紫蘇提取物抗氧化活性及酚性成分的研究

1、紫蘇提取物抗氧化活性及酚性成分的研究                       作者：馮蓉潔， 呂佩惠， 盛振華， 吳巧鳳【摘要】  目的研究紫蘇體外抗氧化活性。方法在測定紫蘇各酚性成分含量基礎上，采用體外抗氧化實驗，研究其DPPH清除能力、總還原力和抗脂質體氧化能力。結果75%乙醇和50%丙酮提取物具有良好的抗氧化活性；紫蘇提取物中總黃酮、原花色素含量與其抗氧化能

2、力之間呈正相關。結論紫蘇有顯著的抗氧化活性，呈一定的量-效關系。其抗氧化活性可能與黃酮類化合物有關。論文學術科研網(wǎng)紫蘇提取物可作為一種良好的天然抗氧化劑應用于臨床。 【關鍵詞】  紫蘇 總黃酮 原花色素 抗氧化活性紫蘇為唇形科紫蘇屬Perilla frutescens (L.) Britt.一年生草本植物，是傳統(tǒng)的藥食兩用中藥，在江浙各地均有種植，資源豐富，價格低廉。其主要含有紫蘇苷、原花色素、紫蘇素、木犀草素和芹黃素等多酚類化合物，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗衰老、清除和抑制自由基等作用1。有研究表明，紫蘇葉中含有豐富的黃酮類化合物，具有清除自由基、抗衰老作用；紫蘇的水溶性色素亦具有一定的抗

3、氧化活性23。目前國內外研究主要集中在紫蘇籽揮發(fā)油成分上，對紫蘇尤其是紫蘇的酚性成分研究較少。本文通過體外抗氧化實驗，確定紫蘇有效部位抗氧化活性及酚性成分組成，為其臨床應用及各種成分的抗氧化藥理作用研究提供理論依據(jù)。1  儀器及試劑1.1  儀器BS224S精密電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司),TU-1900雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限公司），KQ-250DE數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。1.2  試劑和材料紫蘇采自浙江杭州，經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學資源鑒定教研室姚振生教授鑒定為唇形科紫蘇屬植物Perilla frutescens

4、(L.) Britt.，粉碎后過40目篩。蘆?。ㄅ?00080-20030）、兒茶素（批號877-200001）、沒食子酸（批號110831-200302），均購自中國藥品生物制品檢定所；大豆卵磷脂（批號2075523）、DPPH（批號095K1452），均購自sigma公司。其他試劑均為分析純。2  方法與結果2.1  供試品溶液的制備取5 g紫蘇藥材粉末，分別按表1加入20倍量提取溶劑，70水浴提取2次，1 h/次，合并濾液，濃縮至干，臨用前配成所需濃度，作為供試品溶液。2.2  紫蘇酚性物質的含量測定46采用FeCl3-K3Fe(CN)6比色法，以沒食子酸

5、為標樣制作標準曲線，測定紫蘇中總酚酸含量；采用香草醛/硫酸比色法，以兒茶素為標樣制作標準曲線，測定其原花色素含量；采用堿式鋁鹽比色法，以蘆丁為標樣制作標準曲線，測定其總黃酮含量。2.3  抗氧化活性實驗792.3.1  清除自由基活力取提取物適量，加入25 g/ml的DPPH甲醇溶液3.5 ml，快速混勻，30 min后測定在516 nm處的吸光度。計算DPPH清除率：清除率(%)=（1- DPPHt/DPPHt=0）×100%。    其中DPPHt表示30 min時體系的吸光度；DPPHt=0表示0時刻體系的吸光度。2.3.2&#

6、160; 還原力測定取提取物適量，加入磷酸緩沖液（0.2 mol/L，pH 6.6）2.5 ml及1%鐵氰化鉀溶液1.5 ml，50保溫20 min后，加入10%三氯乙酸1.5 ml，混勻后取2.5 ml，加入蒸餾水2.5 ml及0.1%三氯化鐵0.3 ml。在700 nm處測定反應液吸光度值。吸光度值越大，表示還原力越強。2.3.3  脂質體氧化法將大豆卵磷脂分散于去離子水中，20 kHz超聲波處理30 min，周圍以冰水冷卻，制得大豆磷脂濃度為0.8%的人工脂質體。取20 ml脂質體，加入提取物，以10 mmol乙酸銅20 l催化氧化反應，混勻后放置于回轉式恒溫水浴振蕩器上，于暗

7、處37、100 r/min進行開口氧化實驗，每隔一定時間測定共軛二烯氫過氧化物及丙二醛生成量。    共軛二烯氫過氧化物(CD)的測定：取1 ml氧化液，溶于3 ml甲醇，于234 nm處測定其吸光度，以摩爾消光系數(shù)=26 000 L?mol-1?cm-1計算脂質體體系中共軛二烯氫過氧化物的生成量（mmol/kg卵磷脂）。    丙二醛（MDA）的測定：取1.5 ml氧化液，加入1 ml MDA溶液，測定在532 nm處的吸光度，以摩爾消光系數(shù)=1.56×105 L?mol-1?cm-1計算丙二醛的生成量（mmol/kg卵磷

8、脂）。    抗氧化效果用抑制率表示：抑制率(%)=（1-處理氧化產(chǎn)物生成量/空白氧化產(chǎn)物生成量）×100%    結果見表1及圖14。表1  紫蘇酚性物質組成及抗氧化作用結果（略）圖1  紫蘇提取物的還原力圖2  紫蘇提取物對DPPH的清除作用（略）圖3  丙二醛的生成（略）    由表1和圖14可知，紫蘇各提取物均具有較強的抗氧化活性，可提高自由基的清除率，促進Fe3+的還原和抑制卵磷脂氧化產(chǎn)物的生成。其中，75%乙醇提取物自由基的清除率最強，50%丙

9、酮提取物的還原力最強，兩者均可顯著抑制自由基的產(chǎn)生，延長CD生成的峰值時間，減少同期各時段MDA的生成量。學術科研網(wǎng)圖4  共軛二烯氫過氧化物的生成（略）2.4  酚性物質組成與抗氧化活性相關性分析以原花色素(X1)、總黃酮(X2)和總酚酸(X3)含量為橫坐標，還原力(Y)為縱坐標，采用SPSS11.5軟件對表1結果進行線性關系考察，得方差分析結果(見表2)和回歸標準殘差正態(tài)P-P圖（圖5）。表2  方差分析表（略）由表2和圖5可知，P<0.01，自變量(Xn)與因變量(Y)服從正態(tài)分布，證明紫蘇各酚性物質含量與還原力之間存在顯著的線性關系。進而作多元線性回

10、歸分析，得回歸系數(shù)分析。結果見表3。圖5  回歸標準殘差正態(tài)P-P圖（略）表3  回歸系數(shù)分析（略）由表3可知，紫蘇酚性物質含量對還原力的總體回歸方程為：Y=0.160-0.534X1+0.024 92X2+0.018 29X3。    為消除度量單位的影響，進一步采用標準化計算，得標準化回歸方程：Y=-0.491X1+0.468X2+0.056X3。    在95%可信區(qū)間內，線性相關系數(shù)r=0.982 8。證明回歸方程真實、可靠，具有統(tǒng)計學意義?？捎糜谔娲鷮嶒烖c對實驗結果進行分析，并對回歸方程各項作顯著性檢驗。

11、    其中，總酚酸含量對還原力的影響P>0.05，無顯著性差異。而原花色素及總黃酮含量P<0.05，存在顯著性差異，具有統(tǒng)計學意義。對還原力與紫蘇提取物進行線性關系考察。結果見圖67。原花色素及總黃酮含量與還原力具有較強的相關性，相關系數(shù)分別為0.960 6和0.955 5。圖6  紫蘇提取物抗氧化活力與原花色素含量的關系（略）圖7  紫蘇提取物抗氧化活力與總黃酮含量的關系（略）    同法，對紫蘇提取物與自由基清除率、CD抑制率及MDA抑制率進行相關性研究，結果表明，總黃酮及原花色素含量與自由基清除

12、率之間相關系數(shù)分別為0.827 1和0.807 3，具有一定相關性。其余相關性均較差（R20.6，P>0.10），無統(tǒng)計學意義。    因此，紫蘇體外抗氧化作用主要可能與其總黃酮及原花色素含量有關，并且其抗氧化作用隨著提取溶劑極性增大而增強。3  討論    自由基是生物體生化反應的普遍介質?，F(xiàn)代研究表明，許多疾病如心腦血管疾病、肝硬化、癌癥以及人體衰老等過程都與自由基的作用有關10。目前在醫(yī)療和食品領域使用較多的是合成抗氧化劑，如BHT、BHA等，對生物體有潛在的毒副作用。黃酮類化合物是一種天然的抗氧化劑，具有抗衰老

13、、增強機體免疫力的作用。其主要通過酚羥基與自由基進行抽氫反應生成穩(wěn)定的半醌自由基，從而中斷鏈式反應，達到抗氧化作用，且高效、低毒11。因此，越來越受到國內外醫(yī)藥工作者的重視。    現(xiàn)代研究表明，紫蘇中黃酮類化合物具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗衰老、清除和抑制自由基等作用,幾乎可與人工合成抗氧化劑BHA 媲美,且安全無毒副作用12。本研究通過體外抗氧化實驗，考察紫蘇各提取部位DPPH清除能力、總還原力和抗脂質體氧化能力，并對各酚性成分進行含量測定。實驗表明，75%乙醇和50%丙酮提取物具有良好的抗氧化活性；其中總黃酮和原花色素含量與自由基清除率、還原力呈正相關，黃酮類化合物可

14、能是其抗氧化作用的主要物質基礎，可為紫蘇的開發(fā)利用及其藥理作用機制的研究提供參考?！緟⒖嘉墨I】  1 王玉萍,楊峻山,趙楊景,等.紫蘇類中藥化學和藥理的研究概況J.中國藥學雜志,2003,38(4): 250.2 殷朝洲,李保存,何林沖.紫蘇的開發(fā)利用J.植物雜志,1999,4: 18.3 余小林,徐步前,胡卓炎,等.兩種紫蘇水溶性色素物質化學性質的研究J.華南農業(yè)大學學報,2001,1(1):85.4 付煜榮,張萬明,陳桂敏,等.景天三七中沒食子酸和總酚酸含量測定J.中成藥,2006,28(7): 1016.5 Sun B,Ricardo-da-Silva JM,Spranger

15、I.Critical factors of vanillin assay for catechins and proanthocyanidinsJ.J Agric Food Chem,1998,46:4267.6 王薇,余陳歡,吳巧鳳.響應面分析法優(yōu)化白蘇中總黃酮的超聲提取工藝J.中藥材,2007,30 (12):1606.7 Sánchez-Moreno C, Larrauri JA, Saura-Calixto F. Free radical scavenging capacity and inhibition of liqid oxidation of wines,grape juices and related polyphenolic constituentsJ.Food Resint ,1999,32:407.8 Jayaprakasha GK,Singh RP,Sakariah KK.Antioxidant activity of grape seed (Vitis vinifera) extracts on peroxidation models in vitroJ.Food Chem,2001,73:285.9 孫 蕓,徐寶才,谷文英.葡萄籽原花青素抗氧化作用的研究J.中國糧油學報, 2007,22 (6):