Sophoridine Hydrochloride for Injection has vascular stimulation,hemolyzation,agglutination and sensitization. MethodsThe vascular stimulative assay of Sophoridine Hydrochloride for Injection was injected to rabbit at the dose of 8.3 mg·kg - 1 , qd for 5 d. Pathology histology examine of in

5、jection place after stoping remedy 96 hours was made.Hemolyzation or agglutination of it in vitro was set at the concent ration of 0. 10. 5 ml for 0. 524 h. The allergic reaction on guinea pig in vivo and rat in skin were performed.ResultsIt showed that the Sophoridine Hydrochloride for Injection ha

6、d no vascular irritation and injury effect on rabbit vascular endothelial cell. No evidences of hemolyzation and aggregation on rabbit erythrocyte in vitro,and no allergic reaction on guinea pig in vivo and rat skin were observed. ConclusionThere is no vascular stimulation on rabbit vascular endothe

7、lial cell and sensitization on guinea pig in vivo, sensitization on rat in skin, and no hemolyzation oragglutination on rabbit red blood cells in vitro. These results of preparation safety will fit the new drugs application requirements.Key words：Sophoridine Hydrochloride for Injection;  Stimul

8、ation of vas cular;  Hemolysis;  ASA;  PCA     婦科惡性腫瘤是最常見的腫瘤之一,它嚴(yán)重影響了婦女的生活質(zhì)量和生命時(shí)間?；倍▔A是從苦豆子中提取的單體生物堿，純度高達(dá)995 以上，槐定堿(Sophoridine)及其制劑鹽酸槐定堿注射液(Sophoridine Hydrochloride Injection) 是由江西中醫(yī)學(xué)院研制、擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)國家一類抗癌新藥，已于20050822獲國家食品藥品監(jiān)督管理局(SFDA)頒發(fā)的新藥證書及藥品批準(zhǔn)文號(hào)。鹽酸槐定堿注射液臨床上用于惡性滋養(yǎng)細(xì)胞瘤、惡

9、性淋巴瘤、消化道癌、肺癌、鼻咽癌、鼻腔鱗癌、乳腺癌等惡性腫瘤。療效確切，毒副作用極低，不降低紅細(xì)胞，不抑制骨髓。與同類產(chǎn)品比較，可明顯降低患者治療痛苦和輔助治療的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。注射用鹽酸槐定堿是以人工槐定堿為原料制成的凍干粉針劑，本研究按照國家藥品監(jiān)督管理局注射劑研制指導(dǎo)原則有關(guān)安全性試驗(yàn)項(xiàng)目要求進(jìn)行了血管刺激、溶血、過敏實(shí)驗(yàn),為臨床應(yīng)用提供依據(jù)1。1  材料1.1  藥物注射用鹽酸槐定堿：江西中醫(yī)學(xué)院中藥現(xiàn)代制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。    5%葡萄糖注射液，四川科倫，批號(hào)：060219E；甲醛，上海實(shí)意化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20050328；

10、白蛋白，上海伯奧生物科技有限公司，批號(hào)：050114；牛血清白蛋白，上海伯奧生物科技有限公司，批號(hào)：050119；白百破三聯(lián)疫苗，武漢生物制品研究所，批號(hào)：20060202-4；伊文思蘭，中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào)：F20030114。1.2  受試動(dòng)物 日本大耳白家兔，體重23 kg，雌雄兼用，由南京市江寧區(qū)青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)供給；荷蘭豚鼠，體重200250 g，雄性，由南京市江寧區(qū)青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)提供，許可證號(hào)：SCXK（蘇）20020027。 SD大鼠，體重180220 g，雄性，購于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物責(zé)任有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXKC（滬20030003）。2&

11、#160; 方法262.1  血管刺激性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)開始前，動(dòng)物預(yù)先飼養(yǎng)1周以觀察其活動(dòng)表現(xiàn)，動(dòng)物室溫度2224，濕度40%60%，取家兔3只，右側(cè)耳緣靜脈以無菌操作方法注射濃度為10 mg/ml的注射用鹽酸槐定堿8.3 ml/kg，左側(cè)耳緣靜脈注射等體積5%葡萄糖注射液，1次/d，連續(xù)給藥5 d。上述兩組均分別于末次給藥后96 h，肉眼觀察注射部位有無紅腫、充血等刺激現(xiàn)象，處死動(dòng)物，以耳緣靜脈注射點(diǎn)至向心方向，連續(xù)取3段血管連同周圍組織，每段1 cm，用10甲醛溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切5 m薄片，HE染色，光鏡下做組織學(xué)檢查，另一側(cè)對(duì)照血管也同法處理。2.2  溶血實(shí)

12、驗(yàn)2.2.1  2兔紅細(xì)胞混懸液制備取健康家兔1只，自心臟取血約20 ml，置于三角瓶中，用玻璃棒攪拌，除去纖維蛋白，然后將血移入刻度離心管內(nèi)，加入生理鹽水10 ml，混勻后離心5 min（2 0002 500 r/min），去除上清液，再加生理鹽水混勻離心，反復(fù)洗滌34次，至上清液無色透明，將所得紅細(xì)胞按其容積用生理鹽水稀釋成2%的混懸液。2.2.2  方法取干凈試管7支，編號(hào)排列于試管架上，按表1配比量依次加入2%兔紅細(xì)胞混懸液和生理鹽水，混勻后，置于37恒溫箱中30 min，然后分別加入不同量的藥液（第6管為陰性對(duì)照管，第7管為陽性對(duì)照管），搖勻，置37恒溫箱中進(jìn)行溫

13、育，觀察15，30，45 min，1，2，3，24 h有無溶血及凝集情況。表1  注射用鹽酸槐定堿的溶血性實(shí)驗(yàn)（略）結(jié)果判定：    全溶血：溶液澄明紅色，管底無細(xì)胞殘留。    部分溶血：溶液澄明紅色或棕色，管底有少量紅細(xì)胞殘留。    無溶血：紅細(xì)胞全部下沉，上層液體無色澄明。    凝集：雖不溶血，但出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，振搖后不能分散。2.3  全身主動(dòng)過敏實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)開始前，動(dòng)物預(yù)先飼養(yǎng)1周以觀察其活動(dòng)表現(xiàn)，動(dòng)物室溫度2224，濕度40%60%，取48只健康雄性豚鼠，隨機(jī)分成 5葡萄糖注射液組、陽性藥物組（白蛋白組）、注射用鹽酸槐定堿大劑量組、小劑量組，每組1